肖美英
- 作品数：7 被引量：21H指数：2
- 供职机构：温州医学院检验医学院浙江省医学遗传学重点实验室更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 创伤弧菌溶细胞素在大肠杆菌中的表达及其对应激因子的调控被引量：1
- 2008年
- 目的:用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,对其溶血活性进行评价。并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后,调控肝癌细胞SMMC772应激因子基因表达情况。方法:构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲和层析(6×His Tag)纯化重组创伤弧菌溶细胞素(rVVC),并用溶血试验验证重组蛋白活性。复性重组蛋白作用肝癌细胞SMMC7721后,RT-PCR方法检验SMMC7721细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、热休克蛋白90(HSP90)基因分泌调节情况。结果:用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)rVVC。兔红细胞溶血试验检测表明,rVVC具有溶血活性,其活性为0.2μg/HU(溶血单位)。RT-PCR结果显示,rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达能力,但具有时间、剂量依赖性。结论:表达、纯化并复性的rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达。提示rVVC在组织细胞损伤过程中发挥了应激作用。
- 李桂军楼永良桂静肖美英
- 关键词：创伤弧菌溶细胞素大肠杆菌表达溶血活性应激因子
- 创伤弧菌溶细胞素抗原表位预测、鉴定及免疫机制的探索
- 目的： 用生物信息软件预测出创伤弧菌溶细胞素(vibriovulnificuscytolysin)的抗原表位，利用噬菌体展示技术构建噬菌体表位肽，筛选出有效抗原表位；并对创伤弧菌溶细胞素表位肽的免疫应答机制进行探索...
- 肖美英
- 关键词：创伤弧菌抗原表位预测免疫机制
- 文献传递网络资源链接
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白重组、表达与细胞毒活性鉴定被引量：7
- 2008年
- 研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用。诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2+亲和层析方法对rVvhA进行纯化;利用分步稀释加透析相结合的方法进行蛋白质复性;绵羊红细胞裂解试验对复性后的rVvhA进行溶血活性初步测定;MTT法检测rVvhA对人ECV304细胞的体外毒性作用;应用Hochest33342/PI活细胞荧光双染及流式细胞术分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响。结果显示,用Ni2+-NTAHisBand亲和层析柱纯化rVvhA纯度达88.6%左右;复性后的rVvhA有一定的溶血活性,其溶血活性具有时间-剂量依赖性;MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0HU/mlrVvhA作用人ECV30412h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5HU/mlrVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0HU/mlrVvhA处理组加用40μmol/Lcaspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0HU/mlrVvhA处理组有一定程度降低。rVvhA对人ECV304细胞具有诱导凋亡的生物学活性,推测诱导调亡途径可能与caspase家族有关。
- 桂静肖美英楼永良胡蝶严杰朱晔晶
- 关键词：创伤弧菌细胞凋亡CASPASE
- 创伤弧菌溶细胞素抗原表位预测及其噬菌体展示肽的构建
- 2008年
- 目的预测创伤弧菌溶细胞素(vibrio vulnificus cytolysin)的抗原表位,为研制多抗原肽疫苗(MAP)奠定基础。方法采用生物信息学技术对Vvc的T细胞和B细胞表位进行预测及分析。选取Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽构建噬菌体展示系统。PEG/NaCl沉淀法提纯重组噬菌体,SDS-PAGE鉴定目的重组PIII蛋白(rPIII)。Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白rVvc常规皮下免疫法制备兔抗血清。rVvc抗血清为一抗,采用Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选。结果预测的4个主要表位肽Vvha1、Vvah2、Vvha3和Vvha4在M13噬菌体中获得成功表达。采用rVvc抗血清为一抗,Western blot对上述表位肽进行鉴定和筛选:Vvha2、Vvha4反应强度高于Vvha1和Vvha3。结论本实验成功地构建Vvc主要T细胞和B细胞联合表位肽噬菌体展示系统。
