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王宏: 作品数：82 被引量：283H指数：10; 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>

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VEGF受体结合抑制肽的重组表达与活性分析: 2007年; 通过阻断肿瘤血管新生的相关因子与受体的结合抑制肿瘤血管的形成，已成为近年肿瘤治疗的重要研究策略。VEGF和碱性成纤维细胞生长因子（hFGF）是促进血管内皮细胞生长最重要的因子。本研究前期工作中已通过筛选噬菌体随机肽库，获得阳性克隆之-7P419（所带肽序列为GWYYDAX，X代表一特定氨基酸），该短肽具有明显的抑制VEGF的活性。本文将7P419与硫氧还蛋白Ttx融合表达，检测该融合蛋白的抑制效果，并与人工合成肽7P419比较。; 向军俭钟振东王宏杨红宇邓宁; 关键词：VEGF 活性分析受体结合碱性成纤维细胞生长因子血管内皮细胞生长肿瘤血管新生

赤潮藻毒素GTX_(2,3)免疫吸附生物条码检测方法的建立: 2009年; 目的为了提高赤潮藻毒素GTX2,3检测方法的灵敏度,以抗GTX2,3单抗-纳米金-DNA为基础,建立检测GTX2,3高灵敏度的免疫吸附生物条码方法。方法制备腹水型GTX2,3单克隆抗体,饱和硫酸铵、辛酸硫酸铵和ProteinA亲和层析法进行纯化。确定单抗与纳米金标记偶联物的最佳pH和最小蛋白浓度,制备单抗-纳米金-DNA,应用于竞争ELISA建立免疫吸附生物条码检测技术。结果在pH8.5、0.096mg/mL抗体浓度下成功偶联GTX2,3单抗和纳米金,并制备出GTX2,3单抗-纳米金-条码DNA复合物,建立的检测GTX2,3的免疫吸附生物条码检测法灵敏度为0.74μg/mL。结论本研究建立了GTX高灵敏的免疫吸附生物条码法。; 唐勇向军俭陈耀强贺文妃王宏邓宁杨红宇; 关键词：纳米金

人心肌肌钙蛋白Ⅰ鲁米诺化学发光酶免疫分析法的建立被引量：2: 2018年; 目的:制备两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ(human cardiac troponinⅠ,cTnⅠ)单克隆抗体,建立鲁米诺化学发光酶免疫分析法。方法:制备腹水型单抗、饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析柱Protein G纯化抗体,并通过SDS-PAGE和ELISA对抗体特异性进行鉴定,建立鲁米诺化学发光酶免疫分析法,并对30份临床血清样本进行检测。结果:本实验制备的两株单抗(分别命名为Ab1、Ab3;亚型都是Ig G1)能够识别以cTnⅠ单体、cTnⅠ-C复合物和cTnⅠ-T-C复合物不同形式存在的cTnⅠ。Ab1、Ab3的效价分别为1∶80万和1∶40万,亲和力常数分别为1.62×109L/mol、2.60×108L/mol。利用2株单抗建立的鲁米诺化学发光酶免疫分析法检测范围为:6.25~400 ng/ml。对30份临床样本进行检测,阳性检出率为77.3%,阴性检出率为100%。结论:建立了可以检测以cTnⅠ单体、cTnⅠ-C和cTnⅠ-T-C复合物形式存在的cTnⅠ的鲁米诺化学发光酶免疫分析法,具有更高的实用性。; 李文丽余鹃向军俭王宏; 关键词：单克隆抗体化学发光

