王惟
- 作品数：36 被引量：29H指数：3
- 供职机构：中国医科大学更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目辽宁省科学技术基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- TNNT3^(R69H)突变转基因小鼠模型的建立
- 2012年
- 目的建立TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型。方法构建pEGFP-TNNT3(R69H)转基因构件,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒pEGFP-TNNT3(R69H)注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠。用PCR和Southern blot方法检测子代鼠尾基因组DNA,通过RT-PCR及Western blot的方法检测TNNT3基因表达。结果 8只假孕小鼠共移植注射后的胚胎82枚,出生40只子代鼠,经PCR和Southern方法检测得到5只转基因阳性小鼠。对其子代小鼠进行RT-PCR、Western blot检测结果显示,TNNT3在转基因小鼠心脏和骨骼肌中表达量明显增多。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP-TNNT3(R69H)在小鼠基因组中整合,成功建立了TNNT3(R69H)突变转基因小鼠模型。
- 李兆阳吕相川汪瑛杨葳于洋周生来王惟张梅英郑志红
- 关键词：转基因小鼠显微注射
- 人结肠癌ccl227细胞系肿瘤干细胞生长特性研究被引量：1
- 2011年
- 目的:研究体外培养条件下人结肠癌cc l227细胞系肿瘤干细胞的生长特性。方法:用荧光染料Hoechst33342染色培养在SSM和SFM中的cc l227细胞,荧光显微镜观察SP细胞。用6孔板接种的方法绘制cc l227细胞的生长曲线。显微镜观察肿瘤球的生长。结果:在两种培养条件下均观察到cc l227细胞系中存在浅染和拒染的SP细胞。生长曲线显示在两种培养条件下,cc l227细胞的繁殖能力不同。在玻璃培养瓶和低吸附6孔板中均可以培育出肿瘤球,但形态有些不同。结论:SSM和SFM培养条件下,cc l227细胞中均存在SP细胞;在SFM中,cc l227细胞增殖缓慢;SFM可培育出富含肿瘤干细胞的肿瘤球。在低吸附条件下,更易形成悬浮的肿瘤球。
- 时伟红李翀刘津京王惟郑志红
- 关键词：SP细胞结肠癌
- 人结肠癌ccl227细胞肿瘤球生长特性及裸鼠移植瘤形成研究被引量：5
- 2011年
- 目的:研究人结肠癌ccl227细胞肿瘤球的生长特性及裸鼠移植瘤形成。方法:将培养在SSM中的ccl227细胞移入含有生长因子的SFM中接种在低吸附6孔培养板,观察肿瘤球的生长情况。将肿瘤球移回到SSM中,接种在培养皿中,观察肿瘤球的分化。96孔板接种检测ccl227细胞和肿瘤球细胞的克隆形成率。不同数量的ccl227细胞和肿瘤球细胞分别接种裸小鼠,观察移植瘤形成。结果:在SFM及低吸附的培养条件下观察到了肿瘤球的形成,呈悬浮状态,细胞圆而小。被移回到SSM中的肿瘤球,细胞逐渐贴壁、伸展。4.2%ccl227细胞形成克隆,13.5%肿瘤球细胞形成克隆。在裸小鼠移植中,高于106的ccl227细胞产生了移植瘤,而移植肿瘤球细胞仅需103个细胞。结论:在SFM培养条件下,ccl227细胞肿瘤球细胞可富集,血清可促进肿瘤球细胞分化。ccl227肿瘤球细胞比非肿瘤球细胞具有更强的致瘤性。
- 时伟红刘津京王惟周生来郑志红
- 关键词：移植瘤结肠癌
- 大鼠显微注射胚胎采集方法的比较
- 2008年
- 目的优化大鼠显微注射前胚胎采集的方法。方法选用最佳超排5周龄SD大鼠,腹腔注射PMSG-HCG,分别用撕开输卵管壶腹部和输卵管伞端冲洗两种方法采集胚胎,比较获得卵数,受精率,注射存活率等的差异。结果冲洗输卵管伞端采集胚胎的方法所得到的受精率、存活率都较高,与撕开输卵管壶腹部方法比较差异显著(P<0.01),胚胎总数无显著性差异(P>0.05)。结论冲洗输卵管伞端采集胚胎的方法为大鼠显微注射前胚胎采集比较好的方法。
- 于洋周生来王惟吕向川张梅英王禄增郑志红
- 关键词：显微注射胚胎采集
- 制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法被引量：2
