周俊梅
- 作品数：42 被引量：134H指数：7
- 供职机构：中山大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 登革病毒2型prM蛋白的表达及其抗体的ADE作用研究被引量：3
- 2013年
- 目的建立登革病毒2型(DENV-2)前膜蛋白(prM)的原核稳定表达系统,并制备prM多克隆抗体,研究登革病毒特异性prM抗体的中和作用及抗体依赖性感染增强作用(ADE)。方法应用大肠杆菌表达系统表达全长DENV-2 prM蛋白,经电洗脱法纯化重组蛋白,免疫家兔,制备兔抗prM蛋白多抗;应用空斑减数中和试验(PRNT)和流式细胞术(FCM)分别检测prM兔多克隆抗体的中和作用和ADE效应。结果重组prM蛋白在原核系统可获得高效表达,prM蛋白的表达量占大肠杆菌全菌蛋白的15%左右;其免疫血清经Western blotting法证实为登革病毒特异性prM多克隆抗体,用ELISA法检测效价为1:800 000。PRNT表明,prM抗体对成熟和不成熟DENV-2感染C6/36细胞中和作用有限,最大中和程度分别为49.84%和50.22%;FCM结果表明,prM抗体能在较大的抗体稀释度范围(10-2～10-6)增强成熟和不成熟DENV-2感染,且在10-3稀释度时达到最高峰。结论重组DENV-2 prM蛋白有很强的免疫原性,其诱生的prM抗体对登革病毒仅有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE作用,揭示prM抗体是一种感染增强性抗体。
- 冯俊杰罗雅艳周俊梅方丹云曾谷城晏辉钧江丽芳
- 关键词：登革病毒2型
- Pr基因置换对登革病毒ADE作用的影响
- [目的]构建乙脑pr/登革2型病毒全长cDNA克隆,研究其免疫血清的中和作用、ADE效应及免疫保护性.为进一步阐明登革病毒致病机制及新型疫苗研制提供实验基础.[方法]在前期己构建成功的DENV2全长感染性cDNA克隆的基...
- 王颖周俊梅方丹云晏辉钧江丽芳
- H7N9禽流感病毒对人类致病的分子基础分析被引量：24
- 2013年
- 【目的】了解H7N9禽流感病毒对人类致病的分子特征,为更好地预防与治疗H7N9人禽流感提供科学依据。【方法】从GISAID数据库中下载中国2013年分离的所有H7N9禽流感病毒株的基因及蛋白序列,并从NCBI数据库中下载其他相关的流感病毒序列,运用生物信息学软件分析H7N9禽流感病毒基因的系统进化特征、受体结合位点、宿主特异位点、飞沫传播关键氨基酸位点、致病及毒力相关位点、耐药性位点及潜在糖基化位点等的变异情况。【结果】2013年中国流行的H7N9禽流感病毒为四源重组病毒,所有基因片段均来源于禽类,不含任何人流感病毒基因;病毒HA的受体结合位点发生了2个关键氨基酸的变异(G186V和Q226L);在与飞沫传播有关的关键氨基酸位点中,个别氨基酸已发生了变异(T160A、Q226L);该病毒具有8个毒力增强位点;所有分离株的M2均发生了S31N变异;分离株A/Shanghai/1/2013的NA的耐药位点发生了R294K变异;所有毒株的潜在糖基化位点均相对保守。【结论】H7N9禽流感病毒为四源重组的新型禽流感病毒。该病毒具有与人呼吸道上皮细胞SAa-2,6 Gal受体结合的分子基础,但目前尚未获得经飞沫传播的充分条件,人传人的可能性不大。该病毒具有低致病性禽流感病毒的分子特征,表明对禽类致病性不强,但其对人类呈高致病性,这可能与其毒力位点的特征有关。所有分离毒株均发生了对离子通道抑制剂金刚烷胺类药物的耐药性突变,个别毒株已发生了对神经氨酸酶抑制剂奥司他韦(达菲)的耐药性突变。
- 于玉凤郭晓兰王颖王颖方丹云周俊梅晏辉钧方丹云
- 关键词：分子基础生物信息学
- 登革病毒1、2型病毒样颗粒免疫学研究
- 目的：将制备的登革1、2型病毒样颗粒(VLPs)单独及联合免疫Ba1b/c小鼠,研究其刺激机体产生的免疫应答。方法：采用间接ELISA法检测VLPs特异性IgG抗体效价及攻毒后血清细胞因子变化;采用间接免疫荧光法检测免疫...