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体联合洛铂对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响被引量：2: 2016年; 目的:研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic fibroblast growth factor,b FGF m Ab)联合洛铂(lobaplatin,LBP)对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:CCK-8法检测药物对A549细胞活性的影响。Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率。激光共聚焦显微镜观察细胞核的形态。Western blotting检测细胞内凋亡相关蛋白表达。结果:CCK-8法检测结果显示,细胞培养48 h后,bFGF mAb组和LBP组的细胞增殖受到抑制,但两药联用后的增殖抑制作用明显高于单用LBP及bFGF mAb(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI结果显示,联合组早期、晚期凋亡率分别为(27.83±1.23)%和(39.32±1.01)%,与b FGF mAb的(6.25±0.19)%、(14.54±0.25)%和LBP的(16.54±0.39)%、(21.02±0.98)%相比,明显高于单药组的抑制率(P<0.01)。激光共聚焦显微镜显示联合用药诱导的细胞核裂解率较单用b FGF m Ab及LBP的细胞核裂解率明显增多。Western blotting检测结果显示联合组BAX、Caspase-3、Caspase-9、PARP表达量较药物单用组明显增加,而Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达量明显降低。结论:b FGF m Ab联合LBP通过抑制Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达,上调BAX、Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白表达,对肺腺癌A549细胞起到抑制增殖和诱导凋亡的作用。; 赵凤芝赵建夫孙一帆苏嘉敏全强罗镇明向军俭王宏傅岳武谭小玲徐萌; 关键词：洛铂肺腺癌细胞增殖凋亡

一种抑制肿瘤血管新生的VBP3复合多肽疫苗研究: VEGF和b FGF是最重要的肿瘤血管生成因子,他们对促进血管内皮细胞的定向分化,促进肿瘤微血管网络的形成,促进肿瘤血管新生,促进肿瘤的生长和转移等都具有非常重要的作用。而且,在肿瘤的发生过程中,VEGF和b FGF还会...; 邓宁王宏潘磊王新月刘宇骜杨欣悦张巍巍

干奶期长短对奶牛生产性能和健康状况的影响被引量：2: 2005年; 16 Rattus flavipectus,30 Rattus Norvegicus and 20 Mus muscuius were built up Pneumocystis carinii pneumonia in wild rats and mice models by injected subcutaneously with cortisone aceteta and dexamethasone for 12 weeks.At necropsy,the lung tissues were taken to make smears,imprints and sections.Pathogen morphology was observed under light microscope after stained.The experimental results showed the infective rate of Rattus norvegicus,Rattus flavipectus and Mus muscuius were 100%,81.25%and 65% respectively.The inducemental rate injected with cortisone aceteta was higher than injected with dexamethasone.The smears and imprints using giensa stain could be seen sporozoites of Pneumocystis carinii cysts and trophozoites.The imprints and sections stained by methemamine silve and toluidine blue could be observed the clear cysts wall.; 李大刚王宏王加启; 关键词：干奶期奶牛代谢性疾病饲养管理乳腺组织

人源性EGFL6的重组表达及多克隆抗体制备研究被引量：7: 2013年; 目的研究发现人源性类表皮生长因子域EGFL6可促进组织血管新生并在肿瘤组织细胞中表达上调,预示其与肿瘤发生发展密切相关,本研究通过对EGFL6基因克隆,表达和纯化并制备其多克隆抗体,为深入研究EGFL6相关功能奠定基础。方法用实时荧光定量PCR方法检测肿瘤及正常组织细胞系中EGFL6基因表达水平,并扩增EGFL6基因片段,采用基因重组技术构建EGFL6原核表达载体,经诱导表达后利用镍离子柱亲和纯化EGFL6重组蛋白,免疫昆明小鼠制备抗EGFL6多克隆抗体,ELISA、Western blot方法检测抗体灵敏度和特异性。结果 RT-PCR检测发现EGFL6在肿瘤细胞系A375及SKOV3中高表达。成功构建表达载体pET32a(+)-EGFL6,实现可溶性EGFL6蛋白的诱导表达,纯化和抗体制备。SDS-PAGE和Western blot证实,重组EGFL6蛋白质与预期结果一致,抗血清能够特异地识别重组片段蛋白,重组全长蛋白及细胞系中天然EGFL6蛋白。结论 qRT-PCR检测得知EGFL6在肿瘤细胞系A375及SKOV3中表达量较高,并成功实现了EGFL6的重组表达,抗体制备及初步应用研究。; 杨晶王金胜张辉挺王宏宋其芳黄建芳邓宁; 关键词：肿瘤细胞多克隆抗体

