王兰
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- 过表达NHE1通过上调钙蛋白酶活性降低RAW264.7细胞ABCA1蛋白表达被引量：4
- 2017年
- 目的探讨过表达钠氢交换体1(NHE1)对RAW264.7细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达的影响。方法采用Ad NHE1腺病毒感染RAW264.7细胞,Western blot法检测NHE1-EGFP融合蛋白的表达,激光共聚焦显微镜技术检测NHE1-EGFP融合蛋白细胞内定位,酸负载p H回复检测NHE1活性,Western blot法检测NHE1-EGFP融合蛋白对RAW264.7细胞ABCA1蛋白水平及钙蛋白酶(calpain)活性的影响,加入calpain抑制剂N-乙酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-L-正亮氨酸(ALLN),Western blot法检测肝脏X受体激动剂TO-901317诱导ABCA1蛋白表达水平的影响。结果 Ad NHE1腺病毒感染RAW264.7细胞后,高表达NHE1-EGFP融合蛋白,定位在细胞质及细胞膜。NHE1-EGFP融合蛋白可降低ABCA1蛋白的表达水平并提高calpain活性,而calpain抑制剂ALLN能阻断ABCA1蛋白表达水平降低。结论 NHE1过表达通过上调calpain活性而降低ABCA1蛋白表达水平。
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- 关键词：RAW264.7细胞
- Ezrin基因沉默通过降低Calpain-1活性抑制血管紧张素Ⅱ诱导的ABCA1降解
- 2018年
- 目的探讨埃兹蛋白（Ezrin）基因表达降低对RAW264.7钙激活中性半胱氨酸蛋白酶（Calpain-1）活性及三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）蛋白表达的影响。方法实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测靶向作用于Ezrin基因的小干扰RNA（siRNA）的抑制效率。Western blot法检测血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及联合加入Ezrin siRNA后Calpain-1的蛋白表达水平变化。Western blot法检测AngⅡ及联合加入Calpain抑制剂N-乙酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-L-正亮氨酸（ALLN）、Ezrin siRNA后对ABCA1蛋白表达水平的影响。结果 Ezrin siRNA转染组较对照组Ezrin的mRNA和蛋白表达均下调（P〈0.05）。Western blot结果显示AngⅡ可上调Calpain-1的活性（4.92±0.23比1.00±0.17,P〈0.05）,而Ezrin siRNA可逆转Calpain-1的活性上调（0.23±0.21比4.92±0.23,P〈0.05）。此外,AngⅡ处理后ABCA1蛋白表达下调（0.167±0.055比0.732±0.072,P〈0.05）,这种作用可被Ezrin siRNA逆转（0.611±0.048比0.167±0.055,P〈0.05）,而给予Calpain抑制剂ALLN干预未能进一步提高ABCA1蛋白水平。结论Ezrin可能通过Calpain-1途径在AngⅡ诱导的ABCA1表达降低过程中发挥重要作用。
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- 关键词：埃兹蛋白三磷酸腺苷结合盒转运体A1
- 缺氧对细胞膜ABCA1降解的影响及其机制研究被引量：4
- 2017年
- 目的探讨缺氧对细胞膜三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)降解的影响及其与钙蛋白酶的相关机制。方法肝X受体激动剂TO-901317刺激RAW264.7细胞24 h,实时定量聚合酶链反应检测ABCA1 m RNA表达水平。生物素标记法提取细胞膜蛋白,Western blot检测细胞膜ABCA1蛋白水平表达。Western blot检测在放线菌酮存在或不存在条件下,TO-901317干预的RAW264.7细胞经过12 h缺氧(1%氧气O_2)处理后细胞膜ABCA1蛋白水平,Suc-LLVY-氨基虫荧光素法检测缺氧细胞内钙蛋白酶活性。RAW264.7细胞给予钙蛋白酶抑制剂ALLN干预,检测细胞膜ABCA1蛋白表达及钙蛋白酶活性。结果 TO-901317上调ABCA1 mRNA及细胞膜蛋白水平表达。无论放线菌酮存在或不存在情况下,缺氧均能降低细胞膜ABCA1蛋白水平,升高钙蛋白酶活性。钙蛋白酶抑制剂ALLN能部分逆转缺氧诱导细胞膜ABCA1蛋白水平降低。结论缺氧可能通过增加钙蛋白酶活性,从而加速细胞膜ABCA1蛋白降解。
