方丹云
- 作品数：78 被引量：268H指数：10
- 供职机构：中山大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- SARS-CoV基因组及其产物的生物学功能(I)被引量：1
- 2004年
- 严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyn drome,SARS)在 2 0 0 3年我国南方爆发流行 ,波及众多国家和地区 ,引起了全球关注 .在确证SARS病原体为继Group1 ,2 ,3后的一类新冠状病毒SARSCoronavirus(SARS CoV)之后 ,全球对SARS相关冠状病毒进行了广泛的研究 .至目前为止 ,SARS CoV的基因组已在多个实验室中测定 ,并通过多种途径分析了其基因结构特征 .本文综述了SARS CoV的基因组成与结构、病毒的复制。
- 唐小龙江振友江丽芳蔡淑玉方丹云
- 关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒
- 登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用被引量：9
- 2012年
- 【目的】重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化。用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体。应用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白;用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(>1:30 000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体;用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性。【结论】本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。
- 傅强田疆方丹云周俊梅庞贤武李兴华江丽芳
- 关键词：登革病毒NS1蛋白原核表达多克隆抗体
- 检测SARS冠状病毒的套式RT-PCR方法的建立与初步应用
- 2007年
- [目的]建立套式RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法。[方法]从广东地区SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及本实验室分离的SARS冠状病毒(SARS-CoV)组织培养上清中提取RNA,利用针对SARS冠状病毒多聚酶基因的特异性引物,进行逆转录及套式PCR扩增。扩增出的阳性片段连接入pGEM-T载体中,测序后比较其与其他已知SARS冠状病毒的同源性。[结果]从SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及SARS冠状病毒组织培养上清中均可扩增出阳性片段,经测序后证实是SARS冠状病毒特有序列。[结论]针对SARS冠状病毒多聚酶基因所建立的套式RT-PCR方法适用于临床标本及组织培养标本中SARS冠状病毒的检测。
- 赵卫晏辉钧张文炳方丹云周经姣朱利江丽芳龙北国
- 关键词：SARS冠状病毒套式RT-PCR
- PCR条件对扩增SARS-CoV多聚酶部分基因的影响
- 2003年
- 目的 :对该实验室已建立的检测SARS冠状病毒多聚酶基因的套式RT -PCR方法进行优化。方法 :从SARS病人的嗽口水标本中提取RNA ,调整套式PCR的退火温度 ,扩增SARS冠状病毒多聚酶部分基因。扩增出的阳性片段连接入pGEM -T载体中 ,测序后比较其与已知SARS冠状病毒的同源性。结果 :通过改变PCR条件 ,成功从一SARS病人的嗽口水中扩增出SARS冠状病毒多聚酶部分基因。结论 :针对不同标本优化PCR反应条件非常重要。
- 赵卫晏辉钧张文炳方丹云周经姣胡琼龙北国江丽芳
- 关键词：SARS冠状病毒套式RT-PCR退火温度非典型肺炎
- SARS患者血清IL-8、IL-12和TGF-β1的检测及意义被引量：7
- 2004年
