张俊杰
- 作品数：18 被引量：48H指数：5
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人era的结构特点分析及其定点突变体的构建被引量：4
- 2002年
- 目的 构建最近克隆的人era基因的定点突变体。方法 利用数据库对era的结构特点进行分析 ,在此基础上用改良的重叠延伸法分别构建人EraN端和C端的定点突变体。结果 获得了分别针对人EraN端TGP结合结构域 (位于2 9 - 36氨基酸残基 )和C端具有RNA结合活性的KH结构域 (位于 2 97- 340氨基酸残基 )的定点突变体。
- 纪宗玲陈苏民陈南春吴元明刘继中路凡张俊杰
- 关键词：结构特点定点突变体ERA基因基因突变
- 带绿色荧光蛋白标签的人era真核表达载体的构建及人Era对细胞形态和细胞周期的影响被引量：5
- 2003年
- 目的 :构建人era真核表达载体并初步研究这一人类新基因对体外培养细胞形态和细胞周期的作用。方法 :构建带绿色荧光蛋白 (EGFP)标签的人era真核表达载体 ,转染体外培养细胞NIH3T3,用荧光显微镜观测和流式细胞仪进行分析。结果 :无论EGFP融合于人Era的C端或N端 ,融合蛋白均表达于细胞浆接近核膜处 ,细胞形态无明显变化 ,细胞周期检测S期细胞所占百分数降低。结论 :人era可能参与细胞周期调控 ,为阐明人era的功能提供了资料。
- 纪宗玲陈苏民刘断中吴元明张俊杰路凡朱帮福李毅
- 关键词：基因表达细胞形态细胞周期绿色荧光蛋白ERA基因
- 人Era和人EraC端蛋白在大肠杆菌中的高表达
- 2001年
- 目的 在大肠杆菌中的高表达人 Era和人 Era C端蛋白 .方法 PCR扩增人 era基因 (h- era)的全长 c DNA和 h-era c DNA的 C端区域基因 . h- era c DNA克隆到 (His) 6融合表达载体 p RSET- C中 ,构建融合表达质粒并转化大肠杆菌BL 2 1(DE3) ,经 IPTG诱导表达 (His) 6 - h- Era融合蛋白 ;h- erac DNA的 C端区域基因克隆到非融合表达载体 p DH中 PL 启动子下游 ,转化大肠杆菌 TAP10 6 ,42℃热诱导表达人 Era C端蛋白 (h- Era- C) . SDS- PAGE电泳、凝胶薄层扫描检测蛋白的表达 .结果 表达的 (His) 6 - h- Era融合蛋白产物占全菌总蛋白的 80 % ;人 Era C端蛋白占全菌总蛋白的 40 % .结论 人 Era蛋白和 Era C端蛋白在大肠杆菌中获得了高表达 .
- 张俊杰吴元明纪宗玲陈南春陈苏民
- 关键词：人ERA大肠杆菌基因表达
- 血管抑素K(1～3)基因片段的克隆与序列测定被引量：1
- 2000年
- 吴景文章翔柴玉波高大宽易林华张俊杰刘先珍
- 关键词：脑肿瘤实体瘤克隆
- 人组织era基因mRNA的表达谱被引量：9
- 2001年
- 目的 研究人 era基因 m RNA在不同组织、不同细胞系的表达水平 .方法 用 α([32 p]d CTP标记人 era编码区基因作为探针 ,分别用 Northern杂交和斑点杂交分析含 12种不同成人组织 m RNA的 Multiple tissue northern(MTN)blot膜和含 76种成人、胎儿及常用细胞系 m RNA的 Multipletissue expression (MTE) array膜 ,并用同位素扫描系统对杂交结果进行图像分析 .结果 Northern blot杂交所检测的 12种组织中均有位于 2 .2 kb处的杂交条带 ,斑点杂交显示人era m RNA在所检测的 76种组织中均有表达 ,但表达水平有很大差异 ,在神经系统、某些胎儿组织以及某些肿瘤细胞中高表达 .结论 人 era m RNA表达于所有检测的组织或细胞系 ,可能为一种组成性表达的基因 .
