方丹云
- 作品数：78 被引量：264H指数：9
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- SARS-CoV基因组及其产物的生物学功能(I)被引量：1
- 2004年
- 严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyn drome,SARS)在 2 0 0 3年我国南方爆发流行 ,波及众多国家和地区 ,引起了全球关注 .在确证SARS病原体为继Group1 ,2 ,3后的一类新冠状病毒SARSCoronavirus(SARS CoV)之后 ,全球对SARS相关冠状病毒进行了广泛的研究 .至目前为止 ,SARS CoV的基因组已在多个实验室中测定 ,并通过多种途径分析了其基因结构特征 .本文综述了SARS CoV的基因组成与结构、病毒的复制。
- 唐小龙江振友江丽芳蔡淑玉方丹云
- 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒
- 登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用被引量：9
- 2012年
- 【目的】重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化。用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体。应用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白;用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(>1:30 000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体;用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性。【结论】本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。
- 傅强田疆方丹云周俊梅庞贤武李兴华江丽芳
- 关键词：登革病毒NS1蛋白原核表达多克隆抗体
- 检测SARS冠状病毒的套式RT-PCR方法的建立与初步应用
- 2007年
- [目的]建立套式RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法。[方法]从广东地区SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及本实验室分离的SARS冠状病毒(SARS-CoV)组织培养上清中提取RNA,利用针对SARS冠状病毒多聚酶基因的特异性引物,进行逆转录及套式PCR扩增。扩增出的阳性片段连接入pGEM-T载体中,测序后比较其与其他已知SARS冠状病毒的同源性。[结果]从SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及SARS冠状病毒组织培养上清中均可扩增出阳性片段,经测序后证实是SARS冠状病毒特有序列。[结论]针对SARS冠状病毒多聚酶基因所建立的套式RT-PCR方法适用于临床标本及组织培养标本中SARS冠状病毒的检测。
- 赵卫晏辉钧张文炳方丹云周经姣朱利江丽芳龙北国
- 关键词：SARS冠状病毒套式RT-PCR
- PCR条件对扩增SARS-CoV多聚酶部分基因的影响
- 2003年
- 目的 :对该实验室已建立的检测SARS冠状病毒多聚酶基因的套式RT -PCR方法进行优化。方法 :从SARS病人的嗽口水标本中提取RNA ,调整套式PCR的退火温度 ,扩增SARS冠状病毒多聚酶部分基因。扩增出的阳性片段连接入pGEM -T载体中 ,测序后比较其与已知SARS冠状病毒的同源性。结果 :通过改变PCR条件 ,成功从一SARS病人的嗽口水中扩增出SARS冠状病毒多聚酶部分基因。结论 :针对不同标本优化PCR反应条件非常重要。
- 赵卫晏辉钧张文炳方丹云周经姣胡琼龙北国江丽芳
- 关键词：SARS冠状病毒套式RT-PCR退火温度非典型肺炎
- SARS患者血清IL-8、IL-12和TGF-β1的检测及意义被引量：7
- 2004年
