- 绵羊ISG15重组蛋白及其编码基因和应用
- 本发明提供了绵羊ISG15的重组蛋白，应用该重组蛋白能在一定程度上治疗绵羊支原体肺炎，本发明还提供编码该重组蛋白的基因，其含有选自以下的核苷酸序列：1）SEQIDNo.1中所示核苷酸序列；或SEQIDNo.3中所示核苷酸...
- 孙延鸣沈文鲁海富姜方配杨文
- 文献传递
- 新疆野生盘羊ISG15基因的克隆表达被引量：1
- 2013年
- 本研究旨在克隆表达新疆野生盘羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。首先,利用RT-PCR和RACE技术克隆盘羊ISG15基因的cDNA全长序列,再将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni 2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,最后通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的新疆野生盘羊ISG15基因cDNA全长为642bp,开放阅读框为474bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33ku,表达的蛋白可用Ni 2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。
- 鲁海富沈文刘恺崔茹鹏杨文姜方配孙延鸣
- 关键词：野生盘羊ISG15克隆表达活性检测
- ISG15蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用被引量：7
- 2013年
- 为研究重组绵羊ISG15蛋白(rISG15)对感染绵羊肺炎支原体后的盘羊杂交羊的免疫调节效果,本研究将18只盘羊杂交羊随机分为A、B、C 3个组,6只巴什拜羊为D组,全部人工感染绵羊肺炎支原体(CCU=106),感染5 d后A和D组肌肉每天注射生理盐水作为对照组;B和C组每天分别肌肉注射盘羊杂交羊和巴什拜羊的rISG15 200μg/只,并采用荧光定量PCR方法检测试验羊不同时间血液中ISG15、IL-12、IFN-γ的表达水平。结果显示,IFN-γ表达水平在感染第14 d,B组显著高于A、D组(p<0.05),第21 d,B、C组显著高于A、D组(p<0.05);ISG15的表达量在第14 d与21 d,B、C、D组的表达水平显著高于A组(p<0.05);而在此期间,A组的IL-12表达水平显著高于其它各组(p<0.05),但仅A组出现50%的死亡率。实验数据表明rISG15对易感的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节效果,为绵羊支原体肺炎防治提供了实验依据。
- 姜方配沈文鲁海富杨文孙延鸣
- 关键词：ISG15肺炎支原体
- 重组羊类泛素ISG15蛋白对盘羊杂交羊感染绵羊肺炎支原体免疫调节及治疗效果的研究
- 目的:本实验以感染绵羊肺炎支原体的绵羊为动物疾病模型,使用重组的类泛素ISG15蛋白治疗感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊,然后用荧光定量PCR与ELISA的方法,测定各种细胞因子的表达变化,分析ISG15蛋白的先天性免疫调...
- 姜方配
- 关键词：绵羊肺炎支原体免疫调节
- 文献传递
- 感染肺炎支原体绵羊外周血单核细胞细胞因子和ISG15 mRNA表达水平动态观察被引量：4
- 2014年
- 探讨绵羊感染肺炎支原体后相关细胞因子和干扰素刺激因子15(ISG15)的变化及其意义。应用Real-time PCR方法检测了18只经人工感染肺炎支原体的巴什拜羔羊和盘羊杂交羔羊的外周血单核细胞中IFN-γ、IL-12和ISG15 mRNA的表达水平。结果:在感染后的第7天与第14天,巴什拜羊ISG15的表达量显著高于盘羊杂交羊和对照组(P<0.05);盘羊杂交羊和巴什拜羊的IFN-γ表达水平显著高于对照组(P<0.05);在感染后的第14天,盘羊杂交羊的IL-12表达水平显著高于巴什拜羊(P<0.01)。证实IFN-γ、IL-12和ISG15在肺炎支原体感染过程中起重要作用,对研究支原体肺炎发病机理及提供免疫治疗有指导意义。
- 姜方配沈文鲁海富杨文孙延鸣
- 关键词：绵羊肺炎支原体IL-12
- 盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对绵羊外周血淋巴细胞转化的影响被引量：1
- 2014年