- 纪宗玲柴玉波陈苏民张俊杰陈南春吴元明
- 关键词：基因核酸杂交基因表达ERA基因
- 成纤维细胞中hEra-EGFP融合蛋白的表达定位被引量：2
- 2001年
- 目的 研究人 era基因在体外培养细胞中的定位 .方法 将人 era基因克隆入带绿色荧光蛋白 (EGFP)荧光标签的真核表达载体 p SMEGFP,使其位于 EGFP的 N端 ,转染NIH3T3细胞 ,于转染后 2 4和 36 h分别用荧光显微镜观察 .结果 成功构建了 EGFP- h Era融合蛋白的表达载体 ,转染细胞后可见融合蛋白位于细胞的胞质近核膜处 .结论 用EGFP融合蛋白的方法初步将 h
- 纪宗玲陈苏民陈南春张俊杰吴元明刘慧平
- 关键词：基因基因表达成纤维细胞
- 重组人Era蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定被引量：2
- 2008年
- 目的:为了得到可溶性表达的人Era(hEra)蛋白,并检测其生物学活性。方法:把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆入表达质粒pMAL-p2x中。pMAL-hEra转化大肠杆菌TB1,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:pMAL-hEra载体表达的融合蛋白是以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的23.9%。再利用直链淀粉亲和色谱柱对表达的融合蛋白进行纯化,接着用因子X将融合部分切除,但切除后的hEra蛋白不稳定,随着时间的延长而被降解。活性测定结果表明人Era蛋白能与GTP结合,并具有GTP酶的活性。结论:可溶性表达了人Era蛋白,并用体外实验证实人Era蛋白是一种G蛋白,这对人era基因的功能研究具有重要意义。
- 吴元明张晓楠邢小红张俊杰陈南春陈苏民
- 关键词：人ERA可溶性表达生物活性测定
- 人era真核表达载体的构建
- 2002年
- Era是一个独特的含有RNA结合KH结构域的G蛋白亚家族,哺乳类era新近被克隆,目前还没有关于其功能的研究报道。构建了带流感病毒血凝素9肽表位标签(HAtag)的野生型人era基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养细胞CHO,Westernblot鉴定表明目的基因得到表达。为深入探讨人era基因的功能奠定了坚实的基础。
- 纪宗玲陈苏民刘继中吴元明路凡柴玉波李毅张俊杰
- 关键词：人ERA真核表达载体基因表达CHO细胞
- 人era基因的克隆测序及表达被引量：7
- 2000年
- 目的 克隆人的 era基因 (简称 Hera)并利用大肠杆菌进行表达 .方法 PCR扩增 Hera基因 ,测序正确后克隆入大肠杆菌融合表达载体 p GEX- 4T3,受控于 Ptac启动子 ,重组质粒 p GEX- Hera以大肠杆菌 DH5α为宿主菌 ,用 IPTG进行诱导表达 .结果 克隆了 Hera基因 ,测序正确 ;含重组质粒p GEX- Hera的菌体诱导后在 SDS- PAGE上出现一条新生蛋白带 ,相对分子质量为 6 5 ku,占菌体总蛋白的 2 3% .结论 成功扩增、克隆 Hera基因 。
- 吴元明张俊杰纪宗玲刘惠萍陈南春陈苏民
- 关键词：ERA基因基因克隆大肠杆菌
- 兔抗人ERA多克隆抗体的纯化被引量：9
- 2001年
- 目的纯化兔抗人ERA的多克隆抗体。方法在大肠杆菌中,表达重组MBPhEra融合蛋白。表达产物先继以直链淀粉树脂亲和柱和Superose12凝胶柱过滤纯化。将纯化的MBPhEra偶联于NHSactivatedSepharoseTM上,制备亲和层析柱,纯化兔抗人ERA多克隆抗体。结果①表达、纯化的MBPhEra,相对分子质量Mr为78×103,其纯度为95%。②从抗血清中纯化获得可与MBPhEra特异性结合的兔抗hEra多克隆抗体。结论获得了特异性较好的纯化兔抗hEra多克隆抗体。
- 万亚坤张俊杰陈南春陈苏民
- 关键词：人ERA多克隆抗体纯化ERA基因
