桂静
- 作品数：5 被引量：19H指数：2
- 供职机构：温州医学院检验医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 创伤弧菌溶细胞素vvhA融合蛋白细胞毒活性相关分子机制的探讨
- 2010年
- 目的:研究创伤弧菌溶细胞素vvhA融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(ECV304)凋亡过程中caspase-3,-8,-9活性变化。方法:应用MTT法、Hochest33342/pI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响;比色法测定rVvhA诱导人ECV304凋亡过程中caspase-3,-8,-9活性变化。结果:MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0HU/ml的rVvhA作用人ECV304,12小时后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5HU/ml的rVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0HU/mlrVvhA处理组加40μMcaspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0HU/mlrVvhA处理组有一定程度降低。浓度为2.0HU/mlrVvhA处理人ECV304细胞30分钟后caspase-3活性开始增高,于3小时达高峰,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),caspase-8,-9活性无明显变化。结论:rVvhA对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性,caspase-3可能与活性rVvhA诱导的人ECV304凋亡有关。
- 桂静朱晔晶楼永良
- 关键词：创伤弧菌人脐静脉内皮细胞细胞凋亡
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白重组、表达与细胞毒活性鉴定被引量：7
- 2008年
- 研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbili-cal vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用。诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2+亲和层析方法对rVvhA进行纯化;利用分步稀释加透析相结合的方法进行蛋白质复性;绵羊红细胞裂解试验对复性后的rVvhA进行溶血活性初步测定;MTT法检测rVvhA对人ECV304细胞的体外毒性作用;应用Hochest33342/PI活细胞荧光双染及流式细胞术分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响。结果显示,用Ni2+-NTAHisBand亲和层析柱纯化rVvhA纯度达88.6%左右;复性后的rVvhA有一定的溶血活性,其溶血活性具有时间-剂量依赖性;MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0HU/mlrVvhA作用人ECV30412h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5HU/mlrVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0HU/mlrVvhA处理组加用40μmol/Lcaspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0HU/mlrVvhA处理组有一定程度降低。rVvhA对人ECV304细胞具有诱导凋亡的生物学活性,推测诱导调亡途径可能与caspase家族有关。
- 桂静肖美英楼永良胡蝶严杰朱晔晶
- 关键词：创伤弧菌细胞凋亡CASPASE
- 创伤弧菌溶细胞素在大肠杆菌中的表达及其对应激因子的调控被引量：1
- 2008年
- 目的:用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素,对其溶血活性进行评价。并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后,调控肝癌细胞SMMC772应激因子基因表达情况。方法:构建pET28a(+)-vvhA表达载体,对包涵体进行三步洗涤后,用金属亲和层析(6×His Tag)纯化重组创伤弧菌溶细胞素(rVVC),并用溶血试验验证重组蛋白活性。复性重组蛋白作用肝癌细胞SMMC7721后,RT-PCR方法检验SMMC7721细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、热休克蛋白90(HSP90)基因分泌调节情况。结果:用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度(纯度≥96%)rVVC。兔红细胞溶血试验检测表明,rVVC具有溶血活性,其活性为0.2μg/HU(溶血单位)。RT-PCR结果显示,rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达能力,但具有时间、剂量依赖性。结论:表达、纯化并复性的rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达。提示rVVC在组织细胞损伤过程中发挥了应激作用。
- 李桂军楼永良桂静肖美英
- 关键词：创伤弧菌溶细胞素大肠杆菌表达溶血活性应激因子
- 创伤弧菌溶细胞素融合蛋白细胞毒活性相关分子机制研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVVC）诱导人ECV304细胞（人脐静脉内皮细胞）凋亡过程中caspase．3，-8，-9活性变化。方法应用MTT法、Hoehest33342／PI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVVC对人ECV304细胞诱导凋亡的影响；比色法测定rVVC诱导人ECV304凋亡过程中caspase-3，-8，-9活性变化。结果MTT结果显示rVVC具有降低人ECV304细胞的存活率活性；浓度为2．0溶血单位（HU）／ml的rVVC作用人ECV30412h后，其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0．5HU／ml的rVVC处理组，具有剂量依赖性；浓度为2．0HU／ml rVVC处理组加40μmol／L Caspase全酶抑制剂（Z—VAD—FMK）后凋亡率较2．0HU／ml rVVC处理组有一定程度降低。浓度为2．0HU／ml rVVC处理人ECV304细胞0．5h后caspase-3活性开始增高，于3h达高峰，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），caspase-8，-9活性无明显变化。结论rVVC对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性，caspase-3可能与活性rVVC诱导的人ECV304凋亡有关。
- 桂静胡蝶郑丽楼永良肖美英严杰朱晔晶肖翔
- 关键词：创伤弧菌
- 创伤弧菌溶细胞素vvhA基因在大肠杆菌中的表达及其对应激因子的调控被引量：18
- 2008年
- 目的用大肠杆菌表达系统表达创伤弧菌溶细胞素，对其溶血活性进行评价。并观察其作用肝癌细胞SMMC7721后，调控肝癌细胞SMMC7721应激因子基因表达情况。方法构建pET28a（＋）-whA表达载体，对包涵体进行三步洗涤后，用金属亲和层析（6×HisTag）纯化重组创伤弧菌溶细胞素（rVVC），并用溶血试验验证重组蛋白活性。复性重组蛋白作用肝癌细胞SMMC7721后，RT-PCR方法检验SMMC7721细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）、热休克蛋白90（HSP90）基因分泌调节情况。结果用基因工程的方法成功获得高表达、高纯度（纯度≥96％）rVVC。兔红细胞溶血试验检测表明，rVVC具有溶血活性，其活性为0．2μg／HU（溶血单位）。RT-PCR结果显示，rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90 mRNA表达能力，但具有时间、剂量依赖性。结论表达、纯化并复性的rVVC能明显诱导肝癌细胞SMMC7721的TNF-α、HSP90mRNA表达。提示rVVC在组织细胞损伤过程中发挥了应激作用。
- 李桂军桂静肖美英楼永良
- 关键词：创伤弧菌溶细胞素溶血活性应激因子
