江丽芳
- 作品数：150 被引量：454H指数：10
- 供职机构：中山大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 登革病毒TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：10
- 2012年
- 目的建立登革病毒TaqMan实时荧光定量PCR快速检测方法及应用于临床。方法根据1～4型登革病毒3'端非编码区的一段高度保守序列,设计一套型通用的引物和TaqMan MGB探针,以4个血清型登革病毒标准株为标准,以日本乙脑病毒和丙肝病毒作阴性对照,以包含登革病毒2型标准株(DENV-2NGC株)3'非编码区349bp片段的质粒DNA作标准品,对引物和TaqMan MGB探针的特异性、灵敏度进行分析,从而建立登革病毒实时荧光定量PCR检测方法。用该法对登革病毒野毒株和10份登革病毒患者血清进行检测。结果 TaqMan实时荧光定量PCR检测的1～4型登革病毒标准株及野毒株均为阳性,日本乙脑病毒和丙肝病毒均为阴性;检测灵敏度可达到每反应2个基因拷贝;检测的10份登革患者血清样本中,8份检测结果为阳性。结论 TaqMan MGB实时荧光定量PCR方法是一个快速、特异性强、敏感性高的检测登革病毒的方法,适用于登革病毒的临床早期诊断。
- 罗雅艳冯俊杰方丹云江丽芳
- 关键词：登革病毒TAQMANMGB实时定量RT-PCR
- 登革病毒3型病毒样颗粒在酵母体内的表达与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的探讨登革病毒3型病毒样颗粒(DENV3-VLPs)的免疫原性。方法用PCR法扩增登革病毒3型prME基因,插入载体pGAPZaA构建重组质粒pGAPZaA-prME-D3,将其转化毕赤酵母X33构建转化子pGAPZaA-prME-D3/X33。对转化子表达上清和细胞裂解液进行SDS-PAGE和Western blotting分析。用蔗糖密度梯度离心纯化表达的DENV3-VLPs并进行鉴定和电镜观察。结果成功构建重组载体pGAPZaA-prME-D3,获得酵母转化子pGAPZaA-prME-D3/X33,并应用毕赤酵母表达了DENV3-VLPs,表达蛋白约50000Mr,电镜观察VLPs直径为20～50nm。结论应用酵母表达系统成功表达了DENV-3VLPs,经鉴定表明其具有免疫反应性,为后续免疫原性研究及四价登革VLPs疫苗的构建奠定了基础。
- 付春云方丹云刘岩喻治准江汉宁江丽芳周俊梅
- 关键词：登革病毒病毒样颗粒毕赤酵母
- 登革病毒对人血管内皮细胞分泌ET-1及PGI_2的影响被引量：3
- 1999年
- 目的 研究登革病毒感染对人血管内皮细胞分泌重要的血管活性物质ＥＴ１ 及ＰＧＩ２ 的影响，以了解登革出血热及登革休克综合征（ＤＨＦＤＳＳ）的发病机制。方法 用登革病毒Ⅱ型，感染人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ） ，于感染后４ 、２４ 、４８ 、７２ 及９６ 小时，分别收集病毒感染上清液，用放射免疫检测法测定ＥＴ１ 及ＰＧＩ２ 的含量。结果 登革病毒感染可使ＨＵＶＥＣ分泌ＥＴ１ 及ＰＧＩ２ 的能力受到明显抑制。在病毒感染早期（４ 小时），ＨＵＶＥＣ分泌ＥＴ１ 及ＰＧＩ２ 的能力即受到明显抑制。登革病毒对ＨＵＶＥＣ分泌ＥＴ１ 抑制作用强烈而持久，至感染后９６ 小时，ＨＵＶＥＣ分泌ＥＴ１ 的能力与未受感染的阴性对照组比较，差异仍有显著性。然而，登革病毒对ＨＵＶＥＣ 分泌ＰＧＩ２ 的抑制作用，可随时间的推移而减弱，至感染后９６ 小时，ＨＵＶＥＣ分泌ＰＧＩ２ 的能力已达正常水平。结论 登革病毒感染可影响血管内皮细胞分泌血管活性物质ＥＴ１ 及ＰＧＩ２ 的功能，导致血管通透性增加和凝血、止血功能障碍。因此，登革病毒所致的血管内皮细胞功能障碍。
- 江丽芳郭辉玉方丹云
- 关键词：登革病毒前列环素
- 登革病毒非结构蛋白NS1群特异性单克隆抗体的制备及初步应用被引量：1
- 2011年
- 目的制备登革病毒NS1群特异性单克隆抗体,建立可检测登革病毒1～4型NS1抗原的ELISA检测法,为登革热的早期快速诊断奠定基础。方法应用毕赤酵母表达系统分泌表达登革病毒2型重组非结构蛋白NS1,以此为抗原免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经HAT选择培养、间接ELISA筛选和亚克隆,获得能稳定分泌登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用所获得的单克隆抗体建立可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结果从登革病毒2型NS1重组毕赤酵母(Pichia Pastoris-NS1)中获得了大量纯化的登革病毒重组NS1蛋白;经免疫小鼠、细胞融合、间接ELISA筛选及3次亚克隆后,最终获得2株能高效分泌抗登革病毒NS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D7B6B4和2D10E2F6,间接ELISA显示抗体效价高达1∶8000～1∶16000;ELISA及免疫荧光检测证实,其所分泌的抗体与1～4型登革病毒及其重组NS1蛋白均有特异性免疫反应,为登革病毒NS1群特异性单克隆抗体;两株单克隆抗体均为IgG2a亚类;初步建立了检测4个血清型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结论成功研制出两株能高效分泌抗登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。初步建立了可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA检测法。
- 高洪丽李兴华田疆方丹云付强刘岩周俊梅周经姣江丽芳
- 关键词：登革病毒单克隆抗体
- SARS-CoV基因组及其产物的生物学功能(Ⅱ)
- 2004年
- SARS CoV具有多种蛋白酶 ,其中有 3种蛋白酶 (解旋酶和另外两种半胱氨酸蛋白酶 )在病毒的复制、转录、翻译和 /或翻译后加工等过程中发挥重要的生理和病理作用 ;而其结构蛋白则在形成病毒粒子、参与病毒的致病机制中发挥重要作用 .本文综述了SARS CoV的主要产物酶及结构蛋白的结构及其功能等方面研究进展 .
