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杨葳: 作品数：53 被引量：98H指数：7; 供职机构：中国医科大学更多>>; 发文基金：辽宁省科学技术计划项目国家自然科学基金国家科技部专项基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>

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抗G418小鼠胚胎干细胞饲养层的制备被引量：8: 2005年; 目的:建立具有G418抗性的 3T3细胞系,用于转染pTet on基因的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法: 通过脂质体转染的方法,将含有neo基因的质粒pWL/neo导入 3T3细胞中,利用G418的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR鉴定。结果:经 500μg/ml的G418压力筛选后,获得了抗G418细胞克隆。抗性 3T3细胞的形态和生长速度与正常 3T3细胞没有差异,用特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出对应的核苷酸片段,Southernblot鉴定结果表明neo基因片段已整合入G418抗性 3T3细胞中。结论:成功地培育了G418抗性的 3T3细胞,为进行pTet on基因转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选奠定了基础。; 张梅英李华董婉维杨葳汪瑛秦英王禄增王太一; 关键词：3T3细胞饲养层胚胎干细胞

抗菌肽转基因小鼠模型的建立被引量：7: 2005年; 目的:制备抗菌肽转基因小鼠模型。方法:显微注射pcDNA3. 1 -PCMG到FVB小鼠受精卵雄原核中,注射存活胚胎移植到假孕母鼠输卵管内发育产生子代小鼠。结果:在生出的 119只小鼠中经PCR和Southernblot检测到 7只阳性。结论:通过显微注射法使外源基因pcDNA3. 1 -PCMG在FVB小鼠基因组中得到整合,为抗菌肽抗菌谱的研究,抗病毒、抗肿瘤机制的研究提供有价值的抗病动物模型。; 李华董婉维孙强张梅英汪瑛杨葳秦英史晓萍王禄增; 关键词：抗菌肽显微注射法转基因小鼠

FVB小鼠超排卵及胚胎冷冻技术的研究被引量：7: 2006年; 目的为制备FVB转基因小鼠及保种繁殖提供最佳超排周龄及胚胎冷冻方法。方法对4—6周、6．8周、8．10周FVB小鼠进行超数排卵效果的比较及采用体外培养受精卵至2-cell法和输卵管吹卵法两种不同方法收集2-cell受精卵进行胚胎冷冻。结果4．6周雌鼠经超排后回收的受精卵（24．6个）明显高于6—8周龄、8—10周龄的FVB雌鼠（14．5个、16．2个），差异有显著性；两种方法回收的2-cell受精卵经冷冻保存后，Ⅱ组受精卵解冻后2-cell形态正常的胚数（106个）高于I组解冻后2-cell形态正常的胚数（90个），但两者无显著性差异。结论本研究将为制备FVB转基因小鼠及转基因动物的种系保存和繁殖提供了基础。; 董婉维周生来杨葳于洋张梅英史晓萍王禄增; 关键词：小鼠超排卵胚胎冷冻

人体内皮细胞系细胞株ECV304细胞低氧模型的制备被引量：1: 2011年; 目的研究人体内皮细胞系细胞株(ECV304)细胞低氧模型的建立条件及其形态学特点。方法培养ECV304细胞,将培养箱内通入5%CO2-95%N2混合气体(氧分压为18.3mmHg)并培养ECV304细胞12h、24h,使用MTT法、酸脱氢酶试剂盒(LDH)活力测定及细胞骨架染色对低氧细胞模型鉴定。结果与正常对照组相比,在低氧条件下12h,ECV304细胞存活率降低,LDH释放增加,但细胞骨架保持完整;在低氧条件下24h,ECV304细胞存活率进一步降低,LDH释放增加更明显,细胞骨架破碎。结论在低氧(氧分压为18.3mmHg)24h条件下,可以建立ECV304细胞低氧模型,同时可以观察到形态学改变。; 苗兰英林大勇白剑杨葳张伯阳王良君杨菁刘书林; 关键词：低氧细胞骨架

