洪伟
- 作品数：41 被引量：85H指数：5
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省自然科学基金贵州省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学自然科学总论更多>>
- 艰难拟梭菌PaLoc致病决定区基因座敲除突变株转录组学分析及其减毒验证
- 2022年
- 目的对艰难拟梭菌630(Cd630)菌株和致病决定区基因座(PaLoc)敲除突变株(ΔPaLoc)进行转录组测序和分析,获得Cd630野生型菌株和ΔPaLoc基因的差异性表达谱,并测定野生型Cd630菌株和ΔPaLoc突变株的细胞毒力,为构建艰难拟梭菌全菌减毒疫苗奠定基础。方法对Cd630菌株和ΔPaLoc敲除突变株进行转录组测序,接着对差异表达基因进行筛选,随后对差异基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。最后在非洲绿猴肾细胞(Vero)和人克隆结肠腺癌细胞株(Caco-2)中进行Cd630野生型菌株和ΔPaLoc敲除突变菌株的细胞毒性验证实验。结果转录组数据表明ΔPaLoc突变株毒素基因tcdA、tcdB未转录。CD630_36010、CD630_020910、CD630_02080和cel等基因分别上调17.92、11.40、8.93和7.55倍;编码高丝氨酸脱氢酶的hom2基因、孢子形成蛋白基因CD630_15810、锌结合脱氢酶基因CD630_23230、1-磷酸半乳糖醇5-脱氢酶基因CD630_23240分别下调为野生型的0.06、0.075、0.133和0.183倍。GO和KEGG富集分析结果表明,ΔPaLoc突变株差异转录基因主要富集于密度感应系统、ABC运输系统、双组分系统、磷酸转移酶(PTS)系统、糖代谢通路以及万古霉素耐药相关的通路等。细胞毒力实验结果表明野生型Cd630菌株对Vero细胞和Caco-2细胞具有毒力,ΔPaLoc突变株丧失对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力。结论通过对Cd630和ΔPaLoc突变株进行转录测序,表明毒素基因未转录,其他差异性基因可为进一步研究ΔPaLoc突变株生理生化特征提供指引。细胞毒力实验表明,ΔPaLoc突变株丧失了对Vero细胞和Caco-2细胞的毒力,ΔPaLoc突变株为艰难拟梭菌全菌减毒疫苗的构建奠定了基础。
- 崔古贞周青帅程钦全饶凤琴程玉梅田艳张婷陈峥宏廖健官志忠齐晓岚吴棋洪伟
- 关键词：基因敲除技术细菌毒素
- 艰难梭菌黏附因子研究进展被引量：1
- 2019年
- 艰难梭菌是一种机会性致病菌,是导致抗生素相关性腹泻和伪膜性结肠炎的主要病原菌。在艰难梭菌致病周期中,艰难梭菌黏附于肠壁细胞、进一步产生毒素并入侵肠上皮细胞尤为重要,是其致病过程的关键环节。艰难梭菌黏附过程需要多种黏附因子的参与,目前已知的黏附因子有细胞壁结合蛋白(Cwp6、Cwp8、Cwp2)、S层蛋白(SlpA)、细胞表面蛋白(Cwp66)、热休克蛋白(GroEL)、纤维连接蛋白(Fbps)、鞭毛蛋白(FliC、FliD)及脂蛋白(CD0873)等。本文对艰难梭菌黏附因子的研究进展进行综述。
- 饶凤琴吴昌学崔古贞程玉梅齐晓岚洪伟
- 关键词：艰难梭菌致病机制艰难梭菌感染伪膜性结肠炎肠上皮细胞炎症
- 艰难梭菌中粪肠球菌污染的去除方法被引量：3
- 2019年
- 目的:建立从粪肠球菌-艰难梭菌混合培养物中分离艰难梭菌的方法。方法:取不同厂家脑心浸出液(BHI)培养基、不同抗生素和是否添加羊血(或血清)3种组分进行组合,加入粪肠球菌-艰难梭菌混合物进行培养;显微镜观察不同组分培养基中细菌形态,将不同组分培养基中获得的混合培养物划线固体平板培养基并培养、观察菌落形态及菌落气味,采用16SrDNA测序技术评价不同组合培养基对艰难梭菌的纯化效果。结果:艰难梭菌抗生素抗性实验结果显示,艰难梭菌对氯霉素、克拉霉素和氨苄青霉素敏感,对四环素、D-环丝氨酸和头孢西丁具有抗性;在相同艰难梭菌接种量条件下,不同生产厂家BHI-酵母粉培养基(BHIS)均有艰难梭菌典型的沉淀生成,并伴有浓烈臭鸡蛋气味;显微镜观察发现纯化前艰难梭菌与粪肠球菌共培养物有大量球菌和链球菌、少量杆菌;BHIS-BDC培养基所有视野中无球菌,仅见杆状细菌;BHIS培养基上艰难梭菌仅在平板边缘形成零星菌落,BHIS-BDC培养基表面形成典型艰难梭菌菌落;16SrDNA测序结果表明1~2mm菌落为粪肠球菌,3~5mm菌落为艰难梭菌。结论:不同生产厂家的BHIS培养基对艰难梭菌中粪肠球菌的去除没有明显差异,BHIS培养基中添加羊血、D-环丝氨酸与头孢西丁复合抗生素可去除艰难梭菌中粪肠球菌污染。
