熊志红
- 作品数：43 被引量：141H指数：6
- 供职机构：解放军第309医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 雌激素受体α转录激活系统的构建被引量：3
- 2008年
- 目的构建雌激素受体α（ERα）的转录檄活系统。方法采用PCR技术构建ERa及其不同功能区（AF1、AF2和DBD）重组质粒并进行鉴定。将培养好的293T细胞分为pGAL—ERα组（转染pGAL—ERa重组质粒）、pGAL—ERαAF1组（转染pGAL—ERαAF1重组质粒）、pGAL—ERαAF2组（转染pGAL．ERaAF2重组质粒）、pGAL—ERαDBD（转染pGAL—ERαDBD重组质粒）及空白对照组（转染空载体）5组，各组同时转染0．2ug雌激素受体作用元件荧光素酶报告基因（ERE—LUC）和0．1ug表达B-半乳糖苷酶的质粒，作用4h后将各组细胞分为两部分，一部分加入雌二醇（终浓度10nmol／L）诱导，另一部分继续培养，24h后分别测定各组加入雌二醇诱导及未加雌二醇诱导的细胞的转录激活活性，并计算各组细胞与空白对照组细胞转录激活活性的比值。蛋白印迹法测定各重组质粒蛋白在293T细胞中的表达。结果加入雌二醇诱导后，pGAL—ERα组、pGAL—ERαAF1组、pGAL—ERαAF2组、pGAL—ERαDBD组细胞与空白对照组细胞的转录激活活性比值分别为20．44±1．01、2．09±0．11、8．09±0．30和1．05±0．09。构建的ERα及其不同功能区重组质粒蛋白在293T细胞中均有表达。结论成功构建了ERa的转录激活系统。
- 李杰萍熊志红杨智洪王朝云杨丽萍叶棋浓
- 关键词：转染聚合酶链反应
- 含VEGF启动子的报告基因的构建及雌激素受体对其活性的影响被引量：4
- 2007年
- 目的:构建含血管内皮生长因子(VEGF)基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素受体作用下的转录活性。方法:以乳腺癌细胞系MCF-7基因组为模板,扩增VEGF启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的报告基因载体转染293T细胞,检测重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明构建了正确的pGL3-basic-VEGF报告基因载体;转录活性实验表明构建的报告基因载体具有启动子活性,雌激素受体α(ERα)能以剂量依赖的方式升高VEGF启动子调控下的报告基因的转录。结论:克隆了VEGF启动子,为ERα共调节子的功能研究奠定了基础。
- 熊志红丁丽华杨树兴孙启鸿杨晓袁斌韩聚强王朝云程龙叶棋浓
- 关键词：荧光素酶报告基因转录活性雌激素受体
- 结核分枝杆菌PPE17蛋白原核表达与抗原性分析
- 2013年
- 目的利用原核系统生产重组结核分枝杆菌PPE17蛋白,Western-Blot方法鉴定PPE17蛋白的抗原性和特异性。方法 PCR扩增Rv1168c基因序列然后克隆至原核表达载体pET-24b中,对PPE17蛋白进行表达和纯化,并以Western blot分析其抗原性和特异性。结果 PPE17蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,复性后的PPE17蛋白与结核病患者阳性血清标本呈强阳性反应,与健康人血清标本无反应。结论 PPE17蛋白在大肠杆菌中以包涵体表达形式存在,具有抗原特异性和免疫原性,可开发为结核病临床诊断试剂。
- 孙卫国李邦印张灵霞熊志红李国利程小星
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达抗原性
- 重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究被引量：9
- 2002年
- 目的 :研究结核分枝杆菌重组 16 0 0 0蛋白 (rPA16 )诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法 :家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组 ,皮下多点注射分别进行免疫。 6次免疫后采血 ,双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验 (ELISA)跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应 ;同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应 ,并用rPA16抗原检测人血清标本 ,分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果 :兔血清抗体效价结果显示 :5个月后 ,加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体 ,不加佐剂组 2个月后血清抗体检测即为阴性。ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感 ,rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达 1∶6 4 0 0 ,不加佐剂组的血清抗体滴度仅为 1∶4 0 0。ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异性较好 ,仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应 ,与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性。同时又分析了rPA16抗原的特异性 ,与人型PPD相比 ,该抗原只与所试各类分支杆菌、BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应 ,而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应。ELISA检测血清标本结果 :肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性?
