黄亚兰
- 作品数：33 被引量：96H指数：6
- 供职机构：深圳市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程自动化与计算机技术化学工程更多>>
- 硒蛋白K基因干扰对T淋巴细胞内质网钙稳定蛋白的影响被引量：1
- 2017年
- 目的探讨SelK mRNA干扰效果及其硒蛋白K(SelK)基因干扰后对细胞内质网钙稳态蛋白(endoplasmicreticulum calcium homeostasis protein,CHERP)的表达,观察T淋巴细胞内Ca^(2+)浓度的变化。方法从SelK m RNA(NM_019979.2)的编码序列中符合设计要求的靶位点设计特异性干扰SelK mRNA的RNAi片段,构建shRNA干扰载体靶向干扰SelK RNA,用核酸序列分析方法分析重组片段的正确性,利用荧光定量PCR和Westeron blot鉴定SelK mRNA的干扰效果,采用Real time-PCR的方法检测SelK干扰后细胞内的CHERP的变化。结果阳性重组载体可以被BamH I酶切。酶切片段序列分析重组子质粒结果与所设计片段完全一致,正确率为100.0%。三个ShRNA表现了不同的干扰效果,sh222、sh102和sh101的干扰效率分别为12.13%、16.46%和42.37%,在核酸水平上重组质粒sh101对SelK的干扰效果最佳,与sh222和sh102相比,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测重组质粒sh101在蛋白水平上的干扰效率为45.4%,干扰组细胞中CHERP的表达与对照组相比抑制率达到40.0%。结论重组质粒sh101对SelK在核酸和蛋白质水平上都有较好的干扰效率,SelK干扰对细胞中CHERP的表达有抑制的作用,或因此打乱了内质网与胞质中的钙离子平衡,从而影响到了细胞内游离的钙离子浓度,是导致T淋巴细胞激活的因素之一。
- 杨永平李瑞敏黄亚兰刘渠金玉娟张仁利黄达娜
- 深圳市3例由输入性病例引发的本地登革热病例溯源调查被引量：4
- 2019年
- 目的对深圳市2017年本地感染登革热病例进行病原溯源研究。方法对3例本地感染登革热病例开展流行病学调查,采集患者血清进行登革病毒IgM与IgG抗体、NS1抗原和核酸检测。用C6/36细胞进行病毒分离,用荧光RT-PCR方法对其进行型别鉴定。采用RT-PCR方法扩增病毒E基因后,进行序列测定构建进化树。结果实验室检测3例本地病例登革病毒核酸及NS1抗原均为阳性。分离到的2株登革毒株与1株马来西亚输入病例分离株E基因序列同源性为100%,为登革病毒2型Ⅳ亚型,与马来西亚2014年流行株TM280亲缘关系最近,核苷酸和氨基酸同源性分别为99.7%和99.8%,病毒株来源于马来西亚的可能性较大。结论现场流行病学资料和实验室分子遗传学分析均提示,深圳市2017年3例本地感染登革热病例可能是由马来西亚旅游归国的输入性病例引发的继发病例。
- 阳帆张仁利何雅青黄亚兰李玥熊玲红张晓敏
- 关键词：登革热E基因流行病学
- 从疟疾流行到消除的综合性防治措施研究被引量：16
- 2019年
- 深圳地区曾是疟疾高发区之一,1979年建市后,由于城市建设迅速发展,大量外来劳务工流入,流动人口持续增多,大量人群暴露在疟疾感染中,疟疾疫情在1984年和1993年出现大流行,特别是1984年疟疾的发病率达到1 097.86/10万。为了有效地控制和消除疟疾,深圳市因地制宜采取了综合性的防治措施,包括及时开展'三热病人'血片镜检,应用疟疾LDH金标层析试剂快速检测疑似样本,根治现症病人,对疟疾暴露的高危人群使用溴氰菊酯浸泡的防蚊蚊帐等控制措施。此外,随着深圳城市化进程的不断完善,卫生条件不断提高,按蚊的孳生地逐渐减少,也促进了疟疾的进一步消除。2014年来在深圳市十个区的不同自然环境设置调查点,采用诱蚊灯捕蚊法开展按蚊媒介调查,均未发现传疟按蚊。2000年后,疟疾发病率呈持续下降的态势,2003年起下降到1/10万以下,疫情呈现低水平的散发状态,2010年开始深圳市已连续9年无疟疾本地病例,达到了消除疟疾目标。但是,近年来由于经济全球化、劳务输出、经商、旅游等因素,深圳市人群来往频繁,输入性疟疾病例呈现出日益增多的趋势,输入性疟疾型别多,输入地广泛,是一个重大的公共卫生问题,对巩固疟疾消除成果也是一个巨大的挑战。
- 张仁利黄亚兰黄达娜梅树江高世同唐屹君张倩冯铁建
- 关键词：疟疾按蚊流动人口
- 2015-2016年深圳市登革Ⅲ、Ⅳ型分离病毒株E/NS1基因序列特征被引量：2
- 2018年
