曾伟杰
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项农业部重点科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H3N2犬流感病毒PB2 D701N位点突变对小鼠致病性的影响被引量：1
- 2017年
- 为探究PB2基因D701N突变对犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)H3N2的致病性影响,利用本实验室构建的CIV H3N2(A/canine/Guangdong/02/2011,C/GD/02)反向遗传系统和定点突变技术,获得了2株拯救病毒(原毒株:r C/GD/02,突变株:r C/GD/02-701N)。聚合酶活性试验结果显示,突变株的聚合酶活性显著强于原毒株(P<0.05),说明PB2 D701N的突变能显著增强CIV H3N2聚合酶活性;病毒生长曲线显示,突变株比原毒株在MDCK细胞中的生长复制能力有所下降;小鼠致病性试验显示,两毒株均导致了小鼠的体重增长速率轻微下降,但毒株间无显著差异,且均未导致小鼠死亡。结果表明,PB2基因D701N的突变不会显著影响CIV H3N2对小鼠的致病性。
- 曾伟杰黄三黄三王丽芳张欣周沛王丽芳
- 关键词：H3N2定点突变
- 犬N1ICD基因的克隆与真核表达
- 2018年
- 本研究利用RT-PCR扩增比格犬Notch1基因的胞内域（notch1 Intracellular domain of Notch,N1ICD）,将其克隆到真核表达载体中,在293T细胞中表达,进一步鉴定其分子生物学特征。结果,首次克隆获得犬N1ICD基因,序列长度为2 469 bp,编码822个氨基酸,蛋白质分子质量为87.3 ku。序列分析结果显示,核酸序列与大鼠、马、牛、黑猩猩、绵羊、小鼠、猕猴、人的相似性分别为83.0%、87.9%、86.8%、86.4%、87.4%、83.2%、86.5%、86.3%,进化上与马的关系最近;氨基酸序列与大鼠、马、牛、黑猩猩、绵羊、小鼠、猕猴、人的相似性分别为87.8%、91.5%、89.9%、88.5%、90.9%、87.8%、89.2%、88.7%,进化上同样与马的关系最近。预测的二级结构可能存在63个α-螺旋、65个β-折叠、48个无规则卷曲。本试验成功构建了p3×FLAG-CMV10-N1ICD真核表达载体,为进一步研究犬N1ICD与犬乳腺肿瘤之间的作用奠定了基础。
- 张欣曾伟杰曾伟杰王丽芳郑运王丽芳贾坤李守军
- 关键词：NOTCH1真核表达
- H3N2犬流感病毒PB2 E^(627)K突变对小鼠致病性的影响被引量：1
- 2017年
- 甲型流感病毒PB2蛋白627位点突变(E^(627)K)是影响流感病毒宿主适应性和致病性的重要因素之一。本实验室前期研究分离的H3N2亚型犬流感病毒(CIV)GD02株(A/canine/Guangdong/02/2011)PB2蛋白序列的627位点氨基酸为谷氨酸,为研究该病毒株PB2的E^(627)K突变对小鼠致病性的影响,本实验采用反向遗传操作技术获得rGD02,并利用定点突变技术拯救了PB2 627位点发生突变的rGD02-E^(627)K。通过接种小鼠比较rGD02和rGD02-E^(627)K对小鼠致病性的差异,评价PB2 E^(627)K突变对H3N2 CIV致病性的影响。结果显示,rGD02和rGD02-E^(627)K对小鼠均无致死性(MLD50>106EID50),对小鼠增重的影响差异均不显著,而且这两株病毒对小鼠的致病性也无明显差异。表明PB2 E^(627)K并未显著影响H3N2 CIV对小鼠的致病性,该研究建立的H3N2 CIV反向遗传操作平台和定点突变技术为该病毒后续的致病机理、基因功能研究及疫苗研制奠定了基础。
- 黄三曾伟杰张欣郑运王丽芳周沛李守军
- 关键词：定点突变