- 熊志红庄玉辉张晓刚何秀云董恩军史迎昌昌增益
- 关键词：结核分支杆菌免疫原性血清学诊断
- Rv2653c在大肠杆菌中的克隆与表达研究
- 目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法:根据H37Rv基因组序列合成引物,以PCR方法钓取Rv2653c基因,克隆到pGEM-T上,挑取阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET...
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：结核分枝杆菌大肠杆菌克隆
- 文献传递
- 结核分枝杆菌Rv3425蛋白的原核表达纯化及其血清学诊断价值被引量：1
- 2013年
- 目的:用原核系统表达结核分枝杆菌Rv3425蛋白并纯化,评价该重组蛋白在结核病血清学诊断方面的价值。方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板,PCR扩增得到Rv3425基因序列,克隆至表达载体pET-28a中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导、表达后纯化,用Western印迹和ELISA法进行抗原性初步评价。结果:在原核系统内经IPTG诱导表达后,Rv3425蛋白主要以包涵体形式存在,经复性和镍柱层析纯化后,纯度达95%以上;Western印迹和ELISA结果证明重组Rv3425具有较强的抗原活性;用纯化的Rv3425蛋白做抗原,临床诊断结核病人血清,阳性率达50%。结论:高纯度的Rv3425蛋白在结核病诊断方面具有很高的应用价值,可作为结核病诊断的备选抗原。
- 孙卫国李邦印刘艳华张灵霞熊志红程小星
- 关键词：结核分枝杆菌原核表达血清学诊断
- 结核分枝杆菌PPE19的克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌PPE19的GST融合蛋白表达载体,并鉴定其在大肠杆菌中的表达。方法以结核杆菌H37Rv基因组为模板,根据PPE19基因序列设计引物,运用PCR的方法获得PPE19基因,并将其克隆到pGEX-kg载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行质粒的酶切和序列分析;将构建正确的克隆进行诱导表达,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析;用western-blot鉴定融合蛋白的表达。结果正确构建了pGEX-PPE19原核表达载体,载体上基因序列正确;载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白;该蛋白能与GST抗体结合。结论成功构建了GST-PPE19融合蛋白的表达载体,为进一步进行PPE19蛋白的功能研究奠定了基础。
- 熊志红朱琰李仁德庄玉辉程小星
- 关键词：结核分枝杆菌GST融合蛋白
- 人eya2基因小干扰RNA表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的:设计并构建人eya2(eyes absent2)基因小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并观察其沉默效果。方法:以人eya2为靶基因,以pSliencer2.1-U6neo质粒为载体,根据人eya2的cDNA序列,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;转化大肠杆菌DH5α菌株,抽提质粒,测序分析;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过荧光分析、Western blot和转录活性实验检测其抑制效果。结果:重组体测序结果与目的序列相一致,证明构建了eya2 siRNA真核表达载体;荧光观察表明siRNA能显著减弱细胞中绿色荧光强度,抑制eya2基因表达;Western blot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性eya2基因表达;转录活性测定表明,构建的siRNA能有效抑制eya2基因表达。结论:构建了eya2 siRNA真核表达载体,该siRNA能有效地抑制eya2基因表达。
- 袁斌丁丽华熊志红韩聚强张浩王晓辉杨智洪叶棋浓
- 关键词：小干扰RNA转录
- 细胞周期蛋白B1、D1和E真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的:为研究细胞周期蛋白(cyclin)在肿瘤形成过程中的分子机制,构建带FLAG标签的细胞周期蛋白B1、D1、E的真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达。方法:以乳腺cDNA文库为模板,分别扩增细胞周期蛋白B1、D1、E基因全长编码区序列,克隆到pcDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的表达载体转染293T细胞,检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-Cyclin真核表达载体,Western印迹分析表明克隆的载体都能在真核细胞中表达分子大小相符的重组蛋白。结论:构建了FLAG-CyclinB1、FLAG-CyclinD1、FLAG-CyclinE真核表达载体,为细胞周期蛋白及其相关蛋白的研究奠定了基础。
- 熊志红丁丽华袁斌王朝云李杰萍杨丽萍杨智洪叶棋浓
- 关键词：细胞周期蛋白克隆真核表达
- Rv2653c在大肠杆菌中的克隆与表达研究
- 目的：从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法：根据H37Rv基因组序列合成引物，以PCR方法钓取Rv2653c基因，克隆到pGEM-T上，挑取阳性克隆进行测序，将正确编码基因克隆到pE...
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：结核分枝杆菌大肠杆菌基因克隆蛋白表达结核病