- 目的了解2015-2016年深圳市分离的登革Ⅲ、Ⅳ型病毒E/NS1基因序列特征及登革Ⅲ、Ⅳ型病毒流行规律,探究其可能的传播来源。方法收集2015-2016年深圳市登革热患者病例资料及急性期血清,用C6/36细胞培养分离登革病毒,用FQ-PCR对其进行血清分型,分离成功的病毒株用反转录-聚合酶链反应(PCR)方法扩增E基因和NS1基因,进行序列分析,绘制系统进化树,氨基酸比对分析4个不同血清型NS1蛋白。结果从5份Ⅲ型的登革病毒标本中成功分离4份病毒株,3份Ⅳ型登革病毒标本中成功分离2份登革病毒;BLAST分析保守E基因结果表明,与DENV-3分离株同源性最高(99%)的毒株主要是印度尼西亚2010和2015年分离株、菲律宾2015年分离株。与DENV-4分离株同源性最高(99%)的毒株主要是菲律宾2013年分离株、印度尼西亚2010分离株、意大利2009年分离株。NS1基因序列分析显示所选4株不同血清型的病毒株氨基酸相似性为77.69%,4个不同血清型的登革热NS1抗原存在5-7个氨基酸保守区域。结论2015-2016年深圳市输入的登革Ⅲ、Ⅳ型病毒可能来自印度尼西亚和菲律宾,应加强出入境人员的监测工作,避免输入引起本地感染的风险。
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- 关键词：登革病毒基因NS1基因进化树
- 一种采样管保护液自动加注装置及方法
- 本发明公开了一种采样管保护液自动加注装置及方法，包括底板、移动放置平台、防护罩、竖直安装板、开合盖组件、竖直安装杆、保护液加注装置、采样管盖检测组件、光栅、内开合门、酒精消毒喷嘴、紫外消毒灯，在采样管进入样本收集单元前端...
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- 深圳市2015年—2022年不同血清型登革病毒复合感染现状调查
- 2023年
- 目的了解深圳市不同血清型登革病毒共感染情况。方法收集2015年—2022年疑似登革热患者血液标本,对核酸阳性者进行型别鉴定,分析不同血清型登革病毒共感染率。同时对复合感染病例采用RT-PCR方法扩增病毒E基因序列并测序,与不同国家和地区的登革毒株进行同源性比较和进化分析。结果2015年—2022年深圳市共报告登革热病例900例,其中810例核酸阳性标本分型结果显示DENV-1占78.15%(633/810),DENV-2占13.70%(111/810),DENV-3占7.04%(57/810),DENV-4占0.99%(8/810);仅发现1例DENV-1和DENV-2复合感染病例。共感染流行株D1/19YS00077/Shenzhen/2019株与1型标准株HAWAII 45株E基因核苷酸和氨基酸同源性分别为94.1%、96.8%,D2/19YS00077/Shenzhen/2019株与2型标准株NGC株E基因核苷酸和氨基酸同源性分别为93.4%、97.6%。进化树显示该流行株最有可能来源于东南亚柬埔寨地区,属于输入病例,与流行病学调查结果一致。结论深圳市登革热流行已从单一血清型向多种血清型并存变迁,同时出现不同血清型共感染现象,此发现有助于深圳市登革热流行病学的研究以及防制工作的开展。
- 阳帆黄亚兰黄亚兰李玥熊玲红张仁利
- 关键词：登革病毒血清型共感染E基因进化分析
- 深圳市首例本地登革热3型病例的病原学检测与分析
- 2017年
- 目的对2016年深圳市报告的首例本地疑似登革热病例查明病因.分离鉴定病原体,从分子水平分析分离株的生物学特征.方法对疑似患者血清标本采用ELISA、胶体金免疫层析法和荧光RT-PCR方法分别检测登革病毒抗体、NS1抗原和病毒核酸,并用C6/36细胞分离登革病毒.采用RT-PCR方法扩增病毒PrM/M-E基因后进行序列测定,并与不同国家和地区的登革毒株进行同源性比较和进化树分析.结果从患者血清标本中检测到登革病毒IgM抗体、NS1抗原和登革3型病毒核酸,并成功分离到登革3型病毒,将其命名为DENV3-SZ1648.深圳市登革3型病毒分离株SZ1648与登革3型国际标准株H87株、国内外流行株80-2、GWL-25株在PrM/M-E基因上核苷酸同源性分别为92.0％、91.8％和90.3％,而与登革1、2、4型国际标准株HAWAII、NGC、H241同源性分别为68.7％、64.2％和63.2％.进化树显示SZ1648株与2007年印度尼西亚分离株MKS-0098亲缘关系最近,在进化树的同一分支上,和85-159株（Indonedia 1985）、2167株（Tahiti 1989）、29472株（Fiji1992）等同属基因Ⅰ亚型.患者发病前1个月在深圳居住,无输血史、无外出史.结论从病原学、血清学和分子生物学特征上均证实该本地病例是由登革3型病毒引起,这也是深圳市首次报道存在本地登革3型病毒的疫情,该毒株最有可能来源于印度尼西亚.