- 唐小龙江振友江丽芳蔡淑玉方丹云
- 关键词：严重急性呼吸综合症冠状病毒开放读码框
- SARS冠状病毒M基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2006年
- 目的克隆SARS冠状病毒(SARS-CoV)GD322株M基因,并进行序列分析。方法根据GenBank中公布的SARS冠状病毒Tor2株M基因序列,设计一对引物,用RT-PCR法从SARS-CoVGD322株基因组中扩增M基因片段。克隆至pET-32(a)载体,转化大肠杆菌BL-21后测序,利用DNAstar和ClustalX分析所测序列翻译的氨基酸与81株SARS-CoVM基因翻译的氨基酸序列的差异。结果该M基因与Tor2株M基因核苷酸同源性为99.86%;与已收集的81株SARS-CoVM基因所译氨基酸相比,和41株(占50.62%)M蛋白完全同源,37株(占45.68%)仅有一个氨基酸改变,同源性为99.55%,仅与3株(占3.70%)有2个氨基酸差异,同源性为99.10%。结论已获得具有代表性的SARS-CoVM基因重组质粒。
- 胡族琼龙北国晏辉钧张文炳方丹云刘志伟周经姣江丽芳赵卫
- 关键词：SARS-COVM基因克隆
- 野苋菜花粉变应原组分分析
- 2004年
- 目的 :分析野苋菜花粉变应原提取液的蛋白组分。方法 :应用SDS -PSGE及薄层扫描。结果 :发现其有四条蛋白条带 :6 4 .2KD、占 34.3% ;34.0KD、占 4 9.1% ;2 0 .6KD、占 6 .0 % ;13.0KD、占 10 .4 %。结论 :野苋菜花粉变应原提取液以 34.0KD、6 4 .2KD的蛋白为主。
- 谢水祥刘志春曾祥凤江丽芳
- 型通用登革病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒
- 本发明公开了型通用登革病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测试剂盒，通用引物序列包括正向引物序列GCATATTGACGCTGGGAGAGA和反向引物序列GCGTTCTGTGCCTGGAATG，探针序列为AGATCCTGC...
- 江丽芳罗雅艳刘岩
- 文献传递
- 登革2型病毒调控血管内皮细胞凝血及抗凝系统相关蛋白的表达被引量：2
- 2006年
- 目的观察登革2型病毒(DV2)对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织因子(TF)、组织因子抑制物(TFPI)和血栓调节蛋白(TM)的影响。方法应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第二、三代细胞进行试验。应用CCK-8测定DV2感染对细胞活性的影响;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内TF、TFPI和TMmRNA水平。结果DV2对细胞活力的影响与对照组相比差异无统计学意义。DV2感染HUVEC后6h,TFPI mRNA水平显著下调(P<0.05),48h恢复到正常水平。TF mRNA对照组不表达,DV2组各时相均有微量表达。而DV2组抗凝蛋白TMmRNA表达显著高于对照组(F=17.855,P=0.000),24h达到峰值(P<0.05),以后渐下降,72h正常表达。结论DV2急性下调TFPI mRNA和微量上调TF mRNA表达,启动外源性凝血途径,促进血液凝固;但DV2诱导高水平的TM可有效地增强抗凝活性,这有利于出血和血浆外渗。结果提示DV可诱导血管内皮细胞所调控的凝血系统失调,这可能在登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的出血机制中起重要作用。
- 唐小龙蔡淑玉江振友左建生张荣波周昕江丽芳
- 关键词：登革热病毒凝血致活酶酶抑制剂血栓调节蛋白
- 登革病毒Ⅱ型NS1基因在小鼠体内诱导的DNA免疫
- 2005年
- 目的 研究含有登革病毒Ⅱ型NS1基因的重组质粒肌内注射小鼠后在其体内诱导的细胞和体液免疫。方法 用含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2 NS1于小鼠胫前肌注射并加强免疫 2次。然后定期处死 ,采集血液标本以及小鼠脾细胞 ,检测小鼠的体液和细胞免疫。结果 在末次免疫后 4周检测到小鼠抗NS1抗体 ,并且检测到小鼠CD4+ 、CD8+ 亚群的变化。结论 含有登革病毒NS1基因的真核表达质粒pCNX2-NS1免疫小鼠后 ,可以诱导小鼠产生针对NS1的稳定特异性体液。
- 杨春雨陈元晏辉钧方丹云薛耀华江丽芳
- 关键词：免疫小鼠登革病毒DNA免疫NS1基因抗N真核表达质粒
