叶棋浓
- 作品数：317 被引量：601H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生自动化与计算机技术农业科学更多>>
- 利用小干扰RNA降低新基因CCP22的表达水平
- 2010年
- 目的:构建针对新基因CCP22的小干扰RNA(siRNA),降低CCP22蛋白表达水平。方法:设计一条针对新基因CCP22的siRNA序列,克隆到siRNA表达载体pSilencer-2.1-U6-neo上,测序验证正确后,将此表达载体与重组Flag-CCP22的表达载体pcDNA3.0-FLAG-CCP22共转染HEK293T细胞系,或单独转染CCP22siRNA,用West-ern印迹检验构建的CCP22siRNA的效果。结果:构建了针对新基因CCP22的siRNA,Western印迹结果表明CCP22siRNA序列能有效降低外源和内源CCP22蛋白的表达水平。结论:构建的CCP22siRNA干扰效果好,为进一步研究CCP22的功能奠定了基础。
- 冯帆叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA基因表达
- 人eya2基因小干扰RNA表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的:设计并构建人eya2(eyes absent2)基因小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并观察其沉默效果。方法:以人eya2为靶基因,以pSliencer2.1-U6neo质粒为载体,根据人eya2的cDNA序列,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;转化大肠杆菌DH5α菌株,抽提质粒,测序分析;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过荧光分析、Western blot和转录活性实验检测其抑制效果。结果:重组体测序结果与目的序列相一致,证明构建了eya2 siRNA真核表达载体;荧光观察表明siRNA能显著减弱细胞中绿色荧光强度,抑制eya2基因表达;Western blot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性eya2基因表达;转录活性测定表明,构建的siRNA能有效抑制eya2基因表达。结论:构建了eya2 siRNA真核表达载体,该siRNA能有效地抑制eya2基因表达。
- 袁斌丁丽华熊志红韩聚强张浩王晓辉杨智洪叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA转录
- 利用小干扰RNA抑制小管间质性肾炎抗原相关蛋白的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:设计并构建TIN-ag-RP基因的小干扰RNA(siRNA),检测其对小管间质性肾炎抗原相关蛋白(TIN-ag-RP)表达的干扰效果。方法:设计2条针对TIN-ag-RP基因的siRNA,并克隆到siRNA表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上;经酶切和测序证明构建成功后,将重组质粒和带FLAG标签的TIN-ag-RP基因共转染293T人胚肾细胞,通过Western blot检验siRNA的干扰效果。结果:获得了2个TIN-ag-RP基因siRNA真核表达载体,均能有效抑制TIN-ag-RP的表达,其中一条的抑制效率达90%以上。结论:构建的TIN-ag-RP基因的siRNA能有效抑制TIN-ag-RP的表达。
- 杨智洪王晓辉姜艳超李杰萍袁斌王朝云杨树兴叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA基因表达
- 乳腺癌耐药基因研究进展被引量：2
- 2004年
- 乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤。多药耐药一直是困扰乳腺癌化疗和内分泌治疗的重要难题,耐药基因的发现及其功能研究对阐明乳腺癌耐药发生机制、寻找新的治疗靶标、提高疗效将有很大的帮助。对近几年来发现的耐药基因的结构和功能作一综述。
- 刘雨飞叶棋浓黄翠芬
- 关键词：乳腺癌耐药基因MDR
- 细胞周期蛋白B1、D1和E真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的:为研究细胞周期蛋白(cyclin)在肿瘤形成过程中的分子机制,构建带FLAG标签的细胞周期蛋白B1、D1、E的真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达。方法:以乳腺cDNA文库为模板,分别扩增细胞周期蛋白B1、D1、E基因全长编码区序列,克隆到pcDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的表达载体转染293T细胞,检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-Cyclin真核表达载体,Western印迹分析表明克隆的载体都能在真核细胞中表达分子大小相符的重组蛋白。结论:构建了FLAG-CyclinB1、FLAG-CyclinD1、FLAG-CyclinE真核表达载体,为细胞周期蛋白及其相关蛋白的研究奠定了基础。