- 肖美英楼永良严杰
- 关键词：创伤弧菌噬菌体展示B细胞表位T细胞表位
- 创伤弧菌溶细胞素vvhA基因在大肠杆菌中的表达及其对应激因子的调控被引量：18
- 2008年
- 目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素，对其溶血活性进行评价。并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后，调控肝癌细胞SMMC7721应激因子基因表达情况。方法构建pET28a（＋）-whA表达载体，对包涵体进行三步洗涤后，用金属亲和层析（6×HisTag）纯化重组创伤弧菌溶细胞素（rVVC），并用溶血试验验证重组蛋白活性。复性重组蛋白作用肝癌细胞SMMC7721后，RT-PCR方法检验SMMC7721细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）、热休克蛋白90（HSP90）基因分泌调节情况。结果用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度（纯度≥96％）rVVC。兔红细胞溶血试验检测表明，rVVC具有溶血活性，其活性为0．2μg／HU（溶血单位）。RT-PCR结果显示，rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达能力，但具有时间、剂量依赖性。结论表达、纯化并复性的rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90mRNA表达。提示rVVC在组织细胞损伤过程中发挥了应激作用。
- 李桂军桂静肖美英楼永良
- 关键词：创伤弧菌溶细胞素溶血活性应激因子
- 创伤弧菌溶细胞素T和B有效联合表位的筛选与鉴定被引量：2
- 2010年
- 利用生物信息学预测技术成功筛选出含部分创伤弧菌溶细胞素(Vibrio vulnificushemolysin,VvhA)基因片段的T细胞、B细胞联合表位Vvha1、Vvha2、Vvha3和Vvha4,通过噬菌体展示技术成功获得四段表位多肽M13KE-Vvha1、M13KE-Vvha2、M13KE-Vvah3、M13KE-Vvha4,且M13KE-Vvah2、M13KE-Vvha4抗原反应性强于M13KE-Vvha1、M13KE-Vvha3。将四种抗原性多肽经腹腔注射ICR小鼠后,利用流式细胞仪及ELISA方法检测小鼠CD4^+T淋巴细胞亚群及IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ细胞因子时发现,与M13KE-Vvha3相比,经M13KE-Vvha1、M13KE-Vvha2、M13KE-Vvha4作用的小鼠CD4^+T淋巴细胞亚群的变化更为显著。与正常组相比,该三组小鼠的IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ细胞因子分泌量的变化都具有统计学意义;而经M13KE-Vvha3作用的小鼠仅IL-4的改变具有明显统计学意义。因此本研究成功筛选出含部分VvhA片段的T细胞、B细胞联合表位Vvha2、Vvha4,从而为进一步研制多抗原肽(multipleantigenic peptide,MAP)疫苗打下基础。
- 王波丁卉谢旦立楼永良肖美英庞碧芳严杰
- 关键词：创伤弧菌噬菌体展示B细胞表位T细胞表位
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白细胞毒活性相关分子机制研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVVC）诱导人ECV304细胞（人脐静脉内皮细胞）凋亡过程中caspase．3，-8，-9活性变化。方法应用MTT法、Hoehest33342／PI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVVC对人ECV304细胞诱导凋亡的影响；比色法测定rVVC诱导人ECV304凋亡过程中caspase-3，-8，-9活性变化。结果MTT结果显示rVVC具有降低人ECV304细胞的存活率活性；浓度为2．0溶血单位（HU）／ml的rVVC作用人ECV30412h后，其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0．5HU／ml的rVVC处理组，具有剂量依赖性；浓度为2．0HU／ml rVVC处理组加40μmol／L Caspase全酶抑制剂（Z—VAD—FMK）后凋亡率较2．0HU／ml rVVC处理组有一定程度降低。浓度为2．0HU／ml rVVC处理人ECV304细胞0．5h后caspase-3活性开始增高，于3h达高峰，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），caspase-8，-9活性无明显变化。结论rVVC对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性，caspase-3可能与活性rVVC诱导的人ECV304凋亡有关。
- 桂静胡蝶郑丽楼永良肖美英严杰朱晔晶肖翔
- 关键词：创伤弧菌
