纪宗玲
- 作品数：55 被引量：227H指数：7
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人组织era基因mRNA的表达谱被引量：9
- 2001年
- 目的 研究人 era基因 m RNA在不同组织、不同细胞系的表达水平 .方法 用 α([32 p]d CTP标记人 era编码区基因作为探针 ,分别用 Northern杂交和斑点杂交分析含 12种不同成人组织 m RNA的 Multiple tissue northern(MTN)blot膜和含 76种成人、胎儿及常用细胞系 m RNA的 Multipletissue expression (MTE) array膜 ,并用同位素扫描系统对杂交结果进行图像分析 .结果 Northern blot杂交所检测的 12种组织中均有位于 2 .2 kb处的杂交条带 ,斑点杂交显示人era m RNA在所检测的 76种组织中均有表达 ,但表达水平有很大差异 ,在神经系统、某些胎儿组织以及某些肿瘤细胞中高表达 .结论 人 era m RNA表达于所有检测的组织或细胞系 ,可能为一种组成性表达的基因 .
- 纪宗玲柴玉波陈苏民张俊杰陈南春吴元明
- 关键词：基因核酸杂交基因表达ERA基因
- 成纤维细胞中hEra-EGFP融合蛋白的表达定位被引量：2
- 2001年
- 目的 研究人 era基因在体外培养细胞中的定位 .方法 将人 era基因克隆入带绿色荧光蛋白 (EGFP)荧光标签的真核表达载体 p SMEGFP,使其位于 EGFP的 N端 ,转染NIH3T3细胞 ,于转染后 2 4和 36 h分别用荧光显微镜观察 .结果 成功构建了 EGFP- h Era融合蛋白的表达载体 ,转染细胞后可见融合蛋白位于细胞的胞质近核膜处 .结论 用EGFP融合蛋白的方法初步将 h
- 纪宗玲陈苏民陈南春张俊杰吴元明刘慧平
- 关键词：基因基因表达成纤维细胞
- 骨形成蛋白诱导型真核载体的构建及其表达
- 2003年
- 成骨分化相关基因骨钙素 (OC)等的启动子内均含有成骨特异性转录因子Cbfa1特异性作用元件 ,而骨形成蛋白 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)的促成骨分化作用正是通过其首先引起Cbfa1的升高 ,而后Cbfa1激活这些基因的表达 ,最终出现成骨分化表型 .为解决BMP没有理想的活性测定方法的问题 ,在RT PCR结果证实BMP 2可促进NIH3T3和C2C12细胞Cbfa1表达后 ,构建了串联6个Cbfa1作用元件的小鼠OC部分启动子 (6OCP)控制萤光素酶 (luciferase)报告基因的真核表达质粒 ,以期来放大BMP诱导报告基因表达的作用效果 .即通过细胞转染、rhBMP 2刺激后检测萤光素酶活性变化 ,从而间接定量测定rhBMP 2的生物学活性 .结果表明 ,pcDNA3 6OCP Luc转染细胞后其报告基因的基础活性较pcDNA3 Luc大为降低 ;而且在一定剂量范围内 ,转染细胞的萤光素酶活性 (荧光值 )随rhBMP 2剂量增加而升高 ,并呈线性正相关 。
- 朱帮福卢兹凡陈苏民陈南春纪宗玲张斌柴玉波李毅
- 关键词：骨形成蛋白基因表达萤光素酶
- 人DOC-2氨基端PID结构域的克隆与原核表达被引量：4
- 2003年
- 目的 :克隆人DOC 2氨基端PID结构域 (暂命名为nDOC 2 ) ,并在原核细胞中表达。方法 :用RT PCR从正常人卵巢组织中扩增nDOC 2基因 ,并克隆到载体 pUC 19中。经测序证实后 ,用BamHI/EcoRI双酶切 ,亚克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1,并转化E .coliDH5α菌株。取工程菌 ,用IPTG诱导表达 ,对表达产物进行SDS PAGE鉴定。结果 :①经RT PCR、测序和酶切鉴定 ,成功地克隆了人nDOC 2基因。②经IPTG诱导的重组质粒pGEX 4T nDOC 2表达出相对分子质量 (Mr)约为 5 0 0 0 0的融合蛋白 ,与预期的结果相符。结论 :成功克隆到人DOC 2氨基端PID结构域 ,并在E .coliDH5α中表达出GST nDOC
- 刘淑娟郑维国纪宗玲陈苏民张新海杨力军
- 关键词：DOC-2肿瘤抑制基因基因克隆原核表达
- hIL-15成熟肽段基因的克隆及其原核表达载体的构建被引量：3
- 1999年
- 本文采用ＲＴＰＣＲ的方法自成人脾脏中扩增出ｈＩＬ１５成熟肽段基因，定向克隆入ｐＵＣ１９中，筛选带有插段的阳性克隆。经序列测定证实后，插入大肠杆菌融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１中，构建重组表达质粒ｐＧＩＬ１５。ＳＤＳＰＡＧＥ证实ｐＧＩＬ１５大肠杆菌中可表达分子量为３８６ｋＤ的融合蛋白带，表达量约占菌体总蛋白的１８５％。目的蛋白经纯化后具有促进靶细胞ＤＮＡ合成的作用。
