高又文
- 作品数：6 被引量：22H指数：4
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 非洲猪瘟病毒p54抗原蛋白卵黄抗体的制备及生物活性检测被引量：4
- 2016年
- 为研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54抗原蛋白及其相应卵黄抗体的生物学特性,特制备ASFV p54蛋白及相应鸡卵黄抗体。可溶性表达制备高纯度ASFVp54抗原蛋白,并制定合理的免疫程序,免疫产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋。卵黄液经粗提取后二次盐析,制备特异性卵黄抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,在首次免疫后7d后的血清中即可检测出相应抗体,14d后在卵黄中提取到相应抗体,35d后IgY效价达到峰值。经SDS-PAGE检测,制备所得纯度达到90%,得率在8.8g/L以上。Western-blot检测结果显示,纯化的IgY具有高度的特异性。
- 高又文刘建利张彩虹吕建强樊惠英
- 关键词：卵黄抗体生物活性
- 介导分泌表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组杆状病毒的构建被引量：2
- 2013年
- 应用杆状病毒表达系统,将猪圆环病毒2型ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMDual pH启动子控制下的多克隆位点,引入EGT信号肽取代ORF2原有核定位信号肽以实现在昆虫细胞中分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以便于后期的纯化.将构建质粒转化DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭载体,提取重组Bacmid质粒.将阳性重组Bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞,72 h收集培养上清液获得重组杆状病毒.间接免疫荧光试验和Westernblot表明,该重组杆状病毒可以在昆虫细胞实现猪圆环病毒2型Cap蛋白的分泌表达.
- 张春雷靳立明叶昱张杰朱俊高又文廖明樊惠英
- 关键词：ORF2基因CAP蛋白重组杆状病毒
- 猪流行性腹泻病毒GD-A株的分离鉴定及S基因序列分析被引量：6
- 2015年
- 【目的】在广东省某疑似发生猪流行性腹泻的猪场中,采集病猪的粪便样品,经RT-PCR检测阳性的样品接种于Vero细胞,以分离猪流行性腹泻病毒.【方法】通过在细胞上的连续传代,直至能稳定增殖.并通过RT-PCR对细胞培养物进行特异性片段的检测,观察细胞病变(CPE)的发生情况,以及间接免疫荧光(IFA)检测猪流行性腹泻病毒的M蛋白,对病毒进行分离与鉴定.【结果和结论】病毒在盲传5代时能观察到典型病变,传至20代时能在Vero细胞上增殖稳定.RT-PCR、CPE与IFA的结果证明,所分离到的病毒为PEDV,并命名为GD-A株.
- 朱俊高又文张杰叶昱廖明樊惠英
- 关键词：猪流行性腹泻病毒M蛋白S基因间接免疫荧光
- 猪粪便和尿液中二甲氧苄啶的液相色谱串联质谱检测方法研究被引量：4
- 2013年
- 试验旨在建立二甲氧苄啶在猪粪便和尿液中的液相色谱串联质谱检测方法。尿液经乙酸乙酯液液萃取，有机层经氮气吹干、35％乙腈水复溶后上机检测；粪便样品经酸乙酯提取，MCX小柱净化后，洗脱液用氮气吹干，35％乙腈水复溶后上机检测。结果显示：猪粪便和尿液中二甲氧苄啶浓度分别在5～1000μg/L和10～1000μg/L范围内呈现良好的线性关系（r〉0．99），尿液、粪便中二甲氧苄啶的定量限分别为10μg/L和5μg/L，尿液添加浓度为10、100、1000μg/L时的回收率分别为79．6％、84.3％、90．2％，粪便添加浓度为10、100、1000μg／kg时的回收率分别为66．1％、65．1％、54．7％，批间、批内变异系数均小于14％，该方法定量限低，灵敏、准确，符合相关研究的要求。
- 元波郭红燕高又文曾振灵
- 关键词：粪便尿液
- 抗非洲猪瘟病毒VP73蛋白鸡卵黄抗体的制备及鉴定被引量：6
- 2015年
- 为研制非洲猪瘟的诊断试剂,将原核表达的非洲猪瘟病毒VP73融合蛋白纯化后,作为抗原免疫蛋鸡,先后用饱和硫酸铵和硫酸钠对卵黄抗体(IgY抗体)进行分离提取,制备抗非洲猪瘟病毒VP73蛋白的特异性IgY抗体。对初步提纯的IgY抗体进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定,并用间接ELISA测定IgY抗体的效价。结果显示,提纯后的IgY抗体有1条重链和1条轻链,分子质量分别约为65ku和26ku;IgY抗体可与非洲猪瘟病毒VP73蛋白发生特异性反应,在约71ku处出现特异性杂交条带;间接ELISA测定的IgY抗体效价约为1∶8 192;浓度测定结果显示,每1mL卵黄液可得到9.2mg卵黄抗体。结果表明,用表达的VP73蛋白作为免疫原制备的特异性IgY抗体具有免疫反应原性,可用于研制非洲猪瘟的诊断试剂。
- 张彩虹祝贺高又文陶虹刘建利宗卉杨俊兴曹琛福曾少灵阮周曦吕建强
- 关键词：非洲猪瘟病毒卵黄抗体
- 一种抗非洲猪瘟病毒的特异性IgY抗体及制备方法和用途
- 本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白的特异性IgY抗体及其制备方法，及利用该方法生产的IgY抗体在特异性检测非洲猪瘟病毒抗体中的应用。该特异性IgY抗体可以通过以下方法制备：利用基因重组表达的方法制备p54蛋白抗原，...
- 张彩虹花群义刘建利曹琛福陶虹宗卉杨俊兴吕建强高又文孙洁曾少灵廖立珊唐金明黄超华
- 文献传递