- 2008年
- 目的介绍两种制备嵌合体小鼠实验中ES细胞的处理方法。方法一种为差速贴壁分离法即消化后的ES细胞接种在明胶包被的平皿中,利用饲养层细胞与ES细胞贴壁速度的不同来分离ES细胞;另一种方法为冰水浴自然沉淀分离法,即消化后的ES细胞移入15ml离心管中冰水浴,利用细胞间自然沉淀的位置不同分离ES细胞。结果两种方法均可得到足够数量处于未分化状态的ES细胞。结论这两种方法都可以应用于制备嵌合体小鼠实验中的ES细胞处理。
- 王惟于洋张梅英王禄增郑志红
- 关键词：嵌合体小鼠ES细胞
- 潮霉素抗性转基因BDF1小鼠模型的建立被引量：1
- 2007年
- 目的建立具有潮霉素(hygromycin)抗性转基因BDF1小鼠,用于制备携有hygromycin抗性筛选标志ES阳性细胞克隆的饲养层。方法通过显微注射的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因片段(5.1kb)导入BDF1受精卵雄原核中,共注射169枚受精卵,然后将129枚受精卵细胞植入同期受孕的受体母鼠输卵管内。结果共产生37只转基因小鼠,经PCR和Southern检测获得9只阳性小鼠,对一只子代鼠进行RT-PCR检测证明hyg基因已经在肾、肌肉、脾内表达。结论成功的建立具有潮霉素抗性的BDF1转基因鼠,该模型动物可以为基因敲除研究提供良好的基础条件。
- 张梅英董婉维汪瑛杨葳李兆阳周生来于洋王惟秦英郑志红王禄增
- 关键词：潮霉素饲养层转基因
- 绿色荧光蛋白转基因小鼠模型的建立及胚胎冷冻保种被引量：3
- 2007年
- 目的建立绿色荧光蛋白转基因小鼠模型,并采取胚胎冷冻的方法进行保种。方法通过原核显微注射法,把线性化、纯化后的外源基因pEGFP注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠。经鉴定对有表达的转基因鼠进行胚胎冷冻保种。结果移植注射胚胎385枚给30只假孕小鼠共出生了306只后代鼠,经PCR和southern blot检测得到5只阳性小鼠。F2代转基因鼠胚胎冷冻240枚胚胎。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP在小鼠基因组中得到整合,建立了转pEGFP的转基因小鼠模型。
- 汪瑛杨葳郑志红王惟于洋董婉维张梅英王禄增
- 关键词：GFP显微注射法转基因小鼠胚胎冷冻
- 5-脂氧化酶转基因小鼠模型的制备
- 目的建立5-脂氧化酶转基因小鼠,用于动脉粥样硬化的发病机制的研究。方法通过显微注射的方法,将5-脂氧化酶基因片段(6.8kb)导入BDF1受精卵雄原核中,共注射166枚受精卵,然后将90枚受精卵细胞植入同期受孕的受体母鼠...
- 张梅英杨葳李兆阳周生来于洋王惟秦英郑志红王禄增
- 关键词：潮霉素饲养层转基因
- 文献传递
- 人胃癌细胞系HGC-27肿瘤球细胞干样特性研究
- 2012年
- 目的:探讨体外培养条件下人胃癌细胞系HGC-27肿瘤球细胞的干样特性。方法:SFM培养人胃癌细胞系HGC-27的肿瘤球,细胞计数绘制HGC-27细胞和肿瘤球细胞的生长曲线,96孔培养板接种计算细胞的克隆形成能力。结果:成功培养出HGC-27细胞的肿瘤球。生长曲线和克隆形成实验显示,肿瘤球细胞的增殖和克隆形成能力高于HGC-27细胞。结论:HGC-27细胞可以培养成肿瘤球细胞,肿瘤球细胞比HGC-27细胞更具有干样特性。
- 时伟红刘京津王惟张梅英郑志红
- 关键词：胃癌
- TNNI2突变转基因小鼠模型的建立
- 2008年
- 目的建立TNNI2突变转基因小鼠模型。方法构建pEGFP-tnni2转基因构件,TNNI2基因的第175个氨基酸缺失,通过原核显微注射法,把线性化、纯化后的外源基因pEGFP-tnni2注射入BDF1小鼠受精卵中,胚胎移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠。用PCR和Southern方法检测子代鼠尾DNA鉴定基因型。通过RT-PCR方法检测tnni2基因表达。结果移植注射胚胎115枚给4只假孕小鼠共出生了23只后代鼠,经PCR和Southern方法检测得到4只阳性小鼠。对其子代进行RT-PCR检测,tnni2基因在肌肉、心脏内表达。结论通过显微注射法使外源基因pEGFP-tnni2(TNNI2基因的第175个氨基酸缺失)在小鼠基因组中得到整合,建立了转pEGFP-tnni2的转基因小鼠模型。
- 杨葳郑志红姜淼李兆阳王惟王禄增
- 关键词：显微注射法转基因小鼠
