胡蝶
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：温州医学院检验医学院浙江省医学遗传学重点实验室更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白重组、表达与细胞毒活性鉴定被引量：7
- 2008年
- 研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用。诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2+亲和层析方法对rVvhA进行纯化;利用分步稀释加透析相结合的方法进行蛋白质复性;绵羊红细胞裂解试验对复性后的rVvhA进行溶血活性初步测定;MTT法检测rVvhA对人ECV304细胞的体外毒性作用;应用Hochest33342/PI活细胞荧光双染及流式细胞术分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响。结果显示,用Ni2+-NTAHisBand亲和层析柱纯化rVvhA纯度达88.6%左右;复性后的rVvhA有一定的溶血活性,其溶血活性具有时间-剂量依赖性;MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0HU/mlrVvhA作用人ECV30412h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5HU/mlrVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0HU/mlrVvhA处理组加用40μmol/Lcaspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0HU/mlrVvhA处理组有一定程度降低。rVvhA对人ECV304细胞具有诱导凋亡的生物学活性,推测诱导调亡途径可能与caspase家族有关。
- 桂静肖美英楼永良胡蝶严杰朱晔晶
- 关键词：创伤弧菌细胞凋亡CASPASE
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白对小鼠单核巨噬细胞产NO及其合酶的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVvhA）对小鼠单核-巨噬细胞（J774A.1）产生一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响.方法 应用MTT法检测rVvhA对J774A.1增殖的抑制作用;Griess法检测NO含量;RT-PCR和免疫荧光法检测iNOS mRNA和蛋白表达水平.结果 0.8 HU/ml及以上浓度rVvhA可显著抑制J774A.1的增殖;在IFN-γ的辅助作用下,0.4 HU/ml的rVvhA即可诱导J774A.1产生大量NO,显著增加细胞内活性以及iNOS mRNA和蛋白表达水平.结论 rVvhA可诱导巨噬细胞产生NO和iNOS表达,在创伤弧菌的致病机制中具有重要意义.
- 杜李梅郭雅君屠艳烨胡蝶楼永良严杰
- 关键词：创伤弧菌一氧化氮诱导型一氧化氮合酶
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白细胞毒活性相关分子机制研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVVC）诱导人ECV304细胞（人脐静脉内皮细胞）凋亡过程中caspase．3，-8，-9活性变化。方法应用MTT法、Hoehest33342／PI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVVC对人ECV304细胞诱导凋亡的影响；比色法测定rVVC诱导人ECV304凋亡过程中caspase-3，-8，-9活性变化。结果MTT结果显示rVVC具有降低人ECV304细胞的存活率活性；浓度为2．0溶血单位（HU）／ml的rVVC作用人ECV30412h后，其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0．5HU／ml的rVVC处理组，具有剂量依赖性；浓度为2．0HU／ml rVVC处理组加40μmol／L Caspase全酶抑制剂（Z—VAD—FMK）后凋亡率较2．0HU／ml rVVC处理组有一定程度降低。浓度为2．0HU／ml rVVC处理人ECV304细胞0．5h后caspase-3活性开始增高，于3h达高峰，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），caspase-8，-9活性无明显变化。结论rVVC对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性，caspase-3可能与活性rVVC诱导的人ECV304凋亡有关。
- 桂静胡蝶郑丽楼永良肖美英严杰朱晔晶肖翔
- 关键词：创伤弧菌
