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两株H1亚型禽流感病毒的全基因组序列测定及其对小鼠的感染性研究被引量：2: 2016年; 为了解H1亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2015年从我国南方活禽市场分离到的两株鸭源H1亚型AIV A/duck/Hu N/S10153/2015(H1N1)(简称Hu N/153/15)和A/duck/JX/S11233/2015(H1N3)(简称JX/1233/15)进行全基因组序列的测定及进化分析,并对其进行BALB/c小鼠的感染性试验。氨基酸序列分析显示:两株病毒HA裂解位点均只含有一个碱性氨基酸,具有低致病性AIV(LPAIV)的分子特征,其中Hu N/153/15的内部基因片段来源复杂,呈现明显的遗传多样性。小鼠感染性试验结果显示,Hu N/153/15能够在小鼠的肺脏和鼻甲中有效复制,而JX/1233/15在小鼠的各个脏器中均未检测到病毒的复制,表明其暂时还不具备感染哺乳动物的能力。本研究结果为H1亚型AIV的持续性监测和相关生物学特性的研究奠定基础。; 彭志崔鹏飞葛叶关立峥肖丽余兴龙邓国华陈化兰; 关键词：禽流感病毒 H1N1 进化分析感染性

流感病毒聚合酶PB1-1蛋白的表达与单克隆抗体的制备被引量：6: 2009年; 为制备抗流感病毒(AIV)聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段,并将其克隆至载体pET-32a,转化至BL21细菌进行重组蛋白表达。靶蛋白经Ni+柱纯化后,western blot分析证实该重组蛋白与AIV阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的PB1-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,连续多次克隆纯化后获得2株能稳定分泌抗H5亚型PB1 MAb的细胞株CGFF10和FGFCE5,2株杂交瘤细胞的细胞培养上清及腹水效价分别为103、103和106、107。2株MAb的亚类均为IgG1。实验证明:所制备的MAb能与H5N1亚型PB1-1抗原发生特异反应,具有免疫活性,从而为PB1结构及功能的深入研究奠定了基础。; 葛叶邓国华李雪平陈化兰; 关键词：原核表达单克隆抗体

荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系被引量：10: 2011年; 为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测。结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低105个病毒拷贝可以使家兔产生定型热反应,最低103个病毒拷贝可以使家兔产生轻热反应。荧光定量RT-PCR检测方法的检测过程仅需3.5 h,大大缩短了猪瘟疫苗的检测时间,该方法可以补充传统的兔体定型热反应用于猪瘟兔化弱毒疫苗半成品与成品的检验。; 葛叶张兴娟朱庆虎韩秋影王牟平李伟杰孙建宏仇华吉; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR

流感病毒聚合酶PA亚单位抗血清的制备被引量：1: 2009年; 本研究采用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Zhejiang/11/00中分段及全长扩增PA基因片段,将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a,经测序验证正确后,获得重组阳性质粒,将重组质粒转化BL21细菌后诱导,实现质粒在大肠杆菌中的表达,重组表达蛋白经Ni+柱纯化后分别与弗氏免疫佐剂乳化成油乳剂苗免疫新西兰大耳白兔,获得抗PA的免疫抗血清。Western blot检测结果表明抗血清与目的蛋白发生特异性反应。同时,将PA全长基因插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞,通过激光共聚焦显微镜发现,抗血清与PA基因的真核表达产物发生反应,出现特异性荧光,在细胞核与细胞浆中均出现荧光,进一步表明PA亚单位在细胞核与细胞浆均有分布。; 葛叶邓国华李雪平高玉伟姚秋成唐艳玲陈化兰; 关键词：禽流感病毒抗血清

应用定量RT-PCR对猪瘟兔化弱毒疫苗的质量评价研究被引量：3: 2012年; 为进一步验证猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)与兔体定型热试验之间存在正相关性,本研究利用qRT-PCR方法对278批次HCLV疫苗进行检测,分别检测其疫苗含量及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染情况。结果表明,278批次猪瘟疫苗中有66批(24%)疫苗含量达不到规程标准,有42批(15%)疫苗存在BVDV污染;从所检疫苗中抽取6份qRT-PCR检测HCLV含量较低的疫苗,采用兔体定型热试验进行验证,两种方法结果吻合,表明qRT-PCR方法可以作为评价猪瘟疫苗质量的一种备选方法。; 韩文王楠张兴娟葛叶韩秋颖孙元李素仇华吉; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR 牛病毒性腹泻病毒疫苗质量

