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潮霉素抗性转基因BDF1小鼠模型的建立被引量：1: 2007年; 目的建立具有潮霉素(hygromycin)抗性转基因BDF1小鼠,用于制备携有hygromycin抗性筛选标志ES阳性细胞克隆的饲养层。方法通过显微注射的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因片段(5.1kb)导入BDF1受精卵雄原核中,共注射169枚受精卵,然后将129枚受精卵细胞植入同期受孕的受体母鼠输卵管内。结果共产生37只转基因小鼠,经PCR和Southern检测获得9只阳性小鼠,对一只子代鼠进行RT-PCR检测证明hyg基因已经在肾、肌肉、脾内表达。结论成功的建立具有潮霉素抗性的BDF1转基因鼠,该模型动物可以为基因敲除研究提供良好的基础条件。; 张梅英董婉维汪瑛杨葳李兆阳周生来于洋王惟秦英郑志红王禄增; 关键词：潮霉素饲养层转基因

STK15转基因小鼠模型的建立被引量：2: 2007年; STK15基因是丝/苏氨酸激酶家族成员之一,其扩增和高表达能引起中心体复制扩增,染色体不稳定性增加,最终导致细胞的恶性转化,从而诱发恶性肿瘤。而且,STK15基因在多种恶性肿瘤组织中都具有高表达。目前,研究者们都是通过取人体不同部位的肿瘤组织来研究STK15基因与恶性肿瘤发生发展的关系,本次实验首次以建立STK15转基因小鼠模型,来进一步研究STK15基因与恶性肿瘤的关系,为今后的基因诊治提供理论基础。实验方法是首先提取人胚肺细胞总RNA作为模版,根据GenBank中STK15基因序列设计一对引物,用RT-PCR技术扩增出1200bp的STK15基因片段,克隆到pTZ57R/T载体,通过测序证实序列的正确性。用BamH1和XbaI双酶切载体pcDNA3.1和pTZ57R/T载体-STK15,然后回收、连接pcDNA3.1-STK15、转化、鉴定,从而成功构建了pcDNA3.1-STK15表达载体。然后对小鼠进行超排获得其原核期胚胎,应用显微注射法进行转基因操作,结果是注射成功率77%(701/907),移植鼠共30只,新生小鼠为106只,PCR检测转基因阳性为3只,经过Southern杂交检测有1只转基因阳性鼠,从而建立了转STK15的转基因小鼠模型。通过建立STK15肿瘤动物模型,找出与人类肿瘤相近的病理生理变化以及控制这些变化的遗传基础,为今后所有的恶性肿瘤的基因诊治提供坚实、有力的理论依据。; 朱焱郑志红杨威于洋王维董婉维王禄增; 关键词：STK15 显微注射法小鼠转基因

RNA干扰技术在基因治疗中的应用进展被引量：9: 2009年; RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种双链RNA分子在mRNA水平上关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程,在基因治疗方面有着无可比拟的优势,已成功的应用于肿瘤、病毒感染、遗传性疾病及神经系统疾病等重大疾病的治疗。本文将主要介绍siRNA基因治疗的导入方法与途径,以及在不同疾病中,RNAi技术进行基因治疗的应用。; 董婉维孙开来郑志红; 关键词：RNA干扰 SIRNA 基因治疗

沉默Slug对喉癌Hep-2细胞增殖和细胞侵袭的影响: 2015年; 目的探讨沉默喉癌细胞株Hep-2中Slug基因对细胞增殖和细胞侵袭的影响。方法将靶向Slug基因si RNA转染至喉癌Hep-2细胞,Real time PCR和Western blot方法分别检测转染后Slug m RNA和蛋白表达变化,通过CCK-8法测定Hep-2细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及transwell法检测细胞侵袭力。结果转染Slug-si RNA的实验组Hep-2细胞内slug m RNA和蛋白表达水平与对照组相比明显降低(<0.05),Hep-2细胞增殖能力和侵袭能力显著降低(<0.05)。结论沉默Slug基因可以抑制喉癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,提示Slug基因可能参与喉癌发生发展。; 刘佳高铭郑志红; 关键词：喉癌 SLUG HEP-2细胞

