金宁一
- 作品数：1,119 被引量：2,086H指数：17
- 供职机构：延边大学农学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- QuilA为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫评价被引量：5
- 2013年
- 目的选用Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫小鼠,评价免疫效果。方法将pVAX1-H3-EHA-H1HA1new,pVAX1-H3-H1HA new,pVAX1-EHA等3种候选核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,进行细胞免疫和体液免疫水平检测。结果体液免疫检测显示,免疫后35d,pVAX1-H3HA-EHA-H1HA1new免疫组小鼠产生H1亚型流感病毒特异性体液免疫应答,且抗体水平略高于其他免疫组。细胞免疫检测显示,当受到H1亚型流感病毒抗原刺激时,各免疫组T淋巴细胞均表现出特异性增殖反应和CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞增多,各免疫组小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10及脾脏淋巴细胞IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05)。结论以Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感多表位疫苗可诱导免疫小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。
- 靖杰鲁会军刘昊刘存霞刘燕瑜任静强陆飞金宁一
- 关键词：流感病毒DNA疫苗免疫
- 新型抗病毒蛋白CVN的构建及原核表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建重组抗病毒蛋白CVN原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法采用全基因合成的方法合成目的基因CVN(Cyanovirin-N),将该片断插入到pBluescriptⅡSK(+)载体中后,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET-CVN表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。用SDS-PAGE,Western-blot等方法分析鉴定表达产物。结果合成的目的基因全长303bp,重组载体pET-CVN经PCR和双酶切鉴定,证实构建成功。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物相对分子量为17 000左右,与理论预期值完全相符。凝胶成像分析表明最高表达量可占菌体总蛋白的46.4%。SDS-PAGE,West-ern-blot分析表明目的蛋白得到了很好的表达。结论成功构建了pET-CVN原核表达载体,并得到了大量的表达,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。
- 刘玉生李昌金宁一于芳金洪涛
- 关键词：抗病毒蛋白原核表达CYANOVIRIN-N
- HIV-1 Gag蛋白酵母工程菌表达条件的优化被引量：2
- 2002年
- 为了探索构建的表达HIV－1核心蛋白Gag酵母工程菌GS115/pPCGAG的最佳表达条件，我们将该酵母工程菌分别在不同条件下进行诱导表达，通过ELJSA检测培养上清中目的蛋白的表达量来分析最佳表达条件，并分析了浓缩上清时最适硫酸铵饱和度。
- 江文正金宁一李吉平王卫红
- 关键词：HIV-1GAG蛋白
- 全血法和分离淋巴细胞法对犬淋巴细胞转化对比试验被引量：9
- 2004年
- 通过犬全血法和分离淋巴细胞法进行淋巴细胞转化对比试验 ,试验以培养 96h,Con A浓度为 2 0 μg/m L,L PS浓度为 2 5 μg/m L ,在培养结束前 18h加入 1.0μci的 3 H-胸腺嘧啶核苷测定淋转率。试验结果表明 ,两种方法差异不显著 ,但全血法更优于分离淋巴细胞法 ,且操作简便 。
- 金扩世金宁一夏志平
- 关键词：免疫功能试验条件
- 动物RNA病毒反向遗传学操作技术研究进展
- DNA重组技术的出现使得在分子水平上分析和改造病毒基因组成为可能,因此大大加深了对病毒分子结构及功能的研究。然而与DNA病毒和反转录病毒不同,大多数RNA病毒由于其基因组本身的结构特点和不稳定性,同时在其复制期间不经历D...
- 马鸣潇金宁一郑敏
- 关键词：RNA病毒基因克隆
- 文献传递
- 共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性被引量：24
- 2004年
- 将FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C基因单一/共同插入到鸡痘病毒载体pUTA-2和pUTA- 16LacZ中, 构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2P1和pUTAL3CP1, 分别与鸡痘病毒282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞, 经RT-PCR, IFA及Western杂交等方法筛选后成功获得携带有FMDV免疫原基因的两株重组鸡痘病毒株vUTA2P1和vUTAL3CP1. 应用2株重组鸡痘病毒株免疫小鼠, 经对免疫小鼠脾细胞中T细胞亚类计数、脾细胞CTL杀伤活性以及FMDV抗体的检测, 证明这2株重组鸡痘病毒可以诱导小鼠产生明显的细胞免疫和体液免疫反应. 以鸡痘病毒为载体进行FMD基因工程活载体疫苗的研究为FMD的最终防治探索一种新的候选疫苗.
- 金宁一张洪勇尹革芬郑敏刘彤江文正李子健
- 关键词：FMDV重组鸡痘病毒免疫原性蛋白酶基因重组鸡痘病毒
- 痘苗病毒高效表达载体的构建及HIV-1 Env的表达调控
- 1997年
- 本研究对牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子和多个38聚P7.5早期启动子进行正向连接,构建了一系列能在感染早期和晚期高效表达外源基因的痘苗病毒载体,表达效率高于迄今报道的任何一种痘苗病毒载体。应用这种新型痘苗病毒载体表达氯霉素乙酰转移酶(CAT)。
- 金宁一殷震
- 关键词：重组痘苗病毒痘苗病毒载体启动子活性高效表达载体
- vFV282疫苗株安全性试验
- 本试验分别用10<'8>TCID<,50>、2×10<'8>TCID<,500>、3×10<'8>TCID<,50>个免疫剂量的vFV282疫苗毒进行安全性试验.结果表明,试验鸡均安全,无毒性作用.观察14天后,取其内脏...
- 金扩世夏志平金宁一徐敬龙贾雷立苟兴宽邢启君
- 关键词：免疫安全性试验
- 文献传递
- Asia1型口蹄疫病毒多表位基因的原核表达及ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VP1 Asia)。然后,将VP1 Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VP1 Asia,接着将其转入BL21菌中进行原核表达。以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清。结果显示,VP1 Asia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VP1Asia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法。以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0%(27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29)。本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础。
- 鲁会军金宁一郑敏韩松霍晓伟田明尧李霄金扩世
- 关键词：口蹄疫多表位基因酶联免疫吸附试验
- HIV-2DNA疫苗免疫小鼠的免疫反应观察被引量：1
- 2002年
- 目的 用构建的HIV 2外膜蛋白gp1 0 5和核心蛋白gag基因的DNA疫苗免疫小鼠 ,评价其免疫效果。方法 将HIV 2型gp1 0 5和gag基因克隆到表达载体pIRES1neo中 ,构建重组DNA疫苗质粒。间接免疫荧光试验证明 ,构建的DNA疫苗在真核细胞中表达了gp1 0 5或 /和gag。构建的疫苗免疫小鼠后 ,用流式细胞仪测定CD4+ 、CD8+ T淋巴细胞亚类数 ,并用HIV 2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV 2抗体水平。结果 构建了 3种HIV 2DNA疫苗pIRES1gag、pIRES1gp1 0 5和pIRES1gag gp1 0 5 ,转染BHK细胞后均能表达抗原蛋白 ,免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抗HIV 2特异性抗体 ,其中pIRES1gag gp1 0 5免疫鼠中 ,淋巴细胞增殖最显著 ,而pIRES1gp1 0 5免疫鼠中HIV 2特异性抗体水平最高。结论 构建的DNA疫苗均能诱导机体产生免疫反应 ,其中pIRES1gp1 0 5诱导的体液免疫应答最显著 ,而pIRES1gag gp1 0 5诱导的细胞免疫响应最显著。
- 张应玖金宁一郭焱江文正李子健沈家骢
- 关键词：免疫应答艾滋病HIV-2DNA疫苗