- 阳帆王敬忠黄亚兰吴春利黄达娜李玥唐屹君张仁利
- 关键词：登革3型病毒
- 深圳市首例本地登革热3型病例的病原学检测与分析
- 目的 对2016年深圳市报告的首例本地疑似登革热病例查明病因。分离鉴定病原体，从分子水平分析分离株的生物学特征。方法 对疑似患者血清标本采用ELISA、胶体金免疫层析法和荧光RT-PCR方法分别检测登革病毒抗体、NS1抗...
- 阳帆王敬忠黄亚兰吴春利黄达娜李玥唐屹君张仁利
- 深圳市啮齿动物感染汉坦病毒的基因特征研究
- 2022年
- 目的:研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征,分析汉坦病毒基因型别。方法:采用笼日法布点捕鼠,收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测,进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序列,并进行同源性和系统进化树分析。结果:共捕获200只鼠类动物,包含褐家鼠189只、黄胸鼠9只和小家鼠2只。汉坦病毒检出率为21.0%(42/200),均为汉城病毒,其中宝安区鼠肺检出率最高,达45.7%( χ^(2)=25.60, P<0.05)。从阳性鼠肺标本中分别扩增出25条汉坦病毒M片段G2区和S片段序列,核苷酸同源性分别为95.3%~100.0%和97.6%~100.0%,与来自广州市的参考序列核苷酸相似性较高。系统进化树显示此次研究深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒均为汉城病毒的S2亚型。氨基酸突变位点分析发现,在S基因编码的核衣壳蛋白中存在1个位点突变,为BA-111第973位由丙氨酸(Ala)变为苏氨酸(Thr)。 结论:深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒为汉城病毒的S2亚型,与深圳市历年以及周边省市汉坦病毒代表病毒毒株相比变异不大。
- 罗瑶李玥黄亚兰张晓敏熊玲红张仁利张仁利
- 关键词：汉坦病毒基因分型
- 寨卡病毒NS1抗原的金标免疫层析检测试纸条研制被引量：1
- 2019年
- 目的研制一种快速检测寨卡病毒(ZIKV)NS1抗原的胶体金免疫层析试纸条。方法以胶体金标记的抗寨卡病毒NS1单克隆抗体为特异性识别及信号产生的探针,抗寨卡病毒NS1单抗和羊抗鼠多克隆抗体IgG分别固定于硝酸纤维素膜,作为检测线和质控线以制备金标免疫层析试纸条。通过肉眼对检测线上条带进行判断、读取灰度值比等方式对试纸条结果进行分析。通过检测逐级稀释的寨卡病毒NS1抗原标准品,考察该试纸条的灵敏度。进一步通过检测分别感染了寨卡病毒、登革病毒、基孔肯雅病毒、日本脑炎病毒的细胞上清及血清样品,评价该试纸条检测的特异性。考察存储温度及放置时间对试纸条检测寨卡病毒NS1样品的影响,评价该试纸条的稳定性。结果所研制的试纸条在寨卡病毒NS1抗原标准品浓度为100 ng/mL时能够有效检测寨卡病毒培养上清,并与感染了登革病毒、基孔肯雅病毒以及日本脑炎病毒的细胞上清及血清样品均无交叉反应。此外,室温(22~25℃)或4℃储存条件下存放时间为36周的试纸条检测效果未受影响。结论本研究研制的金标免疫层析试纸条特异性好、稳定性高,快速、简便,该方法在即时检测、大样本疾病初筛等应用领域具备一定潜力。
- 黄穗滨熊玲红阳帆张晓敏黄亚兰牛丛李佳张仁利
- 关键词：NS1胶体金免疫层析
