王朝云
- 作品数：16 被引量：23H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用
- 本发明提供了靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用。
- 叶棋浓徐小洁王凌雪王朝云程龙韩永健
- 文献传递
- FHL2抗体的制备及其在癌细胞和组织中表达的检测被引量：3
- 2007年
- 目的:制备FHL2特异性的多克隆抗体,并检测FHL2在癌细胞和组织中的表达。方法:在大肠杆菌中融合表达GST-FHL2蛋白,纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体。采用Western blot检测抗体的特异性,并检测FHL2在乳腺癌细胞、肝癌细胞和小鼠组织中的表达。结果:获得了可特异识别FHL2,而不识别FHL家族其他成员的多克隆抗体;FHL2蛋白在乳腺癌和肝癌细胞株中表达;FHL2在心脏、肌组织、乳腺、前列腺和肝脏组织中都有表达。结论:成功地得到可特异识别FHL2的多克隆抗体,且发现FHL2在癌细胞和更广泛地正常组织中都有表达,为进一步研究FHL2在凋亡、癌变、分化等生命过程中的功能奠定了基础。
- 丁丽华熊志红王朝云朱翠程龙张寅炜吕秋军叶棋浓
- 关键词：FHL2多克隆抗体癌症
- 利用小干扰RNA抑制小管间质性肾炎抗原相关蛋白的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:设计并构建TIN-ag-RP基因的小干扰RNA(siRNA),检测其对小管间质性肾炎抗原相关蛋白(TIN-ag-RP)表达的干扰效果。方法:设计2条针对TIN-ag-RP基因的siRNA,并克隆到siRNA表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上;经酶切和测序证明构建成功后,将重组质粒和带FLAG标签的TIN-ag-RP基因共转染293T人胚肾细胞,通过Western blot检验siRNA的干扰效果。结果:获得了2个TIN-ag-RP基因siRNA真核表达载体,均能有效抑制TIN-ag-RP的表达,其中一条的抑制效率达90%以上。结论:构建的TIN-ag-RP基因的siRNA能有效抑制TIN-ag-RP的表达。
- 杨智洪王晓辉姜艳超李杰萍袁斌王朝云杨树兴叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA基因表达
- 细胞周期蛋白B1、D1和E真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的:为研究细胞周期蛋白(cyclin)在肿瘤形成过程中的分子机制,构建带FLAG标签的细胞周期蛋白B1、D1、E的真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达。方法:以乳腺cDNA文库为模板,分别扩增细胞周期蛋白B1、D1、E基因全长编码区序列,克隆到pcDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的表达载体转染293T细胞,检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-Cyclin真核表达载体,Western印迹分析表明克隆的载体都能在真核细胞中表达分子大小相符的重组蛋白。结论:构建了FLAG-CyclinB1、FLAG-CyclinD1、FLAG-CyclinE真核表达载体,为细胞周期蛋白及其相关蛋白的研究奠定了基础。
- 熊志红丁丽华袁斌王朝云李杰萍杨丽萍杨智洪叶棋浓
- 关键词：细胞周期蛋白克隆真核表达
- 靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用
- 本发明提供了靶向HPIP基因的干扰性RNA、含有该干扰性RNA的药物组合物及其应用。
- 叶棋浓徐小洁王凌雪王朝云程龙韩永健
- 雌激素受体α转录激活系统的构建被引量：3
- 2008年