bFGF mRNA、bFGF及FGFR1与神经胶质瘤细胞恶性行为的相关性被引量：3: 2006年; 目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、成纤维细胞生长因子受体1(fibro-blastgrowthfactorreceptor1,FGFR1)及bFGFmRNA三者与肿瘤细胞(神经胶质瘤细胞)恶性行为的相关性。方法:设计、合成bFGF反义寡核苷酸,转染SWO-38神经胶质瘤细胞,用原位杂交、免疫组化及图像分析、间接ELISA、细胞增殖MTT法、细胞集落形成等方法,分别检测转染前后bFGF、FGFR1、bFGFmRNA表达的改变,观察不同剂量bFGF反义寡核苷酸转染后细胞生长、集落形成的变化。结果:大部分细胞bFGFmRNA和细胞生长可被bFGF反义寡核苷酸抑制,细胞生长的抑制呈浓度依赖性,最高抑制率可达到48%,其抑制作用可被外源性bFGF完全逆转;反义寡核苷酸处理组大部分细胞表达的FGFR1减少、细胞分泌的bFGF明显减少,集落形成抑制率达35%;外源性bFGF的逆转作用为8%。正义组和阴性对照组均无以上的明显改变。结论:揭示了反义寡核苷酸可特异性抑制bFGFmRNA和肿瘤细胞的bFGF合成表达,但不能拮抗外源性bFGF结合bFG-FR的生物学作用;FGFR1随肿瘤细胞SWO-38中bFGF表达水平的降低而下调。; 向军俭秦艳芳邓宁王宏杨红宇; 关键词：反义寡核苷酸 BFGF FGFR1

染矽尘小鼠早期肺组织bFGF与FGFR-1的表达及意义被引量：2: 2011年; 目的观察染矽尘小鼠早期肺组织碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及成纤维细胞生长因子受体-1(fibroblast growth factor receptor-1,FGFR-1)的表达情况,以探讨bFGF在矽肺发病中的意义。方法采用气管暴露法建立小鼠矽肺模型,于染尘后第7、第14、第21、第28天分批取小鼠肺组织,半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测bFGF基因表达情况,用免疫组织化学技术结合图像定量分析检测其bFGF及FGFR-1的蛋白表达。结果 RT-PCR结果显示,染尘组bFGF的基因表达相对灰度范围为32.08%±0.05%～49.07%±14.37%,对照组平均灰度值为34.79%±15.50%。免疫组化结果表明,染尘第7,第14,第21天,肺组织bFGF主要表达于血管平滑肌细胞,支气管上皮细胞及巨噬细胞,bFGF表达量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。第28天时病变肺组织节结处开始出现少量bFGF的表达。FGFR-1自染尘第7天就开始升高,主要表达于肺巨噬细胞,血管平滑肌细胞及间质细胞。染尘组(累积光密度范围为45 873.24±359.13～145 030.70±577.49)与对照组(平均累积光密度16157.63±359.13)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 bFGF在小鼠矽肺早期的肺组织中表达量未见明显升高,但肺组织多种细胞的FGFR-1明显升高。提示,bFGF在矽肺早期炎症阶段可能通过高表达的受体发挥作用,或者可能并不起主要作用。; 李丹向军俭王宏陶俊邓宁钟雪云; 关键词：矽肺碱性成纤维细胞生长因子

人源性抗bFGF单链抗体表达载体的构建与酵母表达被引量：3: 2012年; 为了提高人源性抗bFGF抗体的表达量,从噬菌体抗体库筛选出的人源性抗bFGF抗体基因中亚克隆单链抗体(single chain fragment variable,ScFv)基因,并将其构建到酵母表达载体pPICZαA中。表达载体质粒经线性化后,电转化法转化至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化,并检测其生物学活性。酶切鉴定结果显示人源性的酵母表达载体构建成功。SDS-PAGE和Western blot结果显示,抗bFGF单链抗体获得了高效表达,表达量可达124mg/L,目的蛋白大小为36 kDa左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的目的蛋白可与bFGF特异性结合。CCK8检测结果显示,纯化的抗bFGF单链抗体可剂量依赖性地抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖。研究结果表明在毕赤酵母中可获得人源性抗bFGF单链抗体高效表达,表达产物具有很好的生物学活性。; 吕卫东杜超超王宏姜浩武劳学军宋其芳邓宁; 关键词：BFGF 单链抗体

王宏

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