胚胎冷冻技术应用于抗菌肽转基因小鼠的保种传代被引量：1: 2007年; 目的研究胚胎冷冻在抗菌肽转基因FVB小鼠保种传代中的应用。方法对6~8周正常雌性FVB小鼠进行超排分别与雄性杂合子抗菌肽转基因FVB小鼠交配，收集2-cell胚胎，进行胚胎冷冻。1周后进行胚胎复苏移植，通过PCR方法对仔代鉴定。结果冻存胚胎140枚，复苏获得存活胚胎98枚，移植85枚，产仔38只，获得阳性后代12只。结论通过胚胎冷冻技术保种及复苏移植技术可对抗菌肽转基因小鼠进行传代。; 周生来董婉维郑志红杨葳张梅英史晓萍王禄增; 关键词：小鼠超排卵胚胎冷冻胚胎移植

TNNI2突变转基因小鼠模型的建立: 2008年; 目的建立TNNI2突变转基因小鼠模型。方法构建pEGFP-tnni2转基因构件,TNNI2基因的第175个氨基酸缺失,通过原核显微注射法,把线性化、纯化后的外源基因pEGFP-tnni2注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠。用PCR和Southern方法检测子代鼠尾DNA鉴定基因型。通过RT-PCR方法检测tnni2基因表达。结果移植注射胚胎115枚给4只假孕小鼠共出生了23只后代鼠,经PCR和Southern方法检测得到4只阳性小鼠。对其子代进行RT-PCR检测,tnni2基因在肌肉、心脏内表达。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP-tnni2(TNNI2基因的第175个氨基酸缺失)在小鼠基因组中得到整合,建立了转pEGFP-tnni2的转基因小鼠模型。; 杨葳郑志红姜淼李兆阳王惟王禄增; 关键词：显微注射法转基因小鼠

富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障保护作用及机制研究被引量：2: 2016年; 目的探讨富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障的影响及其可能机制。方法清洁级SD大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒血症组(SEP组)及富氢液处理组(C组),每组10只。sham组仅开腹,显露盲肠;C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢液和等量生理盐水。3组大鼠均于模型建立4 h后处死,观察小肠组织病理学结果;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)浓度;蛋白质印迹(Western-blot)法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bax、Caspase-3蛋白表达水平。结果光镜下sham组未出现病理损伤,SEP组损伤较重,C组损伤较轻。与sham组比较,SEP组I-FABP、D-乳酸升高[(817.12±50.39)ng/ml比(378.54±40.50)ng/ml;(513.84±42.91)ng/ml比(329.98±38.11)ng/ml,P<0.05]。与SEP组比较,C组I-FABP、D-乳酸降低[(548.92±42.19)ng/ml比(817.12±50.39)ng/ml;(437.89±36.12)ng/ml比(513.84±42.91)ng/ml,P<0.05]。与sham组比较,SEP组TNF-α、IL-6、IL-10升高[(196.51±30.31)ng/ml比(75.54±10.21)ng/ml;(68.69±3.39)ng/ml比(20.97±2.38)ng/ml;(149.61±20.21)ng/ml比(80.69±13.51)ng/ml,P<0.05];与SEP组比较,C组TNF-α、IL-6降低,IL-10升高[(118.47±10.14)ng/ml比(196.51±30.31)ng/ml;(45.36±5.14)ng/ml比(68.69±3.39)ng/ml;(178.52±26.31)ng/ml比(149.61±20.21)ng/ml,P<0.05]。与sham组比较,SEP组Bcl-2蛋白表达升高,Bax与Caspase-3降低(P<0.05);与SEP组比较,C组Bcl-2蛋白表达降低,Bax与Caspase-3升高(P<0.05)。结论富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,其机制与抑制凋亡相关因子有关。; 陈克研董婉维郑志红; 关键词：脓毒血症肠黏膜屏障细胞凋亡

5-脂氧化酶转基因小鼠表型初步研究: 2015年; 目的建立5-脂氧化酶（5-LO）高表达转基因小鼠模型，为动脉粥样硬化（AS）发病分子机制的研究提供有应用价值的动物模型。方法对5-LO转基因及正常对照小鼠分别选用RT—PCR、免疫组织化学、血脂、血压监测等方法进行分析实验。结果5-LO及大鼠5-脂氧合酶激活蛋白（FLAP）免疫组织化学实验结果显示，在肾和肺中5-LO及FLAP的表达，转基因小鼠高于正常对照组小鼠：RT—PCR实验结果显示，转基因小鼠与正常对照小鼠比较在骨髓细胞、腹腔细胞、脾脏、肾脏中白三烯介质及其受体均有不同程度的高表达。其中，两种小鼠的腹腔细胞和骨髓细胞中白三烯A4（LTA4）、白三烯B4（LTB4）和半胱酰胺-白三烯受体2（Cys—LTR2）的表达存在差异（P〈0．05），脾和肾脏中LTB4、白三烯C4（LTC4）及Cys—LTR2的表达存在差异（P〈0．05），肾脏中半胱酰胺-白三烯受体1（Cys-LTR1）的表达存在差异（P〈0．05）。C反应蛋白（CRP）、白介素-1β（IL-1β）、血小板衍生因子（PDGF）、坏死因子-κB（NF-κB）等细胞因子检测结果显示，在肾组织中转基因小鼠的各项指标显著高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血压测定结果显示，转基因小鼠高于正常对照小鼠（P〈0．05）；血脂检测结果显示，两种小鼠未见明显差异（P〉0．05）。结论成功建立5-LO高表达转基因小鼠模型。; 张梅英杨葳吴红联董婉维周生来于洋王惟郭晓冲郑志红; 关键词：转基因小鼠

