丁丽华
- 作品数：95 被引量：142H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 敲减人HPIP基因表达抑制细胞生长增殖被引量：3
- 2011年
- 为了探讨人造血相关的PBX相互作用蛋白质基因(HPIP)在肿瘤发生发展中的生物学作用,构建了HPIP小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,验证其敲减效果并观察其对细胞生长增殖的影响.根据人HPIP的cDNA序列,设计了含有小发卡结构的寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测HPIP基因的表达水平;结晶紫实验及流式细胞技术检测敲减HPIP基因表达对细胞生长和增殖的影响,软琼脂实验检测对肿瘤细胞非锚定依赖性生长的影响.结果显示,构建的siRNA能够有效抑制HPIP基因的表达;结晶紫实验与细胞周期分析实验显示,siRNA介导的HPIP表达沉默导致细胞生长增殖的显著抑制,软琼脂实验结果表明,稳定转染HPIP siRNA能够抑制肿瘤细胞的锚定非依赖性生长.上述结果初步表明,HPIP siRNA能明显抑制肿瘤细胞的生长与增殖,可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点.
- 徐小洁王凌雪范忠义丁丽华张浩杨智洪李杰之叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA细胞生长细胞增殖
- 雌激素信号通路在肿瘤中的调控机制
- 叶棋浓黄君健丁丽华张浩金蕊
- 该项目属于基础医学研究领域。肿瘤是危害人类健康的重大疾病，它的发生发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。美国两位科学家因癌基因的发现而获得1989年诺贝尔生理学或医学奖。一些肿瘤的发生具有性别差异，如乳腺癌和肝癌，...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤疾病
- 人EYA基因家族的克隆、表达及转录活性分析
- 2007年
- 采用PCR方法从人组织或细胞cDNA文库中扩增Eya基因家族的完整编码序列,将所扩增的基因克隆到带FLAG标签的真核表达载体上,转染人胚肾293T细胞,Western blot鉴定Eya基因家族的表达。检测Eya基因及其与Six基因共转染对MEF3-Luc转录活性的影响。经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确,通过Westernblot实验证明Eya基因家族真核表达载体构建成功。荧光素酶活性测定显示Eya能协同Six激活肌细胞生成素的表达。进一步证实Eya是Six的转录共激活因子,能提高肌细胞增强因子的活性。
- 袁斌熊志红丁丽华韩聚强张浩王朝云李杰之叶棋浓
- 关键词：克隆基因表达转录活性
- 雌激素受体β的研究进展被引量：8
- 2005年
- 雌激素受体β(ERβ)属于核受体超家族成员,是一类配体调节的转录因子。ERβ与ERα的结构相似,但在组织学分布、生物学功能等方面不尽相同,具有重要的生理学和病理学意义。本文就ERβ的基因结构、分子生物学特性、组织分布、转录调控的分子机制以及与肿瘤发生、发展的关系作一综述。
- 袁斌丁丽华褚春雨叶棋浓
- 关键词：雌激素受体Β转录因子基因表达调控肿瘤
- DEK基因RNAi慢病毒表达载体的构建及其功能鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的构建DEK基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法采用RNAi技术,根据DEK基因的序列,确定其有效靶序列,合成DEK基因的Oligo DNA,退火形成双链DNA,将其克隆到经Bam HⅠ与EcoRⅠ酶切后的小干扰RNA(siRNA)表达载体PSIH-H1上,产生PSIH-H1-DEK慢病毒载体,筛选阳性克隆并测序鉴定。与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染乳腺癌细胞ZR75-1,经嘌呤霉素(puromycin,puro)筛选2周后,收集部分细胞利用实时聚合酶链反应(real time-PCR,RT-PCR)和Western印迹分别检验DEK在信使RNA(mRNA)和蛋白水平的敲低效果,并通过细胞生长实验检测DEK对人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞生长的影响。结果 PCR和DNA测序结果证实,DEK siRNA慢病毒表达载体PSIH-H1-DEK构建成功。RT-PCR和Western印迹结果显示,构建的DEK siRNA可有效抑制DEK基因的表达,并由此建立了敲低DEK的稳定克隆。生长曲线实验表明,DEK siRNA可抑制人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞的生长。结论成功构建了DEK基因的RNAi慢病毒表达载体,感染人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞后,有效沉默了ZR75-1细胞中的DEK基因的表达,为进一步研究DEK基因在乳腺癌中的作用奠定基础。
- 朱杰刘婕丁丽华禾荣华张亚楠陈志达罗晓丽叶棋浓吕朝晖