- 饶凤琴程玉梅张婷周青帅崔古贞齐晓岚洪伟
- 关键词：重症监护病房结肠炎
- 敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建被引量：3
- 2019年
- 目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换。结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50%;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换。结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株。
- 饶凤琴程玉梅吴昌学王义崔古贞齐晓岚洪伟
- 关键词：艰难梭菌基因敲除毒性基因质粒
- 科学基金资助RNA病毒相关项目统计分析
- 2020年
- 国家自然科学基金资助RNA病毒相关基础研究,主要包括病毒溯源、结构与功能、遗传与演化、以及与宿主相互作用等方面,以揭示病毒产生、传播与致病的物质基础与作用机制,为相关疾病的诊断、预防和治疗提供理论基础。本文主要从项目类型、资助经费、人才培养、资助成果等方面,统计了国家自然科学基金RNA病毒相关获资助项目情况,分析本领域项目资助存在的问题,尝试提出未来发展建议。
- 杜全生祖岩洪伟魏伟
- 关键词：国家自然科学基金RNA病毒统计分析
- 艰难梭菌基因编辑技术研究进展被引量：3
- 2020年
- 艰难梭菌Clostridioesdifficile是一种革兰氏阳性、产芽孢、专性厌氧细菌,是医院相关性腹泻的主要病原体。近年来,随着强毒株的出现(如核糖体027型),其流行性与致死率逐年上升,因此对艰难梭菌生理、生化特征及致病机制的研究受到广泛重视。艰难梭菌生理、生化特征及致病机制研究又以建立其稳定、高效的基因编辑方法为必要前提。借助基因编辑工具,研究者可以扰动艰难梭菌核心生物学过程,在分子水平研究其分子致病机制。如Clos Tron技术在艰难梭菌毒素A (Toxin A)和毒素B (Toxin B)与其致病力关系的研究中起到了关键作用。文中以时间为主线综述了艰难梭菌基因编辑技术的发展历程和最新进展,并对艰难梭菌基因编辑技术未来的研究方向进行展望。
- 洪伟万雯万雯官志忠官志忠禹文峰
- 关键词：艰难梭菌艰难梭菌感染基因功能研究致病机制
- 贵州梭戛苗族13~17岁青少年的体型特点及发育规律
- 2021年
- 目的探讨贵州六枝梭戛乡苗族(贵州梭戛苗族)13~17岁青少年的体型特点及发育规律。方法采用分层整群抽样,选取世代居住于贵州六枝特区梭戛乡父母均为苗族或父母均为汉族、体检健康的13~17岁青少年各242、707人,将两个民族青少年分为13岁~、14岁~、15岁~、16~17岁4个年龄段,各年龄段又分男性和女性组,测量各年龄段男女性青少年身高、体质量及体质量指数(BMI)评价并比较各组青少年生长发育水平;采用Heath-Cater体型法计算内因子、中因子、外因子、Ponder指数及体型位置距离(SAD)等指标评价各组青少年的体型分类(内胚层型、中胚层型、外胚层型及中间型);根据SAD大小判断贵州梭戛苗族与其他民族青少年体型之间的差异。结果贵州梭戛苗族青少年男性身高高于女性(P<0.01)、BMI值低于女性(P<0.01),各年龄组男性内因子值小于女性(P<0.05)、外因子值大于女性(P<0.05);各年龄组男性与女性的SAD均大于1,男性体型为中间型和外胚层型,女性体型为内胚层型和中间型;贵州梭戛苗族女性身高及体质量低于汉族(P<0.01);各年龄组贵州梭戛苗族男性与贵州水族男性、广西壮族男性的SAD小于1,与湖南侗族男性、广西仫佬族男性的SAD大于1,贵州梭戛苗族女性与贵州布依族女性、贵州水族女性、广西壮族女性及西藏藏族女性的SAD小于1,与广西南宁汉族女性的SAD大于1。结论贵州梭戛苗族13~17岁青少年中,男性体型类型主要为中间型,表现为体型匀称、外形消瘦、骨骼和肌肉发育一般;女性主要体型为内胚层,体型较男性脂肪含量高,线性程度较低。梭戛苗族青少年生长发育不如当地汉族;梭戛苗族青少年体型与贵州水族、广西壮族相似。