TNNT3^(R69H)突变转基因小鼠模型的建立: 2012年; 目的建立TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型。方法构建pEGFP-TNNT3(R69H)转基因构件,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒pEGFP-TNNT3(R69H)注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠。用PCR和Southern blot方法检测子代鼠尾基因组DNA,通过RT-PCR及Western blot的方法检测TNNT3基因表达。结果 8只假孕小鼠共移植注射后的胚胎82枚,出生40只子代鼠,经PCR和Southern方法检测得到5只转基因阳性小鼠。对其子代小鼠进行RT-PCR、Western blot检测结果显示,TNNT3在转基因小鼠心脏和骨骼肌中表达量明显增多。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP-TNNT3(R69H)在小鼠基因组中整合,成功建立了TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型。; 李兆阳吕相川汪瑛杨葳于洋周生来王惟张梅英郑志红; 关键词：转基因小鼠显微注射

英国实验动物福利法律法规浅析被引量：9: 2008年; 杨葳郑志红史晓萍王禄增尚昌连; 关键词：实验动物福利法律法规

胚胎冷冻技术应用于抗菌肽转基因小鼠的保种传代被引量：1: 2007年; 目的研究胚胎冷冻在抗菌肽转基因FVB小鼠保种传代中的应用。方法对6~8周正常雌性FVB小鼠进行超排分别与雄性杂合子抗菌肽转基因FVB小鼠交配，收集2-cell胚胎，进行胚胎冷冻。1周后进行胚胎复苏移植，通过PCR方法对仔代鉴定。结果冻存胚胎140枚，复苏获得存活胚胎98枚，移植85枚，产仔38只，获得阳性后代12只。结论通过胚胎冷冻技术保种及复苏移植技术可对抗菌肽转基因小鼠进行传代。; 周生来董婉维郑志红杨葳张梅英史晓萍王禄增; 关键词：小鼠超排卵胚胎冷冻胚胎移植

具有潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备被引量：2: 2005年; 目的建立具有潮霉素B(hygromycin B)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2 -human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B 磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和Southern blot鉴定。结果经300 μg／ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southern blot 鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞。结论本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES 细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。; 张梅英李华董婉维杨葳秦英汪瑛周生来于洋王惟王太一王禄增; 关键词：NIH3T3细胞转染 ES细胞

人胰岛素转基因小鼠模型的建立: 2005年; 目的:建立人胰岛素的转基因小鼠模型。方法:通过原核显微注射法,把外源基因pEF1α-m INS注射入FVB种小鼠受精卵,胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠获得子代小鼠。结果:移植注射胚胎204枚给38只假孕小鼠共出生108只后代鼠,经PCR和Southern b lot检测到5只阳性小鼠。结论:通过显微注射法使外源基因pEF1-αm INS在小鼠基因组中得到整合,建立了人胰岛素的转基因小鼠模型。; 李华杨葳孙强张梅英董婉维汪瑛秦英史晓萍王禄增; 关键词：人胰岛素显微注射法转基因小鼠

pcDNA3.1/myc-His-DJ-1^(M26I)重组载体构建及其对NIH3T3细胞增殖和凋亡研究被引量：3: 2012年; 目的构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础。方法采用突变试剂盒将DJ-1蛋白第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组表达载体,并采用脂质体介导的方法分别将其转染入NIH3T3细胞,500μg/mL G418压力筛选稳定克隆,对2种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和AnnexinV-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测。结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M26I重组质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(P<0.05),转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率与正常NIH3T3细胞相比无明显差别;细胞凋亡检测表明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组细胞凋亡率高于正常NIH3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞组细胞凋亡率低于正常NIH3T3细胞(P<0.05)。结论成功构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1 M26I重组表达载体,成功筛选出稳定表达人DJ-1及DJ-1 M26I的NIH3T3细胞。DJ-1 M26I基因突变更易导致NIH3T3细胞的凋亡。; 张梅英徐影琪王惟赵越杨葳于萌郭晓冲秦英郑志红; 关键词：DJ-1 NIH3T3细胞凋亡

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