- 刘岩周俊梅方丹云喻治准晏辉钧刘文权汤云霞付春云江丽芳
- 关键词：登革病毒致病机制细胞免疫动物模型
- 文献传递
- 甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化分析被引量：10
- 2010年
- 【目的】了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律。【方法】分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用RT-PCR技术扩增了病毒NA基因全序列,并对其分子进化和重要功能位点的遗传变异进行了分析。【结果】2009年新型H1N1流感病毒与2006年季节性HIN1流感病毒比较,NA基因的同源性较低(77.9%～78.8%),与世界各地不同年代代表株及WHO推荐的1979～2010年季节性流感疫苗株比较,NA基因的同源性也较低(78.1%～79.3%),但与WHO推荐的2009年新型H1N1流感疫苗株比较同源性则高达99%以上;系统进化分析结果表明,2009年新型H1N1流感病毒NA基因与欧亚猪流感病毒株A/swine/Belgium/1/1983的亲缘关系最近;并发现自2005年以来季节性H1N1流感病毒NA基因的某些抗原位点和神经氨酸酶活性位点已发生了变异。【结论】2009年新型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒;接种季节性流感疫苗不能对本次流行的新型流感产生有效的免疫保护作用;季节性H1N1流感病毒在流行过程中NA基因已发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测病毒的变异情况。
- 田疆周经姣陈艺韵梁瑜晏辉钧周俊梅刘岩付春云高洪丽方丹云狄飚江丽芳
- 关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化
- 登革病毒3型病毒样颗粒在酵母体内的表达与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的探讨登革病毒3型病毒样颗粒(DENV3-VLPs)的免疫原性。方法用PCR法扩增登革病毒3型prME基因,插入载体pGAPZaA构建重组质粒pGAPZaA-prME-D3,将其转化毕赤酵母X33构建转化子pGAPZaA-prME-D3/X33。对转化子表达上清和细胞裂解液进行SDS-PAGE和Western blotting分析。用蔗糖密度梯度离心纯化表达的DENV3-VLPs并进行鉴定和电镜观察。结果成功构建重组载体pGAPZaA-prME-D3,获得酵母转化子pGAPZaA-prME-D3/X33,并应用毕赤酵母表达了DENV3-VLPs,表达蛋白约50000Mr,电镜观察VLPs直径为20～50nm。结论应用酵母表达系统成功表达了DENV-3VLPs,经鉴定表明其具有免疫反应性,为后续免疫原性研究及四价登革VLPs疫苗的构建奠定了基础。
- 付春云方丹云刘岩喻治准江汉宁江丽芳周俊梅
- 关键词：登革病毒病毒样颗粒毕赤酵母
- 登革病毒非结构蛋白NS1群特异性单克隆抗体的制备及初步应用被引量：1
- 2011年
- 目的制备登革病毒NS1群特异性单克隆抗体,建立可检测登革病毒1～4型NS1抗原的ELISA检测法,为登革热的早期快速诊断奠定基础。方法应用毕赤酵母表达系统分泌表达登革病毒2型重组非结构蛋白NS1,以此为抗原免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经HAT选择培养、间接ELISA筛选和亚克隆,获得能稳定分泌登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株;用所获得的单克隆抗体建立可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结果从登革病毒2型NS1重组毕赤酵母(Pichia Pastoris-NS1)中获得了大量纯化的登革病毒重组NS1蛋白;经免疫小鼠、细胞融合、间接ELISA筛选及3次亚克隆后,最终获得2株能高效分泌抗登革病毒NS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D7B6B4和2D10E2F6,间接ELISA显示抗体效价高达1∶8000～1∶16000;ELISA及免疫荧光检测证实,其所分泌的抗体与1～4型登革病毒及其重组NS1蛋白均有特异性免疫反应,为登革病毒NS1群特异性单克隆抗体;两株单克隆抗体均为IgG2a亚类;初步建立了检测4个血清型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA法。结论成功研制出两株能高效分泌抗登革病毒NS1群特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。初步建立了可检测1～4型登革病毒NS1抗原的双抗体夹心ELISA检测法。
- 高洪丽李兴华田疆方丹云付强刘岩周俊梅周经姣江丽芳
- 关键词：登革病毒单克隆抗体
- H7N9禽流感病毒感染人肺组织体外培养模型的研究
- [目的]建立H7N9禽流感病毒感染人肺组织模型,探讨H7N9禽流感病毒感染肺组织模型后的病毒增殖、病理变化和免疫应答状况.[方法]将手术切除的人肺组织清洗后切成组织小块,加入肺组织培养液培养,并连续换液,使肺组织适应体外...
- 郭晓兰周俊梅方丹云晏辉钧江丽芳
- 登革病毒致病与免疫机制的系列研究
- 江丽芳魏惠永郭辉玉薛耀华洪帮兴周俊梅高阳晏辉钧曹艳英江振友方丹云曾祥凤
- 该项目在细胞水平、分子水平和基因水平上对登革病毒致病与免疫机制进行了系列研究，研究结果初步阐明了登革病毒与人血管内皮细胞及单个核细胞的相互作用；首次证明了人血管内皮细胞表面存在登革病毒特异性受体；首次报道在酵母菌中高效表...
- 关键词：
- 关键词：登革病毒免疫
- SARS冠状病毒的分离培养与鉴定被引量：12
- 2003年
- 采集急性期病人的咽拭子或漱口液,用Vero、Vero E6、MDCK、Hela、Hep-2等传代细胞,人胚肺二倍体细胞(HEL)和人胚肺(HP)细胞分离培养严重急性呼吸系统综合症(SARS)的病原体。结果用Vero、Vero E6、MDCK和HP细胞从标本中分离到一株病毒。间接免疫荧光试验发现,恢复期病人血清可与所分离的病毒起反应,在胞膜和胞浆中出现翠绿色荧光;中和试验结果表明,恢复期病人血清能中和病毒对细胞的致细胞病变作用:电镜下可观察到冠状病毒样颗粒:RT-PCR法可扩增到冠状病毒特异性基因片段,且其核苷酸序列与国内外发表的SARS冠状病毒(SARS-Cov)相应的基因序列相符,同源性达到100％。从传染性非典型肺炎病人的漱口液中分离到SARS冠状病毒,这种病毒与传染性非典型肺炎密切相关。
- 江丽芳赵卫晏辉钧方丹云周经姣龙北国吴义芳周俊梅梁瑜张文炳吴强郭辉玉
- 关键词：传染性非典型肺炎SARS冠状病毒