eNOS基因敲除大鼠模型的建立及表型初步研究: 2015年; 目的建立内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因敲除大鼠模型。方法利用锌指核酸酶（ZFN）技术，通过显微注射的方法将编码eNOS特异性锌指酶的mRNA注入SD大鼠受精卵并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR产物测序的方法鉴定基因型。对敲除大鼠进行外观观察，HE染色分析组织结构形态。通过Westernblot分析敲除大鼠模型的心脏和肾脏组织中eNOS的表达情况。测量8～16周大鼠体质量，分析eNOS基因敲除对体质量的影响。采用尾套法测量大鼠心率、血压、收缩压和舒张压，比较与野生型大鼠的差异。结果通过显微注射方法共注射441枚受精卵，存活365枚，分别移入12只SD大鼠输卵管，共产出23只F0代大鼠。PCR产物测序分析获得4只阳性原代大鼠，对8号大鼠筛选获得纯合子。阳性纯合子大鼠表现为肢体缺损，HE染色显示动脉血管结构形态异常。Westernblot结果显示，eNOS敲除大鼠的心脏和肾脏组织中不表达eNOS蛋白。敲除大鼠的体质量明显低于野生型大鼠，体质量增长幅度慢。血压、收缩压、舒张压均高于野生型SD大鼠，有极显著差异（P〈0．01）。eNOS敲除雌鼠心率低于野生型SD雌鼠（P〈0．05）。eNOS敲除雄鼠心率与野生型SD雄鼠相比无统计学差异。结论成功建立eNOS基因敲除大鼠模型，该模型或可成为高血压疾病研究的理想动物模型。; 杨葳周生来董婉维王惟于洋郭晓冲张婀娜王宏宇郑志红; 关键词：基因敲除高血压

应用Talen法制备apoE基因敲除大鼠模型: 2015年; 目的应用转录激活因子样效应因子核酸酶（Talen）法制备载脂蛋白E（apoE）基因敲除大鼠模型，为进一步研究apoE基因功能，动脉粥样硬化（AS）疾病发病机制及治疗方法奠定基础。方法设计并合成针对大鼠apoE基因的Talen序列，应用原核显微注射方法制备子代鼠。通过PCR．测序及TA克隆-测序法检测仔鼠中apoE的突变，经传代及兄妹交配获得纯合型仔鼠，并对其基因型进行鉴定。应用Westemblot方法检测apoE-/-仔鼠各组织中ApoE蛋白表达水平；血清学分析血脂总胆固醇（CHO）及甘油三酯（TG）含量；应用RT—PCR方法检测脂质代谢相关基因三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达。结果经鉴定选取在第二外显子处缺失1bp，造成开放阅读框移码突变的大鼠为阳性F0代仔鼠，该鼠经传代及筛选，最终获得apoE-/-大鼠。Westernblot检测显示apoE-/-鼠在心、肝、肾、脑、卵巢组织中未见ApoE蛋白的表达，表明在该模型中成功实现了apoE基因的敲除。apoE-/-鼠血脂CHO、TG均高于野生SD大鼠，其中CHO水平呈现显著性差异（P〈0．05）。在apoE-/-鼠肝组织中ABCA1的表达降低，可能起到促进AS形成的作用。结论应用Talen法成功制备apoE基因敲除SD大鼠；经筛选获得了纯合型apoE-/-大鼠，该模型实现了apoE基因敲除，并表现为高血脂及As性状。; 徐影琪李晓晶杨葳周生来于洋王惟张婀娜赵文张梅英郭大勇王宏宇郑志红

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