- 熊志红丁丽华袁斌王朝云李杰萍杨丽萍杨智洪叶棋浓
- 关键词：细胞周期蛋白克隆真核表达
- CPP32研究进展被引量：2
- 1998年
- CPP32是一个由277个氨基酸组成分子量约为32KD的蛋白酶。编码CPP32的基因有α、β两种形式,但两种基因形式编码的蛋白酶在功能上相同。CPP32与细胞凋亡密切相关。在蛋白酶级联切割的凋亡过程中,CPP32处于核心位置,可能起非常重要作用。上游蛋白酶对其进行切割加工,使其活化;活化的CPP32又切割加工下游底物,导致细胞凋亡。
- 姚潇叶棋浓袁仕取
- 关键词：细胞凋亡蛋白酶
- 人端粒酶逆转录酶启动子调节单纯疱疹病毒胸苷激酶和人白细胞介素12融合基因肿瘤细胞特异性表达载体的构建及意义
- 2010年
- 目的构建由人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调节的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV—TK）和人白细胞介素12（hIL-12）融合基因表达载体。方法利用聚合酶链反应（PCR）分别扩增hTERT启动子基因、HSV—TK基因和hIL-12p70基因，并将其分别克隆至pShuttle载体上，合成pShuttle—hTERTp—HSV—TK—linker—IL一-12融合基因表达载体，并对所合成的载体酶切、测序检验。结果各基凶片段成功扩增，大小分别为1084、1173、1557bp，并成功联结至pShuttle载体上。对所构建新载体分别行酶切鉴定，各融合基因片段大小与预计大小相符，DNA序列测定结果显示，与目标序列完全一致，无突变发生。结论成功构建肿瘤特异性启动子调控的融合基因表达载体pShuttle—hTERTp—HSV—TK—linker—IL-12。
- 张鹏符伟军洪宝发程龙叶棋浓张旭
- 关键词：端粒酶逆转录酶启动子单纯疱疹病毒胸苷激酶基因白细胞介素12
- 乳腺癌转移、侵袭相关基因研究
- 2004年
- 乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤。每年约有30 %的乳腺癌患者发生癌细胞转移现象,导致发病率及死亡率上升,成为影响其疗效的主要原因。了解乳腺癌转移、侵袭相关基因对于预防和治疗乳腺癌转移具有重要作用。对近年来发现的乳腺癌转移、侵袭相关基因作一综述。
- 方言叶棋浓黄翠芬
- 关键词：乳腺癌相关基因
- Akt1原核表达载体GST-Akt1的构建及鉴定
- 2016年
- 目的:构建带GST标签的Akt1原核表达载体,获得GST-Akt1原核表达蛋白,并进行体外激酶实验验证其能否发生磷酸化修饰。方法:以乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增出Akt1编码序列,将其插入p GEX-KG载体,鉴定正确后转化大肠杆菌Rossate诱导表达,纯化蛋白后进行体外激酶实验,检测得到的蛋白是否可以发生磷酸化修饰。结果:双酶切和测序结果表明GST-Akt1原核表达质粒构建成功,考马斯亮蓝染色结果表明GST-Akt1蛋白获得表达,体外激酶实验表明GST-Akt1蛋白可发生磷酸化修饰。结论:构建了带GST标签的Akt1原核表达载体,为进一步研究Akt1磷酸化发生和调节的机制奠定了基础。
- 麦宏旭夏静霖张春霞营孙阳程龙叶棋浓
- 关键词：AKT1克隆原核表达
- PHLPP2基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及对舌癌细胞Tca8113增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的构建稳定表达PHLPP2小发夹RNA(shRNA)的Tca8113细胞系,研究敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化水平和Tca8113细胞生长的影响。方法利用RNA干扰(RNAi)技术,设计并合成针对PHLPP2基因的shRNA,并将其克隆到shRNA表达载体PSIH-H1上。经测序成功后,包装病毒并感染舌癌细胞Tca8113,建立敲低PHLPP2的稳定细胞株。通过实时定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹实验检测RNAi的干扰效果。利用Western印迹实验和细胞生长曲线检测敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化及细胞生长的影响。结果经测序证明,成功构建PHLPP2 shRNA真核表达载体。qRT-PCR和Western印迹实验证明,构建的shRNA能有效抑制PHLPP2的表达,并构建敲低PHLPP2基因的Tca8113稳定细胞系。实验表明,敲低PHLPP2可促进细胞的生长并升高Akt Ser473的磷酸化水平。结论成功构建PHLPP2基因的shRNA真核表达载体,转染细胞后能有效抑制PHLPP2基因的表达,且能升高Akt Ser473的磷酸化水平并促进细胞的生长,为进一步研究PHLPP2在舌癌中的功能及机制奠定了基础。
- 林佳佳程龙杜佩云姜丽娜麦宏旭夏靖霖张菊会叶棋浓王恩群
- 关键词：舌癌慢病毒属
