目的克隆人CD45 c DNA并导入Hela细胞中表达,建立研究CD45功能的细胞模型。方法采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增CD45基因PTPRC的c DNA,将其克隆至p MD-18T载体。构建重组真核表达载体Pc DNA3.1-3xflag-CD45,经HindⅢ和XhoⅠ双酶切及测序验证。将其转染至Hela细胞,以流式细胞术(FCM)和免疫印迹(WB)分析CD45在Hela细胞中的表达情况,碱性磷酸酶试剂盒检测CD45的活性。结果分离到长约3900 bp的人PTPRC c DNA片段,将其插入p MD-18T载体获得了c DNA克隆。酶切和测序结果证实重组表达载体Pc DNA3.1-3xflag-CD45构建成功,FCM和WB分析表明CD45能在Hela细胞中有效表达,且表达的重组CD45蛋白具有生物学活性。结论成功获得人PTPRC c DNA克隆并在Hela细胞中有效表达,为进一步研究CD45功能奠定了基础。
