张天竹
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳腺癌相关的乳腺珠蛋白基因的克隆、表达及纯化被引量：3
- 2012年
- 目的克隆人乳腺珠蛋白（hMAM）基因，原核表达重组蛋白并纯化，为建立一种新的乳腺癌诊断方法奠定基础。方法从人乳腺癌组织中提取总RNA，经RT-PCR合成cDNA，设计特异性的引物，用PCR的方法扩增出目的片段，构建PET-32A-hMAM和PGEX-4T1-hMAM表达载体，在BL21菌中表达hMAM重组蛋白，纯化，并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果经RT-PCR、PCR扩增后得到一条207bp的DNA片段，构建载体后DNA测序，结果与预期序列一致。表达和纯化的融合蛋白相对分子质量大约为28000，与预期结果一致。结论成功克隆hMAM基因，并获得高纯度的hMAM重组蛋白，为进一步开发hMAM诊断试剂打下基础。
- 李梅张天竹孙晓林于华实李淑珍唐晓波
- 关键词：乳腺癌人乳腺珠蛋白克隆纯化
- 鳞状细胞癌抗原SCCA基因的构建、表达及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:重组人鳞状细胞癌抗原(SCCA)的基因及表达融合蛋白,为下一步建立新的肝癌诊断方法奠定基础。方法:提取子宫颈癌细胞株(hela)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出SCCA基因,将其分别与PET-32a及PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆,并测序鉴定。异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入工程质粒的BL21菌中表达SCCA融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果:经RT-PCR、PCR扩增后成功获得一条450 bp的DNA片段,经测序鉴定与预期序列一致;并成功在大肠杆菌中实现了高表达,经Western blotting鉴定为SCCA融合蛋白。结论:成功获得SCCA目的基因并获得高纯度的SCCA融合蛋白,为进一步开发针对肝癌的SCCA诊断试剂打下基础,开辟诊断肝癌新途径。
- 于华实孙晓琳张天竹李梅李淑珍唐晓波
- 关键词：肝癌克隆
- 肿瘤型丙酮酸激酶的原核表达及单克隆抗体的制备
- 2013年
- 目的利用原核表达系统表达重组肿瘤型丙酮酸激酶(TU M2-PK),并制备TU M2-PK的单克隆抗体(mAb)。方法提取卵巢癌细胞株SKOV3的RNA,通过逆转录、PCR扩增TU M2-PK基因,将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签PGEX-4T-1载体连接,转化DH5α菌进行基因克隆并测序鉴定。进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达TU M2-PK融合蛋白(分别含有His、GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。获得的蛋白经纯化后作为免疫原及检测原,进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测小鼠血清及细胞上清TU M2-PK抗体效价,Western blot分析mAb特异性。结果成功构建pET-32a-TU M2-PK、pGEX-4t-1-TU M2-PK工程质粒,获得两种标签的融合蛋白。将重组蛋白纯化后作为免疫原免疫小鼠,筛选获得两株稳定分泌TUM2-PK抗体的杂交瘤细胞株。分别命名为6A11、7C11,Western blot实验显示,两株均可以与重组蛋白特异性结合,并且能识别子宫颈癌细胞株(Hela)、胃腺癌细胞(SGC-7901)、肝癌细胞(HepG2)中的天然蛋白。结论成功制备了TU M2-PK蛋白及其单克隆抗体,为进一步开发TU M2-PK诊断试剂打下基础。
- 张天竹李淑珍李梅于华实孙晓林唐晓波
- 关键词：M2-PK原核表达单克隆抗体生物标记物
