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文前军
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贵州医科大学附属医院
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
王兰
贵州医科大学附属医院
洪伟
贵州医科大学
代陆军
贵州医科大学附属医院
莫显刚
贵州医科大学附属医院
张莉
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2017
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钠氢交换体-1敲降对缺氧巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1水平及胆固醇外排的影响
2017年
目的探讨钠氢交换体-1(NHE1)基因敲降对缺氧状态下巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白水平及胆固醇外流的影响。方法感染表达特异靶向NHE1基因短发夹RNA慢病毒(siNHE1)或表达乱码RNA慢病毒(siNC)的RAW264.7细胞缺氧24h,实时定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)检测NHE1 mRNA及蛋白表达水平,用sNARF-1、Fluo-4NW及Suc-LLVY-aminoluciferin分别检测NHE1活性、细胞内钙离子浓度([Ca^2+],)及钙蛋白酶(calpain)活性;免疫印迹检测缺氧状态下ABCA1蛋白水平,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量及^3H-胆固醇法检测胆固醇外流。结果缺氧相对于常氧上调NHE1 mRNA、蛋白水平表达及活性2.48倍、1.28倍和61.96%(P〈0.05),升高[Ca^2+].及calpain活性4.51倍和2.41倍(P〈0.05),而siNHE1降低缺氧细胞NHE1 mRNA、蛋白表达及活性84.95%、60.75%和66.44%(P〈0.05),降低[Ca^2+]。及calpain活性59.23%和54.66%(P〈0.05)。缺氧使ABCA1蛋白水平降低61.67%(P〈0.05),siNHE1使缺氧细胞ABCA1蛋白水平升高56.52%。缺氧使细胞内总胆固醇及胆固醇酯含量增加74.57%和101.81%(均P〈0.05),而siNHE1降低总胆固醇及胆固醇酯34.24%及49.66%(均P〈0.05)。缺氧降低胆固醇外流34.79%,而缺氧条件下siNHE1使胆固醇外流率升高37.80%。结论NHE1可能通过[Ca^2+]。/calpain通路在缺氧诱导ABCA1蛋白水平降低及胆固醇外流异常发挥重要作用。
莫显刚
张莉
张落超
洪伟
王兰
代陆军
文前军
关键词:
三磷酸腺苷结合盒转运体A1
胆固醇
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