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
- VEGF启动子活性的测定被引量：2
- 2013年
- 目的构建含有VEGF基因的不同片段启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测VEGF启动子不同片段的活性。方法用PCR扩增出VEGF启动子的不同片段,插入到荧光素酶报告基因载体pGL4-basic中,确定所扩增的DNA序列后,将其转染至293T细胞中,检测其不同片段的活性。结果测序结果表明,扩增的不同片段的VEGF启动子序列正确;荧光素酶活性实验表明,VEGF启动子+72～-128 bp至+72～-528 bp片段具有较高的活性。结论构建了VEGF启动子5'端缺失不同片段突变体报告基因表达载体,为VEGF转录因子的筛选及功能研究提供了重要基础。
- 刘婕林娅红张亚楠丁丽华叶棋浓
- 关键词：荧光素酶报告基因转录活性
- 转录因子XBP1的融合表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：8
- 2004年
- 人X盒结合蛋白 1(XBP 1)为一种转录因子 ,与多种肿瘤的发生、发展有密切关系 .XBP 1有2种剪切形式 ,即XBP 1S和XBP 1U .将这 2种剪切形式中的一段相同编码序列 (编码 82～ 14 7位氨基酸 )重组于谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合蛋白表达载体pGEX KG中 ,构建成重组质粒pGST XBP 1(82～ 14 7位氨基酸 ) .将该重组质粒转化E .coliDH5α后 ,表达GST XBP 1(82～ 14 7位氨基酸 )融合蛋白 ,经谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析获得纯化的融合蛋白 .用此融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体 .利用制备的抗体分别用Western印迹和免疫细胞化学检测XBP 1的 2种剪切形式在哺乳动物细胞中的表达 .结果表明 ,该抗体对XBP 1的 2种剪切形式均具有反应原性 ,效价高 ,特异性好 ,可以用于进一步研究XBP
- 刘雨飞丁丽华郝春芳方言赵福弟黄翠芬杨晓叶棋浓
- 关键词：多克隆抗体
- 人Egr-1启动子的克隆及其在肿瘤细胞中的辐射诱导反应被引量：3
- 2009年
- 目的:克隆人Egr-1基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,并检测电离辐射对其活性的影响。方法:采用PCR技术从人乳腺癌细胞系MCF-7基因组中扩增出Egr-1启动子,将其克隆到pGL3-basic载体中;将重组质粒转染人肿瘤细胞,测定Egr-1启动子在不同辐射条件下转录活性的改变。结果:成功构建了Egr-1启动子的荧光素酶报告基因;在不同剂量的γ射线照射后,Egr-1的启动子活性均明显高于未照射组;在同一剂量照射后48 h,Egr-1的启动子活性达峰值。结论:本实验构建的Egr-1启动子具有辐射激活的功能,为进一步研究放射-基因治疗奠定了基础。
- 徐小洁丁丽华王凌雪秦玺程龙蒋凯叶棋浓
- 关键词：EGR-1启动子启动子活性
- DEK真核表达载体的构建及其对p53启动子活性的影响
- 2013年
- 目的:构建DEK的pcDNA3-Flag表达载体,研究其对抑癌基因p53启动子活性的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增DEK编码序列,克隆到pcDNA3-Flag载体,构建成pcDNA3-Flag-DEK,转染293T细胞,Western印迹鉴定pcDNA3-Flag载体介导的DEK的表达,萤光素酶报告基因活性实验研究DEK对p53启动子活性的影响。结果:双酶切实验证实得到pcDNA3-Flag-DEK阳性克隆;Western印迹实验发现DEK在293T细胞内表达;转录活性实验表明在ZR75-1乳腺癌细胞中,DEK呈剂量依赖性抑制p53启动子的活性。结论:构建了DEK的真核表达载体,并发现此表达载体能在ZR75-1乳腺癌细胞中抑制p53启动子活性。
- 刘婕闫志风张亚楠林娅红丁丽华叶棋浓
- 关键词：DEK萤光素酶报告基因
- 血管内皮细胞生长因子启动子突变体萤光素酶报告基因载体的构建
- 2013年
- 目的:构建含有不同片段血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的启动子的萤光素酶报告基因载体,并定位缺氧诱导因子1α(HIF-1α)结合VEGF启动子的区域。方法:以VEGF全长启动子为模板,PCR扩增VEGF启动子的不同片段,插入萤光素酶报告基因载体pGL4-basic,确定所扩增的DNA序列后,将其与HIF-1α表达载体共转染293T细胞,定位HIF-1α结合VEGF启动子的区域。结果:测序结果表明扩增的不同片段的VEGF启动子序列正确;萤光素酶活性实验表明,-1128^-728 bp片段是HIF-1α与VEGF相互作用激活VEGF启动子转录活性的区域。结论:克隆了VEGF启动子5'端缺失突变体报告基因表达载体,为调控VEGF表达的转录因子的筛选及功能研究打下了良好基础。
- 张述刘婕刘世翠林娅红张亚楠丁丽华叶棋浓
- 关键词：血管内皮细胞生长因子启动子萤光素酶报告基因转录活性
