彭枫
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 谷氨酸棒杆菌PhoPR双组分系统应答低氧胁迫功能研究被引量：2
- 2020年
- 探究谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum,C. glutamicum)中PhoPR双组分系统响应外界溶氧变化功能机制。通过转录组数据分析发现PhoPR为C. glutamicum在不同溶氧水平下转录变化最明显双组分系统(Two-component system,TCS),表明PhoPR可感应环境中氧气变化。实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和电泳迁移率试验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)表明PhoPR效应蛋白PhoP可直接调控电子传递链相关基因sdhCAB和细胞膜相关基因betP、proP,间接调控qcrB,PhoPR高表达可增强细胞电子传递链和细胞膜基因转录。另外PhoPR还影响胞内ATP生成速度和峰值。基于以上结果推断,PhoPR通过调节电子传递链和ATP生成以维持C. glutamicum在低氧条件下生命活动。
- 陈静彭枫彭枫杨艳坤刘秀霞
- 关键词：谷氨酸棒杆菌双组分系统溶氧EMSA
- 不同表达模式组合对谷氨酸棒状杆菌中脑钠肽蛋白表达的影响被引量：2
- 2018年
- 外源蛋白表达系统按照启动子作用方式可分为诱导型和组成型,按照蛋白表达后的定位可分为胞内表达和分泌表达。为了研究外源蛋白在谷氨酸棒状杆菌中最适的表达模式组合,以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)为模式蛋白构建用于研究谷氨酸棒状杆菌不同表达模式的快速表达体系,并利用这一体系研究脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)的最适表达模式。结果表明,相比于诱导型胞内表达、诱导型分泌表达、组成型分泌表达模式,BNP通过组成型胞内表达可达到最高的表达量。表达产物经过NI-NTA亲和层析,可得到纯化的BNP产量为235.5 mg/L,纯度可达90%。该研究构建了一套谷氨酸棒状杆菌中外源蛋白不同表达模式组合的快速检测方法,并成功实现了BNP的表达,这对以谷氨酸棒状杆菌作为宿主表达外源蛋白具有重要的指导意义。
- 彭枫刘秀霞刘秀霞杨艳坤白仲虎
- 关键词：谷氨酸棒状杆菌脑钠肽蛋白表达
- N端截短对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶酶学特性及功能的影响被引量：8
- 2016年
- 采用N端截短方式对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌Bacillus acidopullulyticus普鲁兰酶进行分子精简,构建不同形式的N端截短突变体,考察截短突变对表达水平、酶学特性及实用性能的影响。研究结果表明:缺失X45后,目标蛋白几乎全部以不溶形式的包涵体形式存在;缺失CBM41可引起可溶性表达量的大幅提升。缺失CBM41(M1)、X25(M3)、亦或两结构域同时缺失(M5)的变体最适温度(60℃)和最适p H(5.0)与野生型相同。突变体M1和M5的Km值分别提高至野生型的2.4倍和3.1倍,kcat/Km测定结果显示M5催化效率下降明显。突变体M1、M3和M5对分子量较大底物的水解效率略有下降,但对小分子底物的水解效率影响不明显。野生型及突变体M1、M3和M5与糖化酶复配使用时,糖化值(DE)分别为93.6%、94.7%、94.5%和93.1%。上述结果表明,切除CBM41和/或X25结构域的普鲁兰酶变体不影响其在淀粉糖化过程中的应用,且由于分子量减小更易于异源表达,截短突变体可能更适合于工业化生产。
- 陈阿娜刘秀霞戴晓峰詹锦玲彭枫李璐王芬李松杨艳坤白仲虎
- 关键词：普鲁兰酶酶学特性
