杨文
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊ISG15重组蛋白及其编码基因和应用
- 本发明提供了绵羊ISG15的重组蛋白，应用该重组蛋白能在一定程度上治疗绵羊支原体肺炎，本发明还提供编码该重组蛋白的基因，其含有选自以下的核苷酸序列：1）SEQIDNo.1中所示核苷酸序列；或SEQIDNo.3中所示核苷酸...
- 孙延鸣沈文鲁海富姜方配杨文
- 文献传递
- 新疆巴什拜羊BPI基因序列的生物信息学分析被引量：1
- 2014年
- 以新疆巴什拜羊BPI基因为研究对象,运用生物信息学方法对其编码蛋白的结构、理化性质、信号肽、跨膜结构、亚细胞定位、二级结构以及高级结构进行生物信息学分析,并推测与其他物种的生物进化关系。结果表明,BPI蛋白分子量为53.4 ku,理论等电点大于7,呈碱性,N端有信号肽,肽链表现为亲水性,基本属于分泌蛋白。BPI蛋白质的二级结构为α螺旋、β折叠和无规则卷曲,有2个保守结构域BPI1和BPI2。通过进化树分析发现巴什拜羊的BPI基因在绵羊、牛、虎鲸、野猪、人、猕猴、家兔、小鼠、非洲爪蟾中,与绵羊首先聚为一类,后与牛聚为一类,这与动物学分类结果一致,这种同源性在一定程度上代表着物种亲缘关系的远近。
- 杨文沈文郭海英陈冬梅陈凯丽孙延鸣
- 关键词：巴什拜羊生物信息学
- 绵羊ISG15重组蛋白及其编码基因和应用
- 本发明提供了绵羊ISG15的重组蛋白，应用该重组蛋白能在一定程度上治疗绵羊支原体肺炎，本发明还提供编码该重组蛋白的基因，其含有选自以下的核苷酸序列：1）SEQIDNo.1中所示核苷酸序列；或SEQIDNo.3中所示核苷酸...
- 孙延鸣沈文鲁海富姜方配杨文
- 文献传递
- 感染肺炎支原体绵羊外周血单核细胞细胞因子和ISG15 mRNA表达水平动态观察被引量：4
- 2014年
- 探讨绵羊感染肺炎支原体后相关细胞因子和干扰素刺激因子15(ISG15)的变化及其意义。应用Real-time PCR方法检测了18只经人工感染肺炎支原体的巴什拜羔羊和盘羊杂交羔羊的外周血单核细胞中IFN-γ、IL-12和ISG15 mRNA的表达水平。结果:在感染后的第7天与第14天,巴什拜羊ISG15的表达量显著高于盘羊杂交羊和对照组(P<0.05);盘羊杂交羊和巴什拜羊的IFN-γ表达水平显著高于对照组(P<0.05);在感染后的第14天,盘羊杂交羊的IL-12表达水平显著高于巴什拜羊(P<0.01)。证实IFN-γ、IL-12和ISG15在肺炎支原体感染过程中起重要作用,对研究支原体肺炎发病机理及提供免疫治疗有指导意义。
- 姜方配沈文鲁海富杨文孙延鸣
- 关键词：绵羊肺炎支原体IL-12
- 新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达被引量：1
- 2013年
- 本研究旨在克隆表达新疆野生盘羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。首先,利用RT-PCR和RACE技术克隆盘羊ISG15基因的cDNA全长序列,再将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni 2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,最后通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的新疆野生盘羊ISG15基因cDNA全长为642bp,开放阅读框为474bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33ku,表达的蛋白可用Ni 2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。
- 鲁海富沈文刘恺崔茹鹏杨文姜方配孙延鸣
- 关键词：野生盘羊ISG15克隆表达活性检测
- ISG15蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用被引量：7
- 2013年