检测流感病毒H5亚型抗体竞争ELISA方法的建立及初步应用被引量：4: 2008年; 本研究采用灭活的H5亚型禽流感纯化病毒包被ELISA反应板,以辣根过氧化物酶标记的HA蛋白单克隆抗体作为竞争检测抗体,建立了检测H5亚型流感病毒抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。实验结果表明:抗原最佳包被浓度为8.27μg/mL(1∶800),酶标抗体最佳稀释倍数为1∶800,待检血清最佳稀释倍数为1∶10。对已知阳性样品的检测结果表明,本研究中所建立的竞争ELISA方法的敏感性高于经典的血凝抑制方法(HI)。特异性试验表明该ELISA方法仅能检测H5亚型流感病毒抗体,具有良好的特异性。对临床样品检测表明C-ELISA与HI方法的符合率达到93%以上。该方法可以对不同种属动物血清H5亚型流感病毒抗体进行快速定量的检测,为H5亚型流感病毒流行病学调查与抗体的检测提供了一种快速、方便、敏感的方法。; 李雪平邓国华高玉伟唐艳玲艾嘉亮葛叶陈化兰; 关键词：禽流感单抗竞争ELISA

应用定量RT-PCR检验猪瘟兔化弱毒疫苗: 前期的研究表明猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR与兔体定型热试验之间存在正相关性，本研究利用荧光定量RT-PcR方法对278批次猪瘟兔化弱毒疫苗进行检测，分别检测其疫苗含量及牛病毒性腹泻病毒污染情况。结果表明，278批...; 韩文王楠张兴娟葛叶韩秋颖孙元李素仇华吉; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR 牛病毒性腹泻病毒疫苗质量; 文献传递

流感病毒RNA依赖的RNA聚合酶亚单位的细胞定位研究及单克隆抗体制备: 本研究利用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/ZheJiang/11/00聚合酶亚单位PA、PB1和PB2分段及全长基因,将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a,经测序验证准确,重组质粒转化B...; 葛叶; 关键词：禽流感病毒细胞定位单抗; 文献传递

A型流感病毒聚合酶研究进展被引量：6: 2009年; A型流感病毒（Influenza A virus，IV）基因组为单负链线状分节段RNA，总长约13600个核苷酸（nt）。根据襄膜上血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的不同，可分为16个H亚型（H1～H16）和9个N亚型（N1～N9）。A型流感病毒可突破种问障碍适应新的宿主，从而导致新的血清型毒株流行。1918年、1957年和1968年3次大规模流感疫病的暴发，给人们敲响了警钟。在此背景下，疫苗不断更新、预防流感病毒的药物相继问世，; 葛叶邓国华; 关键词：A型流感病毒聚合酶 VIRUS 神经氨酸酶核苷酸抗原性

禽流感病毒PB2亚单位抗血清的制备: 2010年; 采用RT-PCR方法分段扩增PB2基因,将目的基因定向克隆至含HisTAG的原核表达载体pET-32a,经序列验证正确后,转化BL21大肠杆菌,诱导表达重组蛋白。靶蛋白经Ni+柱纯化后与弗氏免疫佐剂混合免疫新西兰大耳白兔,获得高效价的抗PB2的抗血清。Western-blot检测结果证实制备的抗血清可与PB2蛋白发生特异性反应。进一步将PB2全长基因准确插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞表达PB2蛋白,通过IFA检测发现,抗血清与细胞表达的PB2蛋白发生反应,出现特异性荧光,经激光共聚焦检测PB2亚单位只在细胞核中出现荧光,说明PB2亚单位单独表达仅限于细胞核内。上述研究为进一步探索PB2亚单位的生物学特性及其结构与功能研究打下基础。; 葛叶邓国华李雪平陈化兰; 关键词：抗血清原核表达真核表达

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葛叶

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