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用于可视化检测猪瘟病毒野毒株的RT-LAMP引物: 本发明公开了一套用于可视化检测猪瘟病毒野毒株的RT-LAMP引物，所述RT-LAMP引物由一对外围引物和一对内引物组成，其中，这一对外围引物的序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，一对内引物的序列分别...; 仇华吉张兴娟孙元刘大飞; 文献传递

荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系被引量：10: 2011年; 为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测。结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低105个病毒拷贝可以使家兔产生定型热反应,最低103个病毒拷贝可以使家兔产生轻热反应。荧光定量RT-PCR检测方法的检测过程仅需3.5 h,大大缩短了猪瘟疫苗的检测时间,该方法可以补充传统的兔体定型热反应用于猪瘟兔化弱毒疫苗半成品与成品的检验。; 葛叶张兴娟朱庆虎韩秋影王牟平李伟杰孙建宏仇华吉; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR

猪瘟病毒野毒株RT-LAMP可视化检测方法的建立被引量：17: 2009年; 本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用BstDNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外光下观察判定扩增结果。该方法可检测出不同基因型的CSFV野毒株,其检出极限为2.5TCID50的CSFV,与实时荧光定量RT-PCR方法的敏感性相当;特异性试验表明,该方法对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒以及其它常见猪源病毒均无扩增反应;通过对126份不同样品进行检测比较,该方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法的符合率达100%,与引物-探针能量转移PCR方法的符合率为98.4%。该方法无需特殊仪器,是一种适用于基层的快速、简便的CSFV野毒鉴别检测方法。; 张兴娟孙元刘大飞仇华吉; 关键词：猪瘟病毒野毒株 RT-LAMP

表达猪瘟病毒E2蛋白的三种重组腺病毒在兔体上的免疫效力比较被引量：1: 2010年; 为了筛选1株免疫效果好的候选猪瘟疫苗,在家兔模型上对表达猪瘟病毒E2基因的3种重组腺病毒(rAdV-E2、rAdV-optiE2和rAdV-E2UL49)进行了免疫效力评价,从抗体、攻毒后产生定型热反应以及兔脾中病毒载量等几个方面进行了比较。结果显示,rAdV-E2UL49免疫组(n=5)在免疫后第2周,3只家兔产生了特异性的猪瘟抗体,免疫后第4周,所有免疫家兔的抗体阻断率均达到了70%;相比之下,rAdV-E2和rAdV-optiE2免疫组(n=5)家兔在免疫后第4周,只有个别家兔检测到了猪瘟特异性抗体。用猪瘟弱毒疫苗(C株)攻毒后,rAdV-E2UL49免疫组家兔均未出现定型热反应,在其脾中也未检测到C株病毒RNA,其免疫效果接近于C株;rAdV-E2和rAdV-optiE2免疫组各有3只家兔出现了定型热反应,在个别兔的脾中检测到了病毒RNA。结果表明,伪狂犬病病毒UL49基因编码的VP22蛋白可以增强重组腺病毒的免疫原性,rAdV-E2UL49有望成为一株有潜力的猪瘟疫苗。; 孙元李宏宇张兴娟李伟杰梁冰冰李娜仇华吉; 关键词：猪瘟病毒重组腺病毒免疫效力比较家兔

猪瘟兔化弱毒疫苗RT-LAMP检测方法的建立被引量：4: 2010年; 根据GenBank中登录的猪瘟病毒(CSFV)野毒株、猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的NS5B基因序列,利用在线软件Pri mer Explorer V4Software,设计了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立了特异性检测HCLV的RT-LAMP方法。在BstDNA聚合酶作用下,65℃恒温反应1h即可完成扩增过程,扩增产物可通过20g/L琼脂糖凝胶电泳或加入SYBR GreenⅠ染料进行分析。经检测,该方法对于CSFV、BVDV以及其他猪源病毒无特异性扩增,具有良好的HCLV特异性;其灵敏度与本实验室建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测结果一致,均达到5个拷贝。分别用这两种方法对58份市售猪瘟弱毒疫苗进行检测,结果符合率达100%。表明,建立的HCLV RT-LAMP技术可以应用于基层实验室或养殖场,便于养殖户对疫苗中的弱毒含量进行监测。; 张兴娟韩秋影孙元李宏宇常天明石火英仇华吉; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗猪瘟病毒

应用定量RT-PCR对猪瘟兔化弱毒疫苗的质量评价研究被引量：3: 2012年; 为进一步验证猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)与兔体定型热试验之间存在正相关性,本研究利用qRT-PCR方法对278批次HCLV疫苗进行检测,分别检测其疫苗含量及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染情况。结果表明,278批次猪瘟疫苗中有66批(24%)疫苗含量达不到规程标准,有42批(15%)疫苗存在BVDV污染;从所检疫苗中抽取6份qRT-PCR检测HCLV含量较低的疫苗,采用兔体定型热试验进行验证,两种方法结果吻合,表明qRT-PCR方法可以作为评价猪瘟疫苗质量的一种备选方法。; 韩文王楠张兴娟葛叶韩秋颖孙元李素仇华吉; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR 牛病毒性腹泻病毒疫苗质量

六种检测猪瘟病毒方法的比较被引量：9: 2010年; 【目的】本研究旨在比较6种检测猪瘟病毒方法的优缺点。【方法】应用病毒分离、胶体金免疫层析试纸条、抗原捕捉ELISA、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、TaqMan荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)和反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)等6种方法,分别对50份疑似猪瘟病料中的猪瘟病毒(Classical swine fevervirus,CSFV)进行检测。【结果】结果表明:RT-qPCR和RT-LAMP方法检出阳性样品数为13份,RT-PCR为11份,病毒分离为10份,抗原捕捉ELISA为9份,胶体金试纸条为8份;6种方法均检测为阳性8份,均为阴性37份。【结论】结果提示,在对猪瘟病毒进行检测时,RT-qPCR、RT-LAMP和RT-PCR由于其灵敏性高,可作为首选检测方法,但操作时需要避免假阳性的出现;病毒分离方法虽然操作繁琐,但结果准确,是确诊猪瘟必不可少的检测方法;抗原捕捉ELISA和胶体金试纸条检测时间较短,由于其敏感性较低所限,主要用于对畜群进行检测,不适合个体检测。; 王向鹏张兴娟孙元李娜贺番常天明李宏宇杨增岐仇华吉; 关键词：猪瘟病毒

应用定量RT-PCR检验猪瘟兔化弱毒疫苗: 前期的研究表明猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR与兔体定型热试验之间存在正相关性，本研究利用荧光定量RT-PcR方法对278批次猪瘟兔化弱毒疫苗进行检测，分别检测其疫苗含量及牛病毒性腹泻病毒污染情况。结果表明，278批...; 韩文王楠张兴娟葛叶韩秋颖孙元李素仇华吉; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR 牛病毒性腹泻病毒疫苗质量; 文献传递

用于可视化检测猪瘟病毒野毒株的RT-LAMP引物: 本发明公开了一套用于可视化检测猪瘟病毒野毒株的RT-LAMP引物，所述RT-LAMP引物由一对外围引物和一对内引物组成，其中，这一对外围引物的序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：1所示，一对内引物的序列分别...; 仇华吉张兴娟孙元刘大飞

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张兴娟