- 莫显刚洪伟王兰张莉刘大男代陆军蒋金郜双林
- 关键词：三磷酸腺苷结合盒转运体A1缺氧钙蛋白酶放线菌酮
- 阿米洛利抑制载脂蛋白A1诱导小鼠巨噬细胞ABCA1的降解被引量：1
- 2016年
- 目的探讨钠氢交换体1抑制剂阿米洛利对载脂蛋白A1(Apo A1)诱导小鼠三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)降解的影响。方法给小鼠静脉注射Apo A1后不同时间点收集腹腔巨噬细胞,定量实时聚合酶链反应及Western blot检测巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白水平变化。进而,Apo A1干预8 h小鼠给予腹腔注射阿米洛利或钙蛋白酶抑制剂ALLN,实验分为4组:对照组、阿米洛利组、ALLN组及阿米洛利+ALLN组,Western blot检测巨噬细胞ABCA1蛋白水平,荧光法检测钙蛋白酶活性。结果 Apo A1干预小鼠后ABCA1 mRNA无明显改变,而ABCA1蛋白水平迅速升高,8 h达高峰后逐渐降低。阿米洛利组、ALLN组及阿米洛利+ALLN组ABCA1蛋白水平均比对照组高;在0、4、8 h时间点,阿米洛利组、ALLN组及阿米洛利+ALLN组间ABCA1蛋白水平差异无统计学意义;而在12、16 h时间点,阿米洛利+ALLN组ABCA1蛋白水平较阿米洛利组、ALLN组升高。与对照组比较,阿米洛利组、ALLN组及阿米洛利+ALLN组钙蛋白酶活性均降低;阿米洛利组、ALLN组、阿米洛利+ALLN组3组组间比较,钙蛋白酶活性各时间点均无明显差异。结论阿米洛利在活体内抑制Apo A1诱导ABCA1蛋白降解及钙蛋白酶活性,提示钠氢交换体1可能至少部分通过改变钙蛋白酶活性参与ABCA1的降解。
- 莫显刚王兰洪伟张莉代陆军蒋金
- 关键词：阿米洛利载脂蛋白A1三磷酸腺苷结合盒转运体A1钙蛋白酶
- Ezrin基因敲降对Ox-LDL及血管紧张素Ⅱ诱导Calpain活性、ABCA1降解及细胞内胆固醇含量的影响
- 目的:Ezrin作为Ezrin-Radixin-Moesin(ERM)家族中的细胞骨架蛋白同时也是一种泛表达蛋白,研究表明Ezrin与calpain活性密切相关,ABCA1蛋白是胆固醇逆转运的中心蛋白,calpain可以...
- 王兰
- 关键词：埃兹蛋白三磷酸腺苷结合盒转运体A1
- 文献传递
- 钠氢交换体-1敲降对缺氧巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1水平及胆固醇外排的影响
- 2017年
- 目的探讨钠氢交换体-1（NHE1）基因敲降对缺氧状态下巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）蛋白水平及胆固醇外流的影响。方法感染表达特异靶向NHE1基因短发夹RNA慢病毒（siNHE1）或表达乱码RNA慢病毒（siNC）的RAW264．7细胞缺氧24h，实时定量PCR（qRT-PCR）及免疫印迹（Western blot）检测NHE1 mRNA及蛋白表达水平，用sNARF-1、Fluo-4NW及Suc-LLVY-aminoluciferin分别检测NHE1活性、细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]，）及钙蛋白酶（calpain）活性；免疫印迹检测缺氧状态下ABCA1蛋白水平，高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量及^3H-胆固醇法检测胆固醇外流。结果缺氧相对于常氧上调NHE1 mRNA、蛋白水平表达及活性2．48倍、1．28倍和61．96％（P〈0．05），升高[Ca^2＋]．及calpain活性4．51倍和2．41倍（P〈0．05），而siNHE1降低缺氧细胞NHE1 mRNA、蛋白表达及活性84．95％、60．75％和66．44％（P〈0．05），降低[Ca^2＋]。及calpain活性59．23％和54．66％（P〈0．05）。缺氧使ABCA1蛋白水平降低61．67％（P〈0．05），siNHE1使缺氧细胞ABCA1蛋白水平升高56．52％。缺氧使细胞内总胆固醇及胆固醇酯含量增加74．57％和101．81％（均P〈0．05），而siNHE1降低总胆固醇及胆固醇酯34．24％及49．66％（均P〈0．05）。缺氧降低胆固醇外流34．79％，而缺氧条件下siNHE1使胆固醇外流率升高37．80％。结论NHE1可能通过[Ca^2＋]。／calpain通路在缺氧诱导ABCA1蛋白水平降低及胆固醇外流异常发挥重要作用。
- 莫显刚张莉张落超洪伟王兰代陆军文前军
- 关键词：三磷酸腺苷结合盒转运体A1胆固醇