- 目的 :探讨SARS患者血清IL 8、IL 12和TGF β1在SARS冠状病毒感染致病中的作用。 方法 :应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定广州地区 2 8例SARS冠状病毒感染患者双份血清IL 8、IL 12和TGF β1的水平。实验数据采用两样本均数t检验法。结果 :2 8例SARS冠状病毒感染者血清IL 8水平、病程第 2周IL 12水平比正常健康对照组明显降低 (P <0 0 5 )。SARS冠状病毒感染者血清TGF β1水平与对照组比较无明显差异 (P >0 0 5 )。 结论 :IL 8和IL
- 江振友高阳方丹云周经姣晏辉钧江丽芳
- 关键词：IL-12血清IL-8TGF-Β1SARS冠状病毒SARS患者免疫过程
- SARS病例尸解标本和咽嗽液中病原体检测被引量：2
- 2005年
- 目的 确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类。方法 用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本,用RT- PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特异核酸片段,并进行序列测定。结果 在死亡病人肺组织中观察到衣原体的网状体、中间体以及原体颗粒,并见衣原体包涵体样结构;用RT- PCR法在2例尸解肺组织扩增出预期大小的DNA片段,测序后经相似性(BLAST)比较,其与SARS冠状病毒相应基因片段高度同源;用巢式RT -PCR技术在SARS病人咽漱液中扩增出SARS冠状病毒特异基因片段。结论 在SARS尸解肺组织中发现衣原体样颗粒,在尸解肺组织和咽漱液中扩增出SARS冠状病毒核酸片段,说明SARS患者可合并衣原体等微生物混合感染。
- 晏辉钧赵卫方丹云周经姣张文炳龙北国郭辉玉江丽芳
- 关键词：传染性非典型肺炎衣原体SARS冠状病毒逆转录多聚酶链式反应
- 登革1-4型病毒样颗粒(VLPs)的构建、表达及免疫学研究
- 刘岩周俊梅喻治准方丹云晏辉钧刘文权汤云霞付春云江丽芳
- 反向斑点杂交技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体及基因分型被引量：11
- 2006年
- 目的建立反向斑点杂交技术,对泌尿生殖道沙眼衣原体感染进行检测和基因分型。方法用Oligo软件设计寡核苷酸探针,采用巢式聚合酶链反应(PCR)扩增omp1基因的VS1-VS2序列,反向斑点杂交技术对沙眼衣原体进行检测和基因分型。结果巢式PCR扩增omp1基因的VS1-VS2序列的敏感性与质粒PCR符合率为98．2％(56/57)。优选出11条型特异性(A、B+Ba、C、D、E、F、G、H、I、J和K)和3条群特异性寡核苷酸探针：B群(B、Ba、D和E型),C群(A、C、H、I、J和K型)和中间群(F和G型)。特异性经过基因库中的BLAST程序比较和试验优化,结果显示各探针均与标准株呈特异性杂交。56例VS1- VS2 PER阳性的临床标本杂交法检测均阳性,共检出59株沙眼衣原体,包括8个基因型,其中以E、F、D和H型为主,占77．9％,分别为25．4％,22．0％,16．9％和13．6％。发现3例混合感染占5．4%,分别为D/E、D/F和F/K。结论反向斑点杂交技术简便且快速,可直接对临床标本沙眼衣原体进行检测和基因分型。
- 郑和平江丽芳薛耀华方丹云吴亚安黄进梅
- 关键词：基因型寡核苷酸探针
- Pr基因置换对登革病毒ADE作用的影响
- [目的]构建乙脑pr/登革2型病毒全长cDNA克隆,研究其免疫血清的中和作用、ADE效应及免疫保护性.为进一步阐明登革病毒致病机制及新型疫苗研制提供实验基础.[方法]在前期己构建成功的DENV2全长感染性cDNA克隆的基...
- 王颖周俊梅方丹云晏辉钧江丽芳
- 登革2型病毒海南分离株全长E基因的测定与分析被引量：7
- 2003年
- 目的 测定我国登革 2型病毒海南分离株E基因的全序列 ,并分析其病毒学特性和分子进化特征。方法 运用RT PCR法扩增我国登革 2型病毒海南分离株 (D2V HN89)E基因 ,测序并用计算机分析序列 ,作毒株感染细胞及乳小白鼠试验。结果 D2V HN89株E基因核苷酸全长 146 4bp ,核苷酸和氨基酸序列与D2V NGC株的同源性分别为 95 %和 98%,系统树分析显示其与登革 2型牙买加株及登革 2型巴西 90株的亲缘关系最近。D2V HN89株的细胞病变效应与D2V NGC株相同 ,但对乳小白鼠神经毒力较弱。结论 D2V HN89株的E基因区有缺失 ,该流行毒株可能来源于牙买加或巴西登革热流行区。
- 周俊梅江丽芳高阳薛耀华方丹云
- 关键词：登革2型病毒
