张丽芸
- 作品数：60 被引量：176H指数：9
- 供职机构：南方医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学机械工程更多>>
- 人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2N端片段的原核表达被引量：6
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)N端片段。方法应用PCR技术从含人MASP2 cDNA的质粒pGEM-MASP2中扩增MASP2-N端基因片段,将其克隆至pGEX4T-1原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP2-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与MBL-CLR结合的活性。结果从pGEM-MASP2中扩增得到约840 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4900 bp和840 bp片段,测序结果与预期的完全一致。纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr 60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR蛋白结合。结论获得了表达人MASP2 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP2N端片段/GST融合蛋白,为MASP2分子的进一步研究提供了条件。
- 蔡学敏左大明赵娜张丽芸陈政良
- 关键词：N端片段原核表达
- Balb/c小鼠MBL-C糖识别域的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2006年
- 目的原核表达Balb/c小鼠肝型甘露聚糖结合凝集素(mMBL-C)糖识别域(CRD)并制备其多克隆抗体。方法应用PCR从含Balb/c小鼠MBL-C全长编码区基因的质粒pmMBL-C中扩增目的基因片段,构建重组表达载体,在大肠杆菌中表达。分离纯化表达产物并免疫动物,制备mMBL-C CRD的抗血清,采用ELISA和Western blot鉴定其效价和特异性。结果从pmMBL-C中扩增到约450 bp的DNA片段,构建重组载体pET-CKS-mMBL-C-CRD和pET32a-mMBL-C-CRD,经酶切和测序鉴定,证实重组表达载体构建成功。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体的形式存在,相对分子质量(Mr)分别为44 000和34 000。利用pET-CKS载体表达产物免疫家兔,分离免疫血清后,使用pET32a(+)载体表达产物进行ELISA及Western blotting,显示多克隆抗体能够与mMBL-C CRD蛋白特异结合。结论获得了重组mMBL-C CRD蛋白及其多克隆抗体,为mMBL-C分子以及CRD的研究奠定了一定的基础。
- 左大明张丽芸陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素原核表达多克隆抗体天然免疫
- 中国维吾尔族人群MBL基因启动子及第一外显子区SNP及其单倍型与基因型研究被引量：6
- 2007年
- 收集新疆维吾尔自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以序列特异性引物-多聚酶链反应技术检测其甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区单核苷酸多态性位点-550G/C(称H/L等位基因)、-221C/G(X/Y)、+4C/T(P/Q)和结构基因第一外显子点突变CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA(分别称为D、B、C等位基因,野生型即A等位基因),并分析其单倍型与基因型。发现MBL基因启动子区等位基因主要为L、Y、P,第一外显子等位基因只发现B,未检出C和D;检出5种单倍型,其频率分别是HYPA 0.282、LYPA 0.268、LXPA 0.260、LYPB 0.120、LYQA 0.070。检出12种基因型,其频率分别为HYPA/HYPA 0.183、LXPA/LXPA 0.141、LYPA/LYQA 0.113、LYPA/LYPA 0.112、LYPA/LXPA 0.085、HYPA/LYPA 0.085、LXPA/LYPB 0.085、HYPA/LXPA 0.070、HYPA/LYPB 0.042、LYPA/LYPB 0.028、LYPB/LYQA 0.028、YPB/LYPB 0.028。
- 苏黎余新沛张丽芸库热西江.托呼提陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素
- 二甲双胍对U937细胞增殖、周期及凋亡的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探究二甲双胍(metformin)对U937细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法:以U937细胞为研究对象,予不同浓度的二甲双胍处理,分别在24、48和72 h收集细胞。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式检测细胞凋亡及细胞周期,并使用Western blot方法检测促凋亡蛋白Bax、抑凋亡蛋白Bcl-2、p-AMPK、p53的表达情况。结果:CCK8结果显示二甲双胍抑制U937的增殖,且呈时间-剂量依赖性。流式结果显示二甲双胍处理后细胞周期停滞在G0/G1期,G0/G1期细胞比例的增加呈时间-剂量依赖性。二甲双胍可诱导细胞凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性;二甲双胍浓度为20 mmol/L时,凋亡率呈时间依赖性。Western blot结果显示二甲双胍处理后,p-AMPK、p53、Bax的表达上调,而Bcl-2的表达下调。结论:二甲双胍能抑制U937细胞的增殖,阻滞细胞周期在G0/G1期,诱导细胞凋亡;其机制可能与其上调胞内促凋亡蛋白Bax的表达、下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达、激活AMPK/p53通路有关。
- 李君茹李会方周嘉张丽芸卢晓左大明陈政良
- 关键词：二甲双胍U937细胞凋亡
- C1q、C1r和C1s的快速分离
- 2002年