- 目的 :探讨SARS患者血清IL 8、IL 12和TGF β1在SARS冠状病毒感染致病中的作用。 方法 :应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 2 8例SARS冠状病毒感染患者双份血清IL 8、IL 12和TGF β1的水平。实验数据采用两样本均数t检验法。结果 :2 8例SARS冠状病毒感染者血清IL 8水平、病程第 2周IL 12水平比正常健康对照组明显降低 (P <0 0 5 )。SARS冠状病毒感染者血清TGF β1水平与对照组比较无明显差异 (P >0 0 5 )。 结论 :IL 8和IL
- 江振友高阳方丹云周经姣晏辉钧江丽芳
- 关键词：IL-12血清IL-8TGF-Β1SARS冠状病毒SARS患者免疫过程
- SARS病例尸解标本和咽嗽液中病原体检测被引量：1
- 2005年
- 目的 确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类。方法 用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本,用RT- PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特异核酸片段,并进行序列测定。结果 在死亡病人肺组织中观察到衣原体的网状体、中间体以及原体颗粒,并见衣原体包涵体样结构;用RT- PCR法在2例尸解肺组织扩增出预期大小的DNA片段,测序后经相似性(BLAST)比较,其与SARS冠状病毒相应基因片段高度同源;用巢式RT -PCR技术在SARS病人咽漱液中扩增出SARS冠状病毒特异基因片段。结论 在SARS尸解肺组织中发现衣原体样颗粒,在尸解肺组织和咽漱液中扩增出SARS冠状病毒核酸片段,说明SARS患者可合并衣原体等微生物混合感染。
- 晏辉钧赵卫方丹云周经姣张文炳龙北国郭辉玉江丽芳
- 关键词：传染性非典型肺炎衣原体SARS冠状病毒逆转录多聚酶链式反应
- 登革1-4型病毒样颗粒(VLPs)的构建、表达及免疫学研究
- 刘岩周俊梅喻治准方丹云晏辉钧刘文权汤云霞付春云江丽芳
- 反向斑点杂交技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体及基因分型被引量：11
- 2006年
- 目的建立反向斑点杂交技术,对泌尿生殖道沙眼衣原体感染进行检测和基因分型。方法用Oligo软件设计寡核苷酸探针,采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增omp1基因的VS1-VS2序列,反向斑点杂交技术对沙眼衣原体进行检测和基因分型。结果巢式PCR扩增omp1基因的VS1-VS2序列的敏感性与质粒PCR符合率为98．2％(56/57)。优选出11条型特异性(A、B+Ba、C、D、E、F、G、H、I、J和K)和3条群特异性寡核苷酸探针：B群(B、Ba、D和E型),C群(A、C、H、I、J和K型)和中间群(F和G型)。特异性经过基因库中的BLAST程序比较和试验优化,结果显示各探针均与标准株呈特异性杂交。56例VS1- VS2 PER阳性的临床标本杂交法检测均阳性,共检出59株沙眼衣原体,包括8个基因型,其中以E、F、D和H型为主,占77．9％,分别为25．4％,22．0％,16．9％和13．6％。发现3例混合感染占5．4%,分别为D/E、D/F和F/K。结论反向斑点杂交技术简便且快速,可直接对临床标本沙眼衣原体进行检测和基因分型。
- 郑和平江丽芳薛耀华方丹云吴亚安黄进梅
- 关键词：基因型寡核苷酸探针
- Pr基因置换对登革病毒ADE作用的影响
- [目的]构建乙脑pr/登革2型病毒全长cDNA克隆,研究其免疫血清的中和作用、ADE效应及免疫保护性.为进一步阐明登革病毒致病机制及新型疫苗研制提供实验基础.[方法]在前期己构建成功的DENV2全长感染性cDNA克隆的基...
- 王颖周俊梅方丹云晏辉钧江丽芳
- 登革2型病毒海南分离株全长E基因的测定与分析被引量：7
- 2003年
- 目的 测定我国登革 2型病毒海南分离株E基因的全序列 ,并分析其病毒学特性和分子进化特征。方法 运用RT PCR法扩增我国登革 2型病毒海南分离株 (D2V HN89)E基因 ,测序并用计算机分析序列 ,作毒株感染细胞及乳小白鼠试验。结果 D2V HN89株E基因核苷酸全长 146 4bp ,核苷酸和氨基酸序列与D2V NGC株的同源性分别为 95 %和 98%,系统树分析显示其与登革 2型牙买加株及登革 2型巴西 90株的亲缘关系最近。D2V HN89株的细胞病变效应与D2V NGC株相同 ,但对乳小白鼠神经毒力较弱。结论 D2V HN89株的E基因区有缺失 ,该流行毒株可能来源于牙买加或巴西登革热流行区。
- 周俊梅江丽芳高阳薛耀华方丹云
- 关键词：登革2型病毒