- 为比较不同品种羊的重组干扰素刺激基因15（IFN—stimulated gene，ISG15）蛋白对淋巴细胞转化效果影响的差异，试验比较了5种浓度的盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对培养的绵羊外周血淋巴细胞转化的影响。结果表明，添加盘羊重组ISG15蛋白浓度为10-80ug／mL时，D570nm值均显著高于PBS对照组（P〈0．05）；添加巴什拜羊重组ISG15蛋白浓度为40～80ug／mL时，D570nm值均显著高于PBS对照组（P〈0．05）；而各种浓度的杂交羊ISG15组与PBS对照组相比差异均不显著（P〉0．05）。提示，盘羊和巴什拜羊的重组ISG15蛋白在一定浓度下能有效地刺激淋巴细胞转化，且随蛋白浓度的增加对淋巴细胞转化作用增强，而杂交羊重组ISG15蛋白对外周血淋巴细胞转化无显著影响。
- 鲁海富沈文姜方配崔茹鹏孙延鸣
- 关键词：绵羊淋巴细胞
- 绵羊ISG15重组蛋白及其编码基因和应用
- 本发明提供了绵羊ISG15的重组蛋白，应用该重组蛋白能在一定程度上治疗绵羊支原体肺炎，本发明还提供编码该重组蛋白的基因，其含有选自以下的核苷酸序列：1）SEQIDNo.1中所示核苷酸序列；或SEQIDNo.3中所示核苷酸...
- 孙延鸣沈文鲁海富姜方配杨文
- 文献传递
- 盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对体外绵羊肺炎支原体感染的影响被引量：1
- 2014年
- 为研究盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对体外绵羊肺炎支原体感染的影响,首先分离试验羊的淋巴细胞,分别将盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白和绵羊肺炎支原体加入体外培养的淋巴细胞中共同孵育,利用real-time PCR技术检测肺炎支原体16SrRNA的表达水平。结果表明,体外淋巴细胞与绵羊肺炎支原体、重组ISG15蛋白共培养12h到96h,盘羊和巴什拜羊重组ISG15蛋白组的肺炎支原体的16SrRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),而杂交羊重组ISG15蛋白组的肺炎支原体的16SrRNA表达水平与对照组差异不显著(P>0.05)。说明盘羊和巴什拜羊重组ISG15蛋白在体外可对绵羊肺炎支原体起到抑制作用。
- 沈文鲁海富姜方配杨文崔如鹏孙延鸣
- 关键词：盘羊巴什拜羊绵羊肺炎支原体
- 新疆巴什拜羊ISG15基因的克隆表达及活性检测被引量：1
- 2013年
- 克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测。利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GS115中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性。结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸。经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P<0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性。
- 鲁海富沈文崔茹鹏杨文姜方配孙延鸣
- 关键词：巴什拜羊ISG15克隆表达活性检测
- 人工感染绵羊肺炎支原体后绵羊血清中细胞因子的动态变化被引量：4
- 2014年
- 为探讨人工感染绵羊肺炎支原体后绵羊相关细胞因子的变化,将18只试验羊分为A、B、C三组,A组为盘羊杂交羊,B、C组为巴什拜羊,其中A、B组气管内感染绵羊肺炎支原体2 mL/只（106CCU/mL）,C组为对照,气管内注射生理盐水2 mL只。应用ELISA方法检测绵羊血清中IL-2、IL-4和IL-6的浓度。结果表明,IL-2的浓度在感染后第1天,A、B两组显著高于C组（P〈0.05）;在第7~14天,B组显著高于A组和C组（P〈0.05）;在第14天,A组显著高于C组（P〈0.05）;在第21天,B组极显著高于A组和C组（P〈0.01）。IL-4的浓度分别在感染后第1、7与14天,A组极显著高于B组和C组（P〈0.01）,其中C组显著高于B组（P〈0.05）。IL-6的浓度在感染后第1天,A组和B组显著高于C组（P〈0.05）;在感染后第7天,A组显著高于B组和C组（P〈0.05）,其中B组显著高于C组（P〈0.05）;第14~21天,A组极显著高于B组和C组（P〈0.01）。说明不同品种的羊对肺炎支原体感染引起的细胞因子的变化有差异,这对研究支原体肺炎发病机理及提供免疫治疗有指导意义。
- 沈文姜方配鲁海富杨文孙延鸣
- 关键词：巴什拜羊IL-2IL-4