- 建立了一种同时快速分离纯化C1q及酶原形式C1r和C1s的方法。用IgG Sepharose 4B亲和层析将C1q与C1r2 s2 分离 ,接着用DEAE Sephacel离子交换层析将C1r和C1s分离 ,用C1qMcAb Sepharose 4B亲和层析将C1q进一步纯化。在分离Clr和C1s的整个过程中加入蛋白水解抑制剂PMSF和NPGB ,并控制温度在 4℃、pH 6 1、无二价阳离子的条件下 ,得到高度纯化的C1q、C1r和C1s。
- 李文君陈政良张丽芸
- 关键词：C1Q离子交换层析补体
- 人血清白蛋白单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用被引量：1
- 2010年
- 目的制备人血清白蛋白(HSA)单克隆抗体(单抗)并以之制备亲和层析柱去除甘露聚糖结合凝集素(MBL)制剂中污染的HSA。方法采用杂交瘤技术制备单抗,通过ELISA、Western-blotting鉴定其特性;制备亲和层析柱去除MBL制剂中的污染HSA。结果筛选出4株稳定分泌HSA单抗的杂交瘤细胞株1C11、2E9、3A5和4H1,单抗亚类均为IgG1,亲和常数分别为7.19×109、1.46×109、6.94×109和2.28×1010;1C11与3A5的识别位点相似或相同,其他单抗识别位点均不同;4H1可与兔血清发生交叉反应,余者与其他种属血清均无交叉反应。结论所制备的HSA单抗1C11、2E9、3A5能特异结合HSA且与其他种属血清无交叉反应,抗HSA单抗亲和层析柱可用于去除人血清蛋白制剂中的污染HSA。
- 马政辉张丽芸刘莹陈政良
- 关键词：人血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株
- 人MBL糖识别域在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定被引量：8
- 2005年
- 目的原核表达重组人甘露聚糖结合凝集素(MBL)糖识别域(CRD)。方法采用PCR技术,从含汉族人MBL全长编码区cDNA的重组质粒pGEMmbl中扩增出CRD包括颈区的基因片段,将其插入原核表达载体pGEX4T1中,经PCR、限制性酶切和测序确证后,以IPTG诱导其在大肠杆菌中表达。包涵体经变性、复性后以GSTtrap亲和层析柱纯化,融合蛋白经凝血酶切割后回收目的蛋白。分别以Westernblot和ELISA分析表达产物的免疫学和糖结合活性。结果PCR扩增得到长约450bp的目的基因片段,插入pGEX4T1载体所获重组表达载体pGEX4T1CRD的酶切图谱和序列与预期的一致。重组子经诱导表达,表达产物主要以包涵体形式存在。以GSTtrap亲和层析柱纯化获得约Mr43000的GSTCRD融合蛋白,经凝血酶切割后得到约Mr17000的CRD蛋白。纯化的GSTCRD蛋白能与抗人CRD单克隆抗体特异性结合并具糖结合活性。结论获得了具生物学活性的人MBLCRD蛋白,为进一步探索MBL分子CRD的效应功能提供了实验材料。
- 卢晓朱平张丽芸刘莹陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素融合蛋白糖结合活性
- 从噬菌体随机环七肽库筛选可模拟C1qR的C1q结合肽
- 2004年
- 为获得能结合C1q并模拟C1q受体 (C1qR )配体结合位点的短肽 ,以C1q为钓饵蛋白筛选噬菌体环七肽库 ,采用C1q结合ELISA、U937细胞配体结合抑制试验、多聚IgG (AIgG )竞争抑制试验鉴定阳性克隆 ,再进行单链DNA测序和分析。结果经 3轮筛选后 ,随机挑选 2 3个噬菌体克隆进行ELISA鉴定 ,10个克隆与C1q有较强的结合 ;利用U937细胞配体结合抑制试验 ,得到了 7个阳性克隆 ;从其展示肽DNA测序结果推导氨基酸序列 ,获得 7个短肽序列 :QTPFQLW、NPFNWTS、SPFXLTS、FLTWLDP、FSTFLYP、GPMWWSY和NPFXLIL。
- 李文君张丽芸陈政良
- 关键词：噬菌体展示肽库
- PcDNA4/His C-MBL表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达被引量：14
- 2004年
- 目的构建PcDNA4/HisC-MBL表达载体,在哺乳细胞中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)。方法应用PCR从含有中国人野生型MBLcDNA的质粒pGEM-MBL中扩增目的基因片段,将其克隆至PcDNA4/HisC真核表达载体。经酶切及测序鉴定后,以电穿孔法转染CHO细胞,以RT-PCR分析其mRNA表达,通过Ni-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,以其为免疫原免疫小鼠后取鼠血清进行ELISA检测分析目的蛋白的免疫活性。结果从pGEM-MBL中扩增得到约750bp的cDNA片段,构建成重组载体经酶切出现约5100和750bp片段,测序鉴定与预期的完全一致。RT-PCR证实转染细胞有MBLmRNA表达,纯化蛋白经SDS-PAGE电泳可见约29000、58000和87000条带,其中29000蛋白带可与6-His抗体反应。纯化蛋白免疫小鼠所获抗血清ELISA效价是1∶819200,与天然人MBL和重组MBL三聚体糖识别域反应的ELISA效价均为1∶25600。结论获得了表达中国人MBL的CHO细胞株和重组人MBL,为MBL分子的进一步研究提供了条件。
- 白志军张丽芸林佐贤卢晓陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素CHO细胞
- 广东地区汉族人MBL基因点突变的研究被引量：4
- 2005年
- 目的:研究我国汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1第52、54、57位密码点突变(CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA)。方法:收集广东地区汉族普通人群的血标本,提取白细胞基因组DNA,以PCR扩增目的基因片段,应用荧光探针杂交可视技术检测其MBL基因的点突变。结果:从202份样本中,检出GGC54GAC点突变纯合子6例和杂合子44例(等位基因频率为0.139),GGA57GAA点突变杂合子1例(频率为0.002),未发现CGT52TGT点突变(频率为0)。结论:广东地区汉族人群MBL基因点突变的频率较高,为防治MBL缺损病提供了一定的实验依据。
- 钟成全王方勇吕成伟余新沛卢晓张丽芸陈政良
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素点突变基因点突变MBL基因等位基因频率
