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高特异高灵敏检测甲胎蛋白的单克隆抗体及试剂盒和应用: 本发明公开了高特异高灵敏检测甲胎蛋白的单克隆抗体及试剂盒和应用。本发明单抗Ab1~Ab3这3株单抗均能在人肝癌细胞和肝癌组织中特异性识别人源的天然hAFP，具有很好的特异性。利用抗体配对组合Ab1+Ab3/HRP‑Ab2...; 向军俭黄建芳孙一帆; 文献传递

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测技术的建立被引量：3: 2014年; 目的：制备、筛选多株具有商用价值的可配对的高特异性、高亲和力的抗人甲胎蛋白（hAFP）单克隆抗体，初步建立双抗体夹心 ELISA 检测方法。方法通过经典的淋巴细胞杂交瘤技术筛选分泌抗 hAFP单抗的杂交瘤细胞株；对筛选所得单抗的特性进行鉴定分析；双抗体夹心 ELISA 法筛选最佳配对抗体；初步建立DAS-ELISA 检测方法并检测血样，绘制其标准检测曲线并与进口试剂盒比较。结果共获得12株稳定分泌抗 hAFP 单抗的杂交瘤细胞株，其中 Ab 1-Ab 55株单抗的腹水效价均高于600万， Ab 5的效价高达3000万；特异性鉴定结果表明 Ab 1-Ab 5均能够特异识别天然 hAFP 分子，但 Ab 5与人血清白蛋白（HSA）存在较强交叉反应；抗体配对实验共筛选出5对（Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4和 Ab 4/HRP-Ab 1）能够满足 hAFP 检测要求且无交叉反应的配对抗体，最终确定 Ab 1＋ Ab 3/HRP-Ab 2和 Ab 1＋Ab 3/HRP-Ab 4为最佳配对组合；利用最佳配对抗体组合建立标准检测曲线，其线性检测范围为5-250 ng/ml，最低检测限2 ng/ml，检测上限400 ng/ml，优于进口试剂盒的线性范围5-200 ng/ml 和最低检测限5 ng/ml；样检结果显示自制试剂盒的阳性血清检测准确率99.2%（119/120例），阴性血清准确率100%（40/40例）。结论筛选获得的4株高亲和力、高特异性抗 hAFP 单抗均可应用于 DAS-ELISA 试剂盒的研制，Ab 1和 Ab 3适合作为捕获抗体，Ab 2和 Ab 4适合作检测抗体；自制试剂盒的线性检测范围和最低检测限均优于进口试剂盒，表明具有商用价值。; 孙一帆杨全利黄建芳赵凤芝向军俭; 关键词：甲胎蛋白类抗体单克隆双抗体夹心 ELISA

中国人的虾、蟹致敏过敏原组分分析被引量：14: 2014年; 目的：分析鉴定中国人群的虾、蟹致敏组分,确定主要过敏原及其致敏率,为深入研究食物过敏原检测及脱敏治疗提供依据。方法：通过46份虾蟹过敏症患者血清,对刀额新对虾、罗氏沼虾和锈斑鲟的蛋白粗提液进行Western blot分析,统计数据得出其全部过敏原组分及其致敏率,并确定主要过敏原。结果：Western blot结果显示,虾与过敏患者血清IgE的反应强于蟹,且虾、蟹间存在很多Mr相同的过敏原;32～38 kD原肌球蛋白（TM）、40 kD精氨酸激酶（AK）、60～80 kD血蓝蛋白（Hc）和21 kD肌质钙结合蛋白（SCP）是虾的主要致敏组分,TM、AK和Hc是虾、蟹共同的主要过敏原,其中TM的致敏率最高;与国外研究结果相比,AK、Hc和SCP的致敏率相对较高,且发现虾中48 kD蛋白组分（未知过敏原）也具有较高致敏率。结论：对中国人群而言,虾的致敏性强于蟹,且虾、蟹的主要致敏组分基本相同;中国人的虾蟹主要致敏组分及其致敏率与国外研究大致相同但略有差异;发现一种潜在的新型过敏原。; 孙一帆黄建芳王彩霞向军俭; 关键词：食物过敏 WESTERN BLOT

虾、蟹交叉过敏原的研究被引量：6: 2012年; 目的分析不同虾蟹过敏原组分间的交叉反应,探讨交叉过敏原在虾、蟹等甲壳类过敏食物检测、诊断和疫苗设计中的意义。方法运用20例虾过敏患者血清和制备的凡纳滨对虾主要过敏原-原肌球蛋白的8株单克隆抗体(mAbs),通过Western blot和间接竞争ELISA分析凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹的交叉过敏反应及它们的主要交叉过敏原。结果 Westernblot的结果显示,凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹分别能与85%、85%和75%的虾过敏患者血清IgE特异性反应;间接竞争ELISA的结果显示,3种虾蟹粗提液均可显著抑制虾过敏患者血清IgE与凡纳滨对虾蛋白的结合,最大抑制率分别93%、84%、60%;8株凡纳滨对虾原肌球蛋白的mAbs与日本沼虾和梭子蟹的Western blot和间接竞争ELISA反应中,6株mAbs可与日本沼虾和梭子蟹的相对分子质量为36 000蛋白反应。结论凡纳滨对虾、日本沼虾和梭子蟹之间存在交叉过敏反应,且具有多个交叉过敏原,其中原肌球蛋白是主要的交叉过敏原。; 王彩霞黄建芳向军俭孙一帆; 关键词：食物过敏甲壳类原肌球蛋白

凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的质谱鉴定及其免疫交叉反应研究被引量：11: 2015年; 目的:鉴定凡纳滨对虾分子质量40 k D过敏原,并分析其在有壳水产食物中的免疫交叉反应。方法:运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(matrix assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定凡纳滨对虾40 k D过敏原组分;使用软件BLAST、Clustal X2、MEGA 5.0分析该蛋白氨基酸序列的种间同源性;制备抗凡纳滨对虾过敏原精氨酸激酶的多克隆抗体,并与17种常见有壳水生动物粗提液进行Western blotting,以分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:凡纳滨对虾40 k D过敏原为精氨酸激酶(arginine kinase,AK);其氨基酸序列同源性分析显示AK在虾类(96%~100%)、蟹类(91%~93%)、贝类(49%~52%)、蟑螂(83%)中具有很高的同源性;Western blotting结果显示抗AK多抗与17种不同虾类、蟹类、贝类的AK均能发生反应。结论:精氨酸激酶在甲壳类动物、软体动物、甚至昆虫中具有高度保守性,且能引起强免疫交叉反应,是有壳水生动物中的一种泛过敏原。; 孙一帆黄建芳向军俭王彩霞陈成枫; 关键词：凡纳滨对虾精氨酸激酶质谱序列同源性

凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应被引量：5: 2012年; 目的:质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质。方法:运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白;氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81%～100%;Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带。结论:凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应。; 王彩霞黄建芳向军俭孙一帆吕思郭洁; 关键词：质谱分析甲壳类

凡纳滨对虾新过敏原烯醇化酶的鉴定被引量：1: 2016年; 目的:鉴定凡纳滨对虾分子量为47 kD过敏原的性质。方法:采用丙酮沉淀法提取凡纳滨对虾总蛋白,通过SDS-PAGE、11例虾过敏患者血清IgE的Western blot分析凡纳滨对虾中过敏原组份,运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(Matrix-Assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定凡纳滨对虾47 kD未知过敏原组分。结果:通过SDS-PAGE电泳证明所提取的凡纳滨对虾总蛋白组分完全。Western blot结果显示,凡纳滨对虾至少有14种与阳性血清反应的组分,其中,55%的虾过敏患者Ig E与分子量为47 kD的蛋白分子发生特异性反应,质谱分析结果显示47 kD蛋白为烯醇化酶。结论:烯醇化酶是凡纳滨对虾的一种新的过敏原。; 谈思怡黄建芳孙一帆郭成斌向军俭; 关键词：凡纳滨对虾烯醇化酶质谱 WESTERN BLOT

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体联合洛铂对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响被引量：2: 2016年; 目的:研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic fibroblast growth factor,b FGF m Ab)联合洛铂(lobaplatin,LBP)对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:CCK-8法检测药物对A549细胞活性的影响。Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率。激光共聚焦显微镜观察细胞核的形态。Western blotting检测细胞内凋亡相关蛋白表达。结果:CCK-8法检测结果显示,细胞培养48 h后,bFGF mAb组和LBP组的细胞增殖受到抑制,但两药联用后的增殖抑制作用明显高于单用LBP及bFGF mAb(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI结果显示,联合组早期、晚期凋亡率分别为(27.83±1.23)%和(39.32±1.01)%,与b FGF mAb的(6.25±0.19)%、(14.54±0.25)%和LBP的(16.54±0.39)%、(21.02±0.98)%相比,明显高于单药组的抑制率(P<0.01)。激光共聚焦显微镜显示联合用药诱导的细胞核裂解率较单用b FGF m Ab及LBP的细胞核裂解率明显增多。Western blotting检测结果显示联合组BAX、Caspase-3、Caspase-9、PARP表达量较药物单用组明显增加,而Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达量明显降低。结论:b FGF m Ab联合LBP通过抑制Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达,上调BAX、Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白表达,对肺腺癌A549细胞起到抑制增殖和诱导凋亡的作用。; 赵凤芝赵建夫孙一帆苏嘉敏全强罗镇明向军俭王宏傅岳武谭小玲徐萌; 关键词：洛铂肺腺癌细胞增殖凋亡

高特异高灵敏检测甲胎蛋白的单克隆抗体及试剂盒和应用: 本发明公开了高特异高灵敏检测甲胎蛋白的单克隆抗体及试剂盒和应用。本发明单抗Ab1~Ab3这3株单抗均能在人肝癌细胞和肝癌组织中特异性识别人源的天然hAFP，具有很好的特异性。利用抗体配对组合Ab1+Ab3/HRP‑Ab2...; 向军俭黄建芳孙一帆

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