于华实
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鳞状细胞癌抗原SCCA基因的克隆、表达及鉴定
- 于华实
- 基于功能组学数据识别卵巢癌风险microRNA被引量：1
- 2017年
- 目的通过生物信息学与免疫组化实验相结合的方法,探讨新的卵巢癌发病相关microRNA(miRNA)。方法选取2004年1月至2006年3月间哈尔滨医科大学附属第一医院及哈尔滨医科大学附属第三医院收治的70例上皮性卵巢癌手术病例石蜡包埋样本,采用SP免疫组化法进行检测,设阴性对照组及阳性对照组,阳性反应观察采用双盲法。以Gene Ontology为功能组学背景,度量不同基因之间的功能相似性得分,根据得分综合排序,寻找卵巢癌风险miRNA。应用该方法对2 588个miRNA进行优化排序,通过免疫组化实验方法对风险miRNA在卵巢癌中调控位点进行证实。结果优化后,卵巢癌相关miRNA如miR-200a/b/c排在前列,排序前10位miRNA中的大部分都在正常组织和卵巢癌组织中呈差异表达。miR-125a调控的人表皮生长因子-2(HER-2)呈高表达趋势。HER-2表达水平与临床分期,病理分级及存活时间显著相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-125a通过调控HER-2影响卵巢癌的临床病理特征,可成为新的卵巢癌相关风险因子。
- 于华实李昊杜慧雪冯迪郭秋艳海鑫
- 关键词：卵巢肿瘤MICRORNA功能基因组
- 乳腺癌相关的乳腺珠蛋白基因的克隆、表达及纯化被引量：3
- 2012年
- 目的克隆人乳腺珠蛋白（hMAM）基因，原核表达重组蛋白并纯化，为建立一种新的乳腺癌诊断方法奠定基础。方法从人乳腺癌组织中提取总RNA，经RT-PCR合成cDNA，设计特异性的引物，用PCR的方法扩增出目的片段，构建PET-32A-hMAM和PGEX-4T1-hMAM表达载体，在BL21菌中表达hMAM重组蛋白，纯化，并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果经RT-PCR、PCR扩增后得到一条207bp的DNA片段，构建载体后DNA测序，结果与预期序列一致。表达和纯化的融合蛋白相对分子质量大约为28000，与预期结果一致。结论成功克隆hMAM基因，并获得高纯度的hMAM重组蛋白，为进一步开发hMAM诊断试剂打下基础。
- 李梅张天竹孙晓林于华实李淑珍唐晓波
- 关键词：乳腺癌人乳腺珠蛋白克隆纯化
- 鳞状细胞癌抗原SCCA基因的构建、表达及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:重组人鳞状细胞癌抗原(SCCA)的基因及表达融合蛋白,为下一步建立新的肝癌诊断方法奠定基础。方法:提取子宫颈癌细胞株(hela)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出SCCA基因,将其分别与PET-32a及PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆,并测序鉴定。异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入工程质粒的BL21菌中表达SCCA融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果:经RT-PCR、PCR扩增后成功获得一条450 bp的DNA片段,经测序鉴定与预期序列一致;并成功在大肠杆菌中实现了高表达,经Western blotting鉴定为SCCA融合蛋白。结论:成功获得SCCA目的基因并获得高纯度的SCCA融合蛋白,为进一步开发针对肝癌的SCCA诊断试剂打下基础,开辟诊断肝癌新途径。
- 于华实孙晓琳张天竹李梅李淑珍唐晓波
- 关键词：肝癌克隆
- 肿瘤型丙酮酸激酶的原核表达及单克隆抗体的制备
- 2013年
- 目的利用原核表达系统表达重组肿瘤型丙酮酸激酶(TU M2-PK),并制备TU M2-PK的单克隆抗体(mAb)。方法提取卵巢癌细胞株SKOV3的RNA,通过逆转录、PCR扩增TU M2-PK基因,将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签PGEX-4T-1载体连接,转化DH5α菌进行基因克隆并测序鉴定。进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达TU M2-PK融合蛋白(分别含有His、GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。获得的蛋白经纯化后作为免疫原及检测原,进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA法测小鼠血清及细胞上清TU M2-PK抗体效价,Western blot分析mAb特异性。结果成功构建pET-32a-TU M2-PK、pGEX-4t-1-TU M2-PK工程质粒,获得两种标签的融合蛋白。将重组蛋白纯化后作为免疫原免疫小鼠,筛选获得两株稳定分泌TUM2-PK抗体的杂交瘤细胞株。分别命名为6A11、7C11,Western blot实验显示,两株均可以与重组蛋白特异性结合,并且能识别子宫颈癌细胞株(Hela)、胃腺癌细胞(SGC-7901)、肝癌细胞(HepG2)中的天然蛋白。结论成功制备了TU M2-PK蛋白及其单克隆抗体,为进一步开发TU M2-PK诊断试剂打下基础。
- 张天竹李淑珍李梅于华实孙晓林唐晓波
- 关键词：M2-PK原核表达单克隆抗体生物标记物
