宋明明
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
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- 脂多糖调控PI3K/Akt通路增强中性粒细胞吞噬功能被引量：3
- 2016年
- 目的:探讨脂多糖对中性粒细胞细菌吞噬功能的影响及可能机制。方法:取健康人静脉血中性粒细胞,重悬分为对照组、脂多糖10 min、20 min、30 min组,按1∶50加入大肠埃希菌GFP(25922GFP),孵育30 min,荧光显微镜和流式细胞术检测中性粒细胞的吞噬功能;另取中性粒细胞重悬分为对照组、脂多糖组、LY294002(PI3K抑制剂)组、LY294002+脂多糖组,一部分细胞行丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)荧光染料染色,流式细胞术观察与分析细胞中F-actin,荧光显微镜观察中性粒细形态;另一部分细胞按1∶50加入25922GFP,孵育30 min,荧光显微镜和流式细胞术检测中性粒细胞的吞噬功能。免疫印迹法检测各组细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)和磷酸化磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)的表达。结果:与对照组比较,脂多糖10 min、20 min、30 min组中性粒细胞25922GFP荧光表达逐渐增强,p-PI3K和p-Akt表达逐渐增加;脂多糖组荧光强度和p-PI3K和Akt表达明显高于对照组(P均<0.05)。与对照组比较,脂多糖组F-actin表达增加,细胞形态改变,LY294002组和LY294002+脂多糖组细胞形态无明显改变,LY294002+脂多糖组F-actin表达明显低于脂多糖组(P<0.05);对照组、LY294002组和LY294002+脂多糖组p-Akt表达明显低于脂多糖组。结论:经脂多糖刺激后中性粒细胞吞噬功能增强,其机制可能与脂多糖促进PI3K/Akt通路磷酸化有关。
- 张艺森王旭秦魏婷宋明明孙炳伟
- 关键词：脂多糖中性粒细胞磷酸化
- 外源性一氧化碳对脓毒症时肝、肺组织中性粒细胞过度浸润的抑制作用及其机制被引量：4
- 2015年
- 目的 探讨外源性一氧化碳对脓毒症时肝、肺组织中性粒细胞过度浸润的抑制作用及其机制.方法 （1） 32只雄性小鼠按随机数字表法分为假手术组、盲肠结扎穿孔组（CLP组）、CLP＋外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）（8 mg/kg）干预组（CORM-2干预组）、CLP＋无活性CORM-2（iCORM-2）（8 mg/kg）干预组（iCORM-2干预组）,每组8只.术后24 h分别取肝、肺组织,检测病理改变、髓过氧化物酶（MPO）活性及丙二醛（MDA）含量.（2）另取60只小鼠分组同（1）,每组15只;术后连续观察72 h,进行存活率分析.（3）分离小鼠骨髓中性粒细胞,分为正常对照组、脂多糖（LPS,1μg/ml,浓度下同）刺激组（LPS组）、LPS＋低浓度CORM-2（10 μmol/L）刺激组（低浓度组）、LPS＋高浓度CORM-2（50 μmol/L）刺激组（高浓度组）、LPS＋iCORM-2（50 μmol/L）刺激组（iCORM-2组）,1h后进行琼脂糖凝胶平板趋化实验,定量PCR、免疫荧光检测趋化因子甲酰肽受体1（FPR1）含量.结果 与假手术组比较,CLP组MPO活性明显增强[肝（9.1±1.1）U/g、肺（16.3±2.8）U/g] （P ＜0.05）,MDA含量明显上升[肝（76.5±11.3） nmol/mg、肺（32.4 ±10.3） nmol/mg] （P ＜0.05）,72 h存活率仅为20％（P＜0.05）;CORM-2干预组能显著抑制MPO活性[肝（5.2±0.8）U/g、肺（7.5±2.4）U/g]（P＜0.05）及MDA含量的增高[肝（46.7 ±6.1）nmol/mg、肺（23.8 ±7.3） nmol/mg] （P ＜0.05）,72 h存活率为67％ （P ＜0.05）.与正常对照组比较,LPS组中性粒细胞[（61.3±7.1）个]趋化能力增强（P＜0.05）,FPR1表达增多且富集于细胞膜;低浓度组、高浓度组可有效抑制上述变化,且呈剂量依赖性[低浓度组（43.3±6.1）个、高浓度组（23.3±5.9）个]（P＜0.05）.结论 外源性一氧化碳通过下调脓毒症时FPR1表达、减少细胞膜FPR1含量及有效抑制脓毒症时中性粒细胞趋化能力抑制肝、肺组织中性粒细胞过度浸润,减�
