黄建芳 作品数:42 被引量:116 H指数:7 供职机构: 暨南大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 广东省教育部产学研结合项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 环境科学与工程 轻工技术与工程 生物学 更多>>
一种检测N端脑钠肽前体的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用 本发明公开了一种检测N端脑钠肽前体的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株和应用。所述杂交瘤细胞株3A2和4G8保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号分别为CCTCC NO:C201633和CCTCC NO:C201634,及其分泌... 向军俭 黄建芳 刘诗琴凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应 被引量:5 2012年 目的:质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质。方法:运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白;氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81%~100%;Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带。结论:凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应。 王彩霞 黄建芳 向军俭 孙一帆 吕思 郭洁关键词:质谱分析 甲壳类 凡纳滨对虾新过敏原烯醇化酶的鉴定 被引量:2 2016年 目的:鉴定凡纳滨对虾分子量为47 kD过敏原的性质。方法:采用丙酮沉淀法提取凡纳滨对虾总蛋白,通过SDS-PAGE、11例虾过敏患者血清IgE的Western blot分析凡纳滨对虾中过敏原组份,运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(Matrix-Assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定凡纳滨对虾47 kD未知过敏原组分。结果:通过SDS-PAGE电泳证明所提取的凡纳滨对虾总蛋白组分完全。Western blot结果显示,凡纳滨对虾至少有14种与阳性血清反应的组分,其中,55%的虾过敏患者Ig E与分子量为47 kD的蛋白分子发生特异性反应,质谱分析结果显示47 kD蛋白为烯醇化酶。结论:烯醇化酶是凡纳滨对虾的一种新的过敏原。 谈思怡 黄建芳 孙一帆 郭成斌 向军俭关键词:凡纳滨对虾 烯醇化酶 质谱 WESTERN BLOT 河虾主要过敏组分的分离、纯化、鉴定及其致敏性分析 被引量:10 2010年 目的:鉴定河虾中的过敏原组分,对主要过敏原组分进行纯化并分析其致敏性强弱。方法:用磷酸盐缓冲液(PBS)制备河虾蛋白粗提液,将其与11例虾过敏症患者血清IgE进行Westernblot,鉴定各种分子量的河虾过敏原组分;河虾蛋白粗提液用硫酸铵沉淀、G-50凝胶层析和阴离子交换层析等方法纯化其主要过敏原组分,再用虾过敏患者血清IgE进行Westernblot鉴定;并将纯化的相对分子质量(Mr)为21000、36000、800003种主要过敏原组分与虾过敏症患者血清IgE做间接ELISA,以分析其致敏性强弱。结果:West-ernblot结果显示,河虾蛋白粗提液出现9个阳性条带;其中3种主要过敏原组分21000、36000、80000与患者血清的反应率为36.4%,63.6%,45.5%;将这3种Mr的蛋白组分分别做间接ELISA,结果显示21000、36000、80000过敏原组分与11例虾过敏症患者的混合血清IgE结合的吸光值都显著高于河虾蛋白粗提液。结论:河虾中至少存在9个过敏原组分;21000、36000、8000等3种蛋白组分为河虾的主要过敏原组分,其中以36000过敏原组分致敏率和致敏性最强。进一步研究将探明21000、36000、80000等3种河虾过敏原组分的共同抗原表位,以期为明确食物过敏原检测、临床诊断和虾过敏原疫苗设计提供基础。 黄建芳 林婷婷 向军俭 杨红宇关键词:河虾 食物过敏 抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用 被引量:3 2015年 目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白(MYO)单克隆抗体(m Ab),建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定最佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较。结果共筛选出9株能稳定分泌m Ab的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到(1.0-2.6)×10^6(A450约为1.0时的抗体稀释倍数)。抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体(2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7),其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用最佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为(25-1000)ng/m L,优于进口试剂盒的线性范围(25-500)ng/m L;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95%(19/20),阴性检出率为100%(40/40)。结论获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO m Ab,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础。 杨全利 刘诗琴 谈思怡 邵晨晨 黄建芳 向军俭关键词:细胞融合 单克隆抗体 ELISA双抗体夹心法 虾、蟹交叉过敏原的研究 被引量:6 2012年 目的分析不同虾蟹过敏原组分间的交叉反应,探讨交叉过敏原在虾、蟹等甲壳类过敏食物检测、诊断和疫苗设计中的意义。方法运用20例虾过敏患者血清和制备的凡纳滨对虾主要过敏原-原肌球蛋白的8株单克隆抗体(mAbs),通过Western blot和间接竞争ELISA分析凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹的交叉过敏反应及它们的主要交叉过敏原。结果 Westernblot的结果显示,凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹分别能与85%、85%和75%的虾过敏患者血清IgE特异性反应;间接竞争ELISA的结果显示,3种虾蟹粗提液均可显著抑制虾过敏患者血清IgE与凡纳滨对虾蛋白的结合,最大抑制率分别93%、84%、60%;8株凡纳滨对虾原肌球蛋白的mAbs与日本沼虾和梭子蟹的Western blot和间接竞争ELISA反应中,6株mAbs可与日本沼虾和梭子蟹的相对分子质量为36 000蛋白反应。结论凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹之间存在交叉过敏反应,且具有多个交叉过敏原,其中原肌球蛋白是主要的交叉过敏原。 王彩霞 黄建芳 向军俭 孙一帆关键词:食物过敏 甲壳类 原肌球蛋白 Taxol联合bFGF单抗抑制MCF-7的分子机制以及耐药机制的初步探究 目的 :研究Taxol联合bFGF单抗抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞凋亡可能存在的分子机制。对Taxol联合bFGF单抗对耐药株MCF-7/Taxol机制进行初步探究。方法 :CCK-8法分别测定两种细胞对外加的b F... 邵晨晨 刘诗琴 谈思怡 冯沛然 郝代玲 黄建芳 向军俭关键词:TAXOL 文献传递 重金属铜单克隆抗体的制备与间接竞争ELISA的建立 目的 :制备重金属铜离子的单克隆抗体,建立并优化Cu2+的间接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法 :利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原C... 郝代玲 向军俭 黄建芳关键词:重金属 铜 单克隆抗体 ELISA 文献传递 人氮端脑钠肽前体(NT-ProBNP)单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立 目的 :获得人氮氨基末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)高亲和力和高特异性的抗体,为建立NT-pro BNP的免疫学检测方法奠定基础。方法 :为制备针对NT-Pro BNP特异表位的高特异性、高亲和力的抗体,运用Dis... 刘诗琴 邵晨晨 谈思怡 黄建芳 郝代玲 冯沛然 向军俭关键词:单克隆抗体 文献传递 重金属铜单克隆抗体的制备与间接竞争ELISA的建立 目的:制备重金属铜离子的单克隆抗体,建立并优化Cu2+的间接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法:利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原Cu2... 郝代玲 黄建芳 王宏 向军俭关键词:单克隆抗体 ELISA