- 纪宗玲陈苏民余宙耀高磊高磊陈南春粟宽源
- 关键词：RT-PCR分子克隆原核表达活性测定
- 人破骨细胞生成抑制因子在真核细胞中的表达被引量：2
- 2002年
- 目的克隆人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCIF)编码区基因并在真核 细 胞中表达，为进一步研究OPG/OCIF的生理功能及探讨骨质疏松症等疾病的治疗奠定基础。方法以人骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板，采用RT-PCR法得到人OPG/OCIF 的 编码区cDNA，构建真核表达载体并转染成肌细胞，应用核酸杂交及western blot法证实OP G/OCIF在真核细胞中表达。结果获得人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCI F) 编码区全长cDNA，经序列测定证实与文献报道的OPG/OCIF编码区基因的核苷酸序列完全一致 。成功构建OPG/OCIF真核表达载体pcDNA3-OPG。重组质粒转染小鼠成肌细胞C2C12，建立稳 定转染OPG/OCIF编码区cDNA的细胞系，经核酸杂交及western blot法证实OPG/OCIF在真核细 胞中表达。结论 获得人破骨细胞生成抑制因子(OPG/OCIF)编码区全长cD NA并证实在真核细胞中表达，为OPG/OCIF进一步的功能研究奠定了基础。
- 刘继中纪宗玲陈苏民胡蕴玉路凡陶惠人
- 关键词：基因重组真核细胞表达骨质疏松症RT-PCR
- 人破骨细胞分化因子基因的克隆及在COS-7细胞中的表达
- 2003年
- 目的 克隆人破骨细胞分化因子 (ODF)基因并在真核细胞中表达。方法 以人骨肉瘤细胞系MG6 3的总RNA为模板 ,采用反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法得到ODF的编码区cDNA ,构建真核表达载体pcDNA 3 1(+) ODF ,在脂质体介导下转染非洲绿猴肾细胞系 (COS) 7,经G4 18压力筛选建立稳定转染人ODF的细胞系 ,Western印迹检测其在COS 7细胞中的表达。结果 获得的人ODFcDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致 ,Western印迹证实稳定转染人ODF的COS 7细胞系中有ODF的表达。结论 构建了人破骨细胞分化因子 (ODF)的真核表达载体 ,并在COS 7细胞中获得稳定表达。
- 杨彤涛杨辉范清宇刘继中马保安张勇纪宗玲陈苏民
- 关键词：基因克隆基因表达骨保护素类风湿关节炎
- 人era基因的克隆测序及表达被引量：7
- 2000年
- 目的 克隆人的 era基因 (简称 Hera)并利用大肠杆菌进行表达 .方法 PCR扩增 Hera基因 ,测序正确后克隆入大肠杆菌融合表达载体 p GEX- 4T3,受控于 Ptac启动子 ,重组质粒 p GEX- Hera以大肠杆菌 DH5α为宿主菌 ,用 IPTG进行诱导表达 .结果 克隆了 Hera基因 ,测序正确 ;含重组质粒p GEX- Hera的菌体诱导后在 SDS- PAGE上出现一条新生蛋白带 ,相对分子质量为 6 5 ku,占菌体总蛋白的 2 3% .结论 成功扩增、克隆 Hera基因 。
- 吴元明张俊杰纪宗玲刘惠萍陈南春陈苏民
- 关键词：ERA基因基因克隆大肠杆菌
- 两种不同剪接形式的小鼠ERA的细胞内定位
- era基因是在测定大肠杆菌基因组序列时,在编码RNaseIII的rnc基因下游发现的一个开放读框,它编码的Era蛋白属于一类新的G蛋白家族,在结构上N端为GTP结合区,C端含有可与RNA结合的KH结构域.era基因细胞周...
- 纪宗玲陈苏民陈南春刘继中吴元明路凡
- 文献传递
- 人骨保护素(OPG)重组腺病毒的制备及其生物活性研究被引量：2
- 2003年
- 采用RT PCR法得到人OPG的编码区cDNA ,克隆至穿梭质粒pShuttle,构建重组有OPG编码区cDNA的腺病毒DNA ,经PacI酶切线性化 ,在脂质体介导下转染HEK2 93细胞 ,制备重组腺病毒并测定病毒滴度约为 5× 10 6 ～1 5× 10 7pfu mL。体外感染小鼠成肌细胞C2C12 ,Westernblot及ELISA检测证实有OPG蛋白的表达 ,并可在细胞培养上清中持续表达 6周。感染OPG重组腺病毒的C2C12细胞生长状态良好、细胞周期无明显变化。将重组腺病毒加入体外培养的小鼠骨髓细胞的培养基中 ,诱导形成的破骨细胞数量及在象牙片上形成的吸收陷窝的数量显著减少 (P <0 0 1)。
- 刘继中纪宗玲胡蕴玉陈苏民朱帮福杨彤涛
- 关键词：人骨保护素OPG重组腺病毒生物活性破骨细胞