- 王旭宋明明沈唯长秦魏婷吕汪洄孙炳伟
- 关键词：脓毒症一氧化碳趋化
- 外源性一氧化碳释放分子2体外干预对内毒素/脂多糖刺激人中性粒细胞胞外诱捕网形成的作用及其机制被引量：4
- 2016年
- 目的 探讨外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）对LPS刺激人中性粒细胞胞外诱捕网（NET）形成的作用及其机制. 方法 采集1名健康成年志愿者的静脉血,分离出中性粒细胞后,按随机数字表法分为正常对照组、LPS组、LPS＋ 10 μmol/L CORM-2组、LPS＋ 50 μmol/L CORM-2组、LPS＋无活性CORM-2（iCORM-2）组.正常对照组不进行任何处理;LPS组采用1μL 1μg/mL的LPS刺激;LPS＋ 10 μmol/L CORM-2组、LPS＋ 50 μmol/L CORM-2组、LPS＋ iCORM-2组在采用上述相同剂量LPS刺激的同时,分别采用10 μmol/L CORM-2、50 μmol/L CORM-2、50 μmol/L iCORM-2各1μL进行干预,常规培养1h后检测相关指标.用碘化丙啶染色标记法检测NET数量,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率,二氢罗丹明123荧光探针法检测活性氧生成水平（结果以平均荧光强度表示）,蛋白质印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达水平.每组以上4个实验样本数均为5.对数据行单因素方差分析、SNK检验. 结果 （I）LPS组和LPS＋ iCORM-2组细胞每400倍视野下NET数量与正常对照组相近（P值均大于0.05）.LPS＋10 μmol/L CORM-2组和LPS＋50μmol/L CORM-2组细胞每400倍视野下NET数量较正常对照组和LPS组均明显增多（P值均小于0.05）.LPS＋ iCORM-2组细胞每400倍视野下NET数量与LPS组相近（P＞0.05）.（2）LPS组、LPS＋ 10 μmol/L CORM-2组、LPS＋ 50 μmol/LCORM-2组、LPS＋ iCORM-2组细胞早期凋亡率较正常对照组明显增加（P值均小于0.05）,LPS＋10 μmol/L CORM-2组、LPS＋ 50 μmol/L CORM-2组、LPS＋ iCORM-2组细胞早期凋亡率与LPS组相近（P值均大于0.05）.（3）LPS组、LPS＋ 10 μmol/LCORM-2组、LPS＋ iCORM-2组细胞活性氧生成水平高于正常对照组（P值均小于0.05）,LPS＋50 μmol/L CORM-2组细胞活性氧生成水平与正常对照组相近（P＞0.05）.LPS＋10 μmol/LCORM-2组和LPS＋ 50μmol/L CORM-2组细胞活性氧生成水平明显低于LPS组（P值
- 宋明明王旭秦魏婷庄明峰徐晓涵张艺森孙炳伟
- 关键词：中性粒细胞
- 脓毒症时中性粒细胞胞外诱捕网的研究进展被引量：11
- 2015年
- 脓毒症（sepsis）是由感染引起的全身炎症反应，严重时可导致多器官功能衰竭、脓毒性休克，甚至死亡。当前，脓毒症的发病率和病死率仍然居高不下，在美国，脓毒症在危重患者致死因素中居首位，每年有75万新增脓毒症患者，而其中又有21万患者因脓毒症而死亡。脓毒症的发病机制十分复杂，至今仍未完全阐明，脓毒症早期，感染部位招募大量中性粒细胞，通过吞噬病原菌、脱颗粒释放蛋白酶等物质来达到杀菌的作用。
- 宋明明王旭孙炳伟
- 关键词：脓毒症患者多器官功能衰竭诱捕全身炎症反应危重患者
- 外源性一氧化碳对脓毒症时血小板异常释放的抑制作用及其分子机制被引量：3
- 2016年
