梁瑜
- 作品数：10 被引量：65H指数：6
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SARS冠状病毒的分离培养与鉴定被引量：12
- 2003年
- 采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用:电镜下可观察到冠状病毒样颗粒:RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100％。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。
- 江丽芳赵卫晏辉钧方丹云周经姣龙北国吴义芳周俊梅梁瑜张文炳吴强郭辉玉
- 关键词：传染性非典型肺炎SARS冠状病毒
- 广州管圆线虫成虫cDNA文库抗原基因的筛选被引量：10
- 2004年
- 目的从广州管圆线虫成虫cDNA文库中筛选特异性抗原基因。方法用大鼠感染血清做免疫探针,筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库,对筛选得到的阳性克隆作交叉反应试验,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用在线生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列和蛋白质结构及进行功能分析。结果获得15个阳性克隆,分属三种基因,1个属中间纤维(IF)家族基因,3个与旋盘尾丝虫和秀丽杆线虫的真皮抗原同源,11个属主要精原蛋白(MSP)家族基因。其中1种基因表达产物没有发生明显交叉反应。结论从广州管圆线虫成虫cDNA文库中初步筛选出1个潜在特异性抗原基因和1个可能的主要抗原基因。
- 孟锦绣李卓雅詹希美吴长有沈浩贤梁瑜张瑞琳何蔼
- 关键词：CDNA文库抗原基因
- 广州管圆线虫成虫cDNA文库构建被引量：8
- 2003年
- 目的 构建广州管圆线虫成虫cDNA文库。方法 提取广州管圆线虫成虫总RNA ,用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA ,然后通过长距离PCR方法合成双链cDNA并扩增 ;PCR产物与λTripIE× 2载体连接并包装 ,建成未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库扩增及测定扩增文库的滴度。结果 经测定 ,未扩增文库滴度为 9 7× 1 0 6 pfu/ml,重组效率达 99 2 %以上 ,文库扩增后滴度达 9 1 3× 1 0 9pfu/ml。
- 梁瑜王轶何蔼李道宁俞慕华李卓雅张瑞琳詹希美
- 关键词：广州管圆线虫成虫CDNA文库广州管圆线虫病
- 甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化分析被引量：10
- 2010年
- 【目的】了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律。【方法】分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用RT-PCR技术扩增了病毒NA基因全序列,并对其分子进化和重要功能位点的遗传变异进行了分析。【结果】2009年新型H1N1流感病毒与2006年季节性HIN1流感病毒比较,NA基因的同源性较低(77.9%～78.8%),与世界各地不同年代代表株及WHO推荐的1979～2010年季节性流感疫苗株比较,NA基因的同源性也较低(78.1%～79.3%),但与WHO推荐的2009年新型H1N1流感疫苗株比较同源性则高达99%以上;系统进化分析结果表明,2009年新型H1N1流感病毒NA基因与欧亚猪流感病毒株A/swine/Belgium/1/1983的亲缘关系最近;并发现自2005年以来季节性H1N1流感病毒NA基因的某些抗原位点和神经氨酸酶活性位点已发生了变异。【结论】2009年新型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒;接种季节性流感疫苗不能对本次流行的新型流感产生有效的免疫保护作用;季节性H1N1流感病毒在流行过程中NA基因已发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测病毒的变异情况。
