王金霞
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 一种能实现蛋白可逆表达的敲入载体构建方法被引量：1
- 2016年
- 在细胞或小鼠中使用Cre重组酶(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)条件性地删除或修饰基因是不可逆的,基因删除后蛋白不能恢复表达。FK506-雷怕霉素结合蛋白FKBP L106P不稳定结构域(FKBP L106P destabilization domain)DD-C-Shield1系统可以解决这个问题,能人为控制蛋白表达或降解,避免胚胎致死。本实验以小GTP酶腺苷二磷酸核糖基化因子6(ADP-ribosylation factor 6,ARF6)为例,借助EL350细菌中Red/ET重组作用,使用DD-C-Shield1系统和重叠延伸PCR方法,发展一种通用的可实现蛋白可逆表达的构建敲入载体的方法。该方法缩短了构建时间,减少了重组的步骤,不需要使用rps L-neo DNA、链霉素和酶切位点。此敲入载体两侧同源臂5 kb左右,可用传统的ES打靶方法构建敲入小鼠,经过简单改造也可使用CRISPR/Cas9方法构建敲入细胞或小鼠模型,从而在细胞和动物模型中进行条件性修饰、快速、可逆地调节特异性蛋白表达,以利于发育学研究,为细胞和活体生物严谨调控蛋白功能提供了一种新的策略。
- 王金霞徐影琪魏政立杨葳张梅英郑志红
- 关键词：重叠延伸PCR
- 条件性控制小鼠基因表达方法的研究进展被引量：1
- 2008年
- 基因的时空表达和可控表达,一直是人们希望解决的问题,在小鼠中可以从DNA、转录、转录后和翻译后四个水平,通过Cre/LoxP、GAL4/UAS和条件性RNA干扰等多种方法实现。本文介绍了条件性控制小鼠基因表达的几种方法及研究进展。
- 王金霞郑志红
- 关键词：基因表达小鼠
- MicroRNA簇剔除胚胎干细胞的研究
- 目的 为了探讨microRNA 簇的生物学意义，建立microRNA 簇剔除胚胎干细胞模型。方法 运用生物信息学手段，确定6 个microRNA 簇基因组的序列，设计基因剔除策略，构建基因剔除载体，以电穿孔方法将基因剔除...
- 王金霞徐影琪王惟杨葳董婉维刘佳李兆阳张梅英郑志红
- 关键词：基因敲除胚胎干细胞SOUTHERNBLOT