- 目的探讨外源性一氧化碳（CO）对脓毒症时血小板异常释放的抑制作用及其可能分子机制。方法采集健康成年志愿者空腹肘静脉血，采用差速离心法获得富含血小板血浆（PRP），按随机数字表法分为正常对照组、脂多糖（LPS）组（10mg／LLPS刺激）、无活性外源性一氧化碳释放分子2（iCORM-2）组（10mg／L LPS±50μmol／LiCORM-2干预）、外源性一氧化碳释放分子2（CORM-2）10μmlol／L和50μmol／L组（10mg／L LPS±CORM-2 10μmol／L或50μmol／L干预）。30rain后用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清液中血小板源性生长因子BB（PDGF—BB）和基质金属蛋白酶2（MMP-2）水平；化学荧光素法检测血小板三磷酸腺苷（ATP）水平；流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白P-选择素水平；蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测血小板表面信号分子Toll样受体4（TLR4）表达及关键信号分子蛋白激酶c0亚型（PKC0）和突触融合蛋白结合蛋白1（STXBP-1）磷酸化；免疫共沉淀法检测STXBP-1介导的可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子黏附受体（SNAREs）复合体突触融合蛋白2-突触相关蛋白23-囊泡相关膜蛋白8（STχ2-SNAP23-VAMP8）的形成。结果①与正常对照组相比，LPS刺激后血小板释放PDGF-BB、MMP-2和ATP均显著增加，血小板表面P-选择素表达明显上调[PDGF—BB（μg/L）：127．53±1．78比94．35±5．84，MMP-2（ng／L）：51．87±9．20比35．83±3．17，ATP（μmol／L）：1．288±0．056比0．975±0．010，P-选择素：（3．93±0．19）％比（0．44±0．10）％，均P〈0．05]；10μmol／L和50μmol／LCORM-2干预均能有效抑制LPS诱导血小板释放PDCF—BB、MMP-2、ATP和P-选择素的高表达，并呈剂量依赖性[PDGF—BB（μg，L）：114．68±1．35、97．08±6．14比127．53±1．78，MMP-2（ng／L）：32．67±8．00、24．63±1．63比51．87±9．20，ATP（μmol／L）：0．999±0．015、0．965±0．
- 刘大东徐晓涵庄明峰宋明明秦魏婷王旭孙炳伟
- 关键词：脓毒症血小板
- CORM-2通过PKCθ/Munc18a信号途径抑制脓毒症血小板α颗粒的释放被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨θ型蛋白激酶C(PKCθ)/Munc18a信号途径介导的脓毒症时血小板α颗粒释放及外源性一氧化碳释放分子Ⅱ(CO-releasing molecules-2,CORM-2)的干预机制。方法:采集健康成年人肘静脉血,差速离心法分离出血小板,随机分为正常对照组,脂多糖刺激组,无活性的CORM-2(i CORM-2,50μmol/L)组,CORM-2(10μmol/L)组,CORM-2(50μmol/L)组。为进一步探讨PKCθ的功能,设立脂多糖+AEB071组和脂多糖+CORM-2(50μmol/L)+AEB071组接受PKCθ抑制剂AEB071(50 nmol/L)干预。随后采用ELISA法检测各组血小板α颗粒释放的血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)和MMP-2,流式细胞术检测血小板P-选择素的表达;免疫荧光法检测血小板α颗粒的分布;同时用蛋白质印迹法检测血小板关键信号分子PKCθ和Munc18a的活性。结果:CORM-2(10、50μmol/L)干预能够有效抑制脂多糖刺激后血小板P-选择素、PDGF-BB和MMP-2的释放(均P<0.05)。免疫荧光检测结果显示CORM-2能抑制脂多糖刺激后血小板α颗粒的释放。脂多糖刺激后血小板PKCθ和Munc18a的磷酸化水平在AEB071组与CORM-2(50μmol/L)组均明显降低(均P<0.05)。结论:CORM-2的干预能够有效地抑制脓毒症时血小板α颗粒的异常释放,其机制可能涉及PKCθ/Munc18a信号途径。
- 庄明峰徐晓涵刘大东宋明明王旭秦魏婷孙炳伟
- 关键词：脓毒症