- 田疆周经姣陈艺韵梁瑜晏辉钧周俊梅刘岩付春云高洪丽方丹云狄飚江丽芳
- 关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化
- 广州管圆线虫γ-丁基甜菜碱羟化酶基因的获得与分析被引量：7
- 2004年
- 目的 对广州管圆线虫成虫cDNA文库的插入片段进行研究。方法 铺平板培养广州管圆线虫成虫cDNA文库 ,从中挑选生长、分离良好的噬菌斑进行PCR扩增 ,根据PCR产物电泳结果挑选较大的cDNA插入片段进行克隆、测序和原核诱导表达 ,对表达产物进行免疫学鉴定 ,用生物信息学方法分析其结构和功能。结果 获得了国内外尚未见报道的广州管圆线虫全长基因 ,该基因长 14 16bp ,编码由 4 2 1个氨基酸组成的γ -丁基甜菜碱羟化酶 (gamma -butyrobetaine ,2 -oxoglu taratedioxygenase ,GAMMA -BBH ,EC 1 14 11 1) ;免疫学鉴定结果显示GAMMA -BBH不能与大鼠的抗血清结合。 结论 首次获得广州管圆线虫成虫GAMMA -BBH表达基因 ,为广州管圆线虫的研究提供实验室依据。
- 孟锦绣梁瑜何蔼李卓雅雷智刚易冰张瑞琳詹希美
- 关键词：广州管圆线虫基因CDNA文库生物信息学
- 广州地区484例登革热患者血清学检测及病毒分离株E基因序列分析被引量：1
- 2009年
- 目的对2006年广州地区登革热患者的血清进行检测，并对分离的病毒株进行E基因序列分析，以了解可能的传播来源。方法用免疫层析法（ICT）检测患者血清登革病毒IgM和IgG抗体，并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测登革病毒非结构蛋白1（NS1）抗原和IgM抗体；C6／36细胞微量法对发病2d内患者的血清进行登革病毒的分离培养，并用免疫荧光检测（IFA）及RT—PCR法对病毒分离株进行鉴定；测定分离株DVI—GZ42／06的E基因序列，与国内外参考株、流行株进行同源性比较并构建系统进化树。结果ICT法检测患者登革病毒IgM和IgG的检出率分别为89．5％（433／484）及38．0％（184／484）。ELISA法检测患者血清NS1抗原的检出率为：第1～2天92．7％（38／41）、第3～5天83．3％（70／84）、第6～10天10．9％（5／46）；IgM抗体的检出率分别为2．4％（1／41）、51．2％（43／84）及97．8％（45／46）。病毒分离培养阳性率为61．0％（25／41），IFA及RT—PCR法证实为登革1型病毒。分离株Guangzhou／42／06的E基因序列与登革1型病毒标准株Hawaii／45的核苷酸同源性为94．6％；与Thailand／NI09VI04、Vietnam／06和Vietnam／07的同源性高，分别为99．0％、98．6％和98．6％，且处于同一进化分支上，亲缘关系很近，而与广东省2006年前分离株亲缘关系较远。结论登革病毒NS1抗原检测在登革病毒感染的早期诊断中有重要价值。2006年广州地区出现的登革热疫情由输入性病例引起本地暴发流行的可能性大。
- 卢业成梁瑜周经姣陈万山方丹云周俊梅张复春江丽芳
- 关键词：登革热血清学检测系统进化树
- 广州市褐云玛瑙螺感染广州管圆线虫的调查分析被引量：18
- 2007年
- 目的对广州市褐云玛瑙螺(Achatina fulica)感染广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)第Ⅲ期幼虫的情况进行调查和比较,填补广州市广州管圆线虫病的流行病学资料。方法分别于2000年7月和2004年7月对广州市天河区、海珠区和越秀区褐云玛瑙螺进行采样收集,消化法分离第Ⅲ期幼虫,计算感染率和感染度并与过去及国内其它地区进行比较,用灌胃法构建大鼠和小鼠动物模型,检测脑部和心肺晚期虫体。