- 为研究重组绵羊ISG15蛋白(rISG15)对感染绵羊肺炎支原体后的盘羊杂交羊的免疫调节效果,本研究将18只盘羊杂交羊随机分为A、B、C 3个组,6只巴什拜羊为D组,全部人工感染绵羊肺炎支原体(CCU=106),感染5 d后A和D组肌肉每天注射生理盐水作为对照组;B和C组每天分别肌肉注射盘羊杂交羊和巴什拜羊的rISG15 200μg/只,并采用荧光定量PCR方法检测试验羊不同时间血液中ISG15、IL-12、IFN-γ的表达水平。结果显示,IFN-γ表达水平在感染第14 d,B组显著高于A、D组(p<0.05),第21 d,B、C组显著高于A、D组(p<0.05);ISG15的表达量在第14 d与21 d,B、C、D组的表达水平显著高于A组(p<0.05);而在此期间,A组的IL-12表达水平显著高于其它各组(p<0.05),但仅A组出现50%的死亡率。实验数据表明rISG15对易感的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节效果,为绵羊支原体肺炎防治提供了实验依据。
- 姜方配沈文鲁海富杨文孙延鸣
- 关键词：ISG15肺炎支原体
- 新疆巴什拜羊ISG15基因的克隆表达及活性检测被引量：1
- 2013年
- 克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。
- 鲁海富沈文崔茹鹏杨文姜方配孙延鸣
- 关键词：巴什拜羊ISG15克隆表达活性检测
- 人工感染绵羊肺炎支原体后绵羊血清中细胞因子的动态变化被引量：4
- 2014年
- 为探讨人工感染绵羊肺炎支原体后绵羊相关细胞因子的变化,将18只试验羊分为A、B、C三组,A组为盘羊杂交羊,B、C组为巴什拜羊,其中A、B组气管内感染绵羊肺炎支原体2 mL/只（106CCU/mL）,C组为对照,气管内注射生理盐水2 mL只。应用ELISA方法检测绵羊血清中IL-2、IL-4和IL-6的浓度。结果表明,IL-2的浓度在感染后第1天,A、B两组显著高于C组（P〈0.05）;在第7~14天,B组显著高于A组和C组（P〈0.05）;在第14天,A组显著高于C组（P〈0.05）;在第21天,B组极显著高于A组和C组（P〈0.01）。IL-4的浓度分别在感染后第1、7与14天,A组极显著高于B组和C组（P〈0.01）,其中C组显著高于B组（P〈0.05）。IL-6的浓度在感染后第1天,A组和B组显著高于C组（P〈0.05）;在感染后第7天,A组显著高于B组和C组（P〈0.05）,其中B组显著高于C组（P〈0.05）;第14~21天,A组极显著高于B组和C组（P〈0.01）。说明不同品种的羊对肺炎支原体感染引起的细胞因子的变化有差异,这对研究支原体肺炎发病机理及提供免疫治疗有指导意义。
- 沈文姜方配鲁海富杨文孙延鸣
- 关键词：巴什拜羊IL-2IL-4
- 新疆巴什拜羊BPI基因cDNA全长的克隆及序列分析被引量：1
- 2015年
- 【目的】克隆巴什拜羊杀菌/通透性增强蛋白(BPI)的cDNA序列,为研究该蛋白的结构和功能奠定基础。【方法】采集巴什拜羊外周血液,从中分离得到中性粒细胞后提取RNA。根据GenBank中牛BPI基因的cDNA序列设计兼并引物,用RT-PCR方法扩增巴什拜羊BPI基因部分序列,再根据已知的巴什拜羊BPI基因部分序列设计RACE引物,分别扩增出5′和3′端目的片段,分别回收克隆的目的基因片段,再与pMD18-T载体连接,分别转化到大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆,将重组菌测序后进行拼接,获得巴什拜羊BPI基因全长cDNA序列,并对序列进行分析。【结果】克隆的巴什拜羊BPI基因cDNA序列全长1 922bp,其中开放阅读框为1 452bp,共编码483个氨基酸;BLAST分析表明,巴什拜羊BPI基因的核苷酸序列与绵羊、牛、虎鲸、野猪、猕猴、人、家兔、小鼠、非洲爪蟾核苷酸的一致性分别为99%,91%,78%,74%,64%,61%,58%,53%和50%;氨基酸进化分析显示,巴什拜羊首先与绵羊聚为一类,其次与牛聚为一类,该聚类分析结果与生物学分类结果表现一致。【结论】通过RACE方法成功地克隆了1 922bp的巴什拜羊BPI基因cDNA全长序列,且基因进化树聚类结果与生物学分类结果相一致。
- 杨文沈文郭海英陈冬梅陈凯丽孙延鸣
- 关键词：巴什拜羊CDNA
- 绵羊BPI基因的克隆、表达及活性检测
- 杀菌性//通透性增强蛋白（bactericidal//permeability increasing protein,BPI）是存在于人和哺乳动物多形核粒细胞内的一种阳离子抗菌蛋白,在中性粒细胞的诸多抗菌成分中,BPI蛋...
- 杨文
- 关键词：巴什拜羊杂交羊RACE生物学活性
- 文献传递