- 目的构建雌激素受体α（ERα）的转录檄活系统。方法采用PCR技术构建ERa及其不同功能区（AF1、AF2和DBD）重组质粒并进行鉴定。将培养好的293T细胞分为pGAL—ERα组（转染pGAL—ERa重组质粒）、pGAL—ERαAF1组（转染pGAL—ERαAF1重组质粒）、pGAL—ERαAF2组（转染pGAL．ERaAF2重组质粒）、pGAL—ERαDBD（转染pGAL—ERαDBD重组质粒）及空白对照组（转染空载体）5组，各组同时转染0．2ug雌激素受体作用元件荧光素酶报告基因（ERE—LUC）和0．1ug表达B-半乳糖苷酶的质粒，作用4h后将各组细胞分为两部分，一部分加入雌二醇（终浓度10nmol／L）诱导，另一部分继续培养，24h后分别测定各组加入雌二醇诱导及未加雌二醇诱导的细胞的转录激活活性，并计算各组细胞与空白对照组细胞转录激活活性的比值。蛋白印迹法测定各重组质粒蛋白在293T细胞中的表达。结果加入雌二醇诱导后，pGAL—ERα组、pGAL—ERαAF1组、pGAL—ERαAF2组、pGAL—ERαDBD组细胞与空白对照组细胞的转录激活活性比值分别为20．44±1．01、2．09±0．11、8．09±0．30和1．05±0．09。构建的ERα及其不同功能区重组质粒蛋白在293T细胞中均有表达。结论成功构建了ERa的转录激活系统。
- 李杰萍熊志红杨智洪王朝云杨丽萍叶棋浓
- 关键词：转染聚合酶链反应
- 含VEGF启动子的报告基因的构建及雌激素受体对其活性的影响被引量：4
- 2007年
- 目的:构建含血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素受体作用下的转录活性。方法:以乳腺癌细胞系MCF-7基因组为模板,扩增VEGF启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的报告基因载体转染293T细胞,检测重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明构建了正确的pGL3-basic-VEGF报告基因载体;转录活性实验表明构建的报告基因载体具有启动子活性,雌激素受体α(ERα)能以剂量依赖的方式升高VEGF启动子调控下的报告基因的转录。结论:克隆了VEGF启动子,为ERα共调节子的功能研究奠定了基础。
- 熊志红丁丽华杨树兴孙启鸿杨晓袁斌韩聚强王朝云程龙叶棋浓
- 关键词：荧光素酶报告基因转录活性雌激素受体
- 人EYA基因家族的克隆、表达及转录活性分析
- 2007年
- 采用PCR方法从人组织或细胞cDNA文库中扩增Eya基因家族的完整编码序列,将所扩增的基因克隆到带FLAG标签的真核表达载体上,转染人胚肾293T细胞,Western blot鉴定Eya基因家族的表达。检测Eya基因及其与Six基因共转染对MEF3-Luc转录活性的影响。经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确,通过Westernblot实验证明Eya基因家族真核表达载体构建成功。荧光素酶活性测定显示Eya能协同Six激活肌细胞生成素的表达。进一步证实Eya是Six的转录共激活因子,能提高肌细胞增强因子的活性。
- 袁斌熊志红丁丽华韩聚强张浩王朝云李杰之叶棋浓
- 关键词：克隆基因表达转录活性
- 新型辐射相关基因的筛选及功能研究
- 雌激素类化合物是防治急性放射病的有效药物之一,如国内研制的523、E838等,因此我们推测雌激素信号途径中的组成成分应与辐射防护相关。目前公认的是,雌激素通过与雌激素受体(ER)起作用,调节ER的转录活性,这一过程受一类...
- 王朝云
- 关键词：雌激素受体FHL1P21
- 文献传递
- 雌激素受体α真核表达载体的构建及其转录活性被引量：1
- 2008年
- 目的:构建雌激素受体α(ERα)高效真核表达载体,并检测其转录活性。方法:用常规PCR方法特异扩增带有Flag标签的人ERα全长编码序列,经双酶切后将其克隆到真核表达载体pIRESpuro2中,构建重组质粒pIRESpuro2-Flag-ERα;用Westernblot鉴定该重组质粒介导的Flag-ERα在人胚肾细胞株293T中的表达情况;用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERα的转录活性。结果:构建了pIRESpuro2-Flag-ERα重组质粒,该质粒介导的融合蛋白在293T细胞中得到表达,并可以激活含雌激素应答元件的报告基因的活性。结论:ERα高效真核表达载体的构建为进一步研究ERα在乳腺癌中的作用奠定了基础。
- 李勤操郑喜邦丁丽华王朝云韦玮周岩张浩叶棋浓
- 关键词：雌激素受体Α真核表达载体转录活性