结果广州市褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染率,2000年为44.2%(57/129),感染度401条/螺,而2004年为27.3%(33/121),感染度为72条/螺,2次感染率差异有显著性(χ2=7.5,P<0.01),各区褐云玛瑙螺的感染率差异较大,最高达65.9%。褐云玛瑙螺的感染率与其螺重呈正比。用分离的第Ⅲ期幼虫构建了小鼠和大鼠动物模型,分别从脑部和心肺检出较晚期虫体。结论广州市褐云玛瑙螺的广州管圆线虫感染率和感染度2004年较2000年有明显下降,2004年感染率低于曾发生过广州管圆线虫病暴发流行的地区;小鼠适于构建广州管圆线虫第Ⅳ、Ⅴ期模型,大鼠适于构建第Ⅴ期和成虫模型。
- 孟锦绣詹希美程梅梁瑜李素丽甘明徐贵峰李卓雅余细勇蒋文玲李运雄何蔼
- 关键词：广州管圆线虫褐云玛瑙螺流行病学
- DENV2海南分离株NS1全序列测定和生物信息学分析被引量：1
- 2009年
- 目的:对登革病毒2型海南分离株NS1全序列进行测定和生物信息学分析,了解其系统进化和分子流行病学特征。方法:采用RT-PCR法扩增D2-Hainan全长NS1基因,将其克隆入载体pPIcZαB,测序,采用相关软件进行生物信息学分析。结果:获得D2-Hainan株NS1全长基因1056bp,其序列与登革病毒2型NGC株的同源性为95%。系统进化树分析显示该毒株与登革病毒2型China04株的亲缘关系最近。初步分析了NS1蛋白的氨基酸序列特征和二级结构。结论:登革病毒流行株存在地域性和复杂性,对D2-Hainan株NS1基因及其编码蛋白信息特征的了解,有助于进一步研究其基因特征与病毒毒力的关系。
- 周俊梅方丹云梁瑜尹悦江丽芳
- 关键词：登革病毒NS1基因生物信息学
- 广州4株登革1型病毒E基因的全序列测定和分子进化分析被引量：3
- 2008年
- 目的通过对广州市不同年份分离的4株登革1型病毒（DEN-1）蛋白E基因进行全序列测定及分子进化分析，了解各流行株之间的遗传差异及进化关系，追踪其可能的传染来源。方法应用RT-PCR技术分别扩增各株病毒的蛋白E基因，克隆到pGEM-TEasy载体，转化DH5α宿主菌，经PCR和酶切鉴定后进行序列测定。测序结果与国内外流行株进行同源性比较和毒力位点分析，并绘制基因系统发生树。结果4株DEN-1病毒E基因序列长度均为1485bp，编码495个氨基酸，核苷酸序列同源性为91％～98％，推导的氨基酸序列同源性为96．0％～99．2％。广州1995年流行的DEN-1和2002、2004、2006年流行株的毒力位点氨基酸存在差异。结论通过对登革1型病毒E基因的进化分析，GZ01／95、GZ01／02和GZ01／04这3株同属于基因型Ⅳ，而GZ17／06属于基因型Ⅰ。1995年广州地区流行的DEN-1可能来源于印度尼西亚，而2002和2004年的流行可能与澳大利亚流行株有关。2006年广州又出现的DEN-1可能与泰国2002年的流行株输入有关。
- 刘晓丽周俊梅梁瑜陶剑平方丹云周经姣江丽芳
- 关键词：登革病毒E基因分子进化
- 广东省首例人禽流感H5N1 NS、M和NP基因序列测定及分子进化分析被引量：2
- 2008年
- 目的对广东省首例人禽流感H5N1的3个内部基因NP、NS和M进行克隆、测序及遗传进化分析,旨在进一步了解该病毒的来源、遗传变异及其分子进化特征。方法采集该例死亡患者尸检肺组织标本提取病毒RNA,用RT-PCR二步法进行反转录和基因扩增。产物经TA克隆到载体中进行测序并对结果进行排列、拼接,参照已发表的病毒序列,对基因进行系统进化分析。结果应用随机引物和自行设计的3对特异性引物扩增出NP、NS和M基因全长cDNA序列。该3个基因同其HA、NA一样均属于A型禽流感病毒,与国内2004-2006年浙江人源病毒及湖南禽源病毒处于同一进化分支,而与香港1997年分离株相距较远。在这3个基因中,NS的变异性最大。宿主特异性相关基因及PDZ结构域配体(PL)基序分析显示其均为禽源基因。结论感染该病例的H5N1与近年在中国不同省份分离的人禽流感H5N1的系统进化分析显示它们很可能存在共同的祖先,需进一步研究不同来源病毒的亲缘关系以及病毒基因的变化是如何影响病毒的生物学特性、毒力和跨宿主传播的。
- 周俊梅方丹云付捷周经姣晏辉钧梁瑜江丽芳
- 关键词：H5N1亚型遗传进化