- 喻艳琴赵安宿田薇洪伟陈江张婷王婵娟何燕
- 关键词：青少年体型苗族汉族HEATH-CARTER法
- 唑来膦酸调控NLRP3信号通路抑制脂多糖诱导的破骨细胞分化被引量：4
- 2023年
- 背景:唑来膦酸可抑制骨吸收,但其是否能抑制炎症性骨疾病及其相关机制尚不完全清楚。目的:分析唑来膦酸对脂多糖诱导破骨细胞增殖、分化的影响。方法:利用脂多糖将RAW264.7细胞诱导为破骨细胞,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色鉴定诱导结果。将RAW264.7细胞分5组培养:空白对照组不进行任何干预,对照组加入脂多糖处理,其余3组在加入脂多糖的基础上分别加入0.1,1,5μmol/L的唑来膦酸处理,培养6 h后,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α水平,Western Blot检测NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β、cleaved-caspase-1及肿瘤坏死因子α的蛋白表达。培养第5天,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形成情况,F-actin染色观察破骨细胞肌动蛋白环。结果与结论:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色显示,脂多糖可诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞;②对照组肿瘤坏死因子α水平高于空白对照组(P<0.05),0.1,5μmol/L唑来膦酸组肿瘤坏死因子α水平低于对照组(P<0.05);抗酒石酸酸性磷酸酶染色与F-actin染色显示,1,5μmol/L唑来膦酸可抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞;③与对照组比较,0.1,1,5μmol/L的唑来膦酸均可抑制NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α的蛋白表达(P<0.05),1,5μmol/L的唑来膦酸均可抑制cleaved-caspase-1的蛋白表达(P<0.05);④结果表明,唑来膦酸可抑制脂多糖诱导的破骨细胞分化,该作用可能是通过调控NLRP3信号通路实现的。
- 刘官娟宋娜霍花罗珊珊程余婷熊玥洪伟廖健
- 关键词：唑来膦酸破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶骨感染
- 地方医学院校药学专业分子生物学实验课程改革与探索被引量：5
- 2019年
- 分子生物学是药学专业的一门基础课程,具有知识体系庞杂,实验性极强的特点。作为地方医学院校,立足地方,药学专业主要培养服务于地方的高素质药学人才,分子生物学教学如何与药学专业的人才培养目标相统一是教学改革面临的关键问题。本文通过分析药学专业的人才培养目标及专业特点,提出创新分子生物学实验课程内容、借助多媒体教学手段、加强科研反哺教学等方法,提升实验课程的教学效果,为培养高素质的药学专业人才提供参考。
- 洪伟张婷谢渊沈祥春康惠
- 关键词：药学专业分子生物学实验课程
- 马凡综合征口腔颌面部症状的研究进展
- 2020年
- 马凡综合征(marfan syndrome,MFS)是常染色体显性遗传的结缔组织疾病,由微纤维蛋白1基因突变引起,突变类型多,表型差异大,临床诊断困难。主要造成眼部、骨骼及心血管系统异常。而口腔颌面部异常表现可帮助口腔医生在早期发现马凡综合征。本文就该病的发病机制、口腔颌面部临床表现、诊断及治疗作一综述。
- 周倩廖健程余婷李芳伍超石前会齐昱晗洪伟
- 关键词：马凡综合征常染色体
