黄红艳
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的克隆与表达
- 2002年
- 目的 :克隆小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因 ,并进行原核表达及蛋白纯化 ,为制备mNotch1的单克隆抗体做准备。方法 :计算机分析小鼠Notch1全长 ,PCR扩增其胞外段高抗原区编码基因 ,克隆入载体T -vector进行序列测定 ,然后将测定正确的片段连入GST融合表达载体pGEX - 4T - 1,得到pG -NEF ,转化宿主菌DH5α ,经IPTG诱导 ,SDS -PAGE分析 ,以及新生条带表达形式分析以后 ,用GST亲和层析柱纯化。结果 :小鼠Notch1分子胞外段近膜处约 170个氨基酸区域抗原性较高 ,PCR扩增得到大小约 5 0 0bp的特异性片段 ,序列测定结果与文献报导的完全一致 ;原核表达产物大小约Mr 43× 10 3 ,以包涵体形式存在 ,约占总蛋白的2 5 % ,纯化后目的蛋白含量 >95 %。结论 :成功地进行了小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因的基因克隆、原核表达及蛋白纯化。
- 黄红艳柳天平孙强张蓉陈萍周鹏王冀姝李荣韩骅
- 关键词：NOTCH1基因克隆原核表达蛋白纯化
- 信号肽捕获系统的建立被引量：9
- 2001年
- 细胞分泌性蛋白的分泌有赖于蛋白质Ｎ端的信号肽的存在。利用酵母建立了从ｃＤＮＡ文库中筛选编码信号肽的基因片段的遗传系统。为此，用一步基因破坏法对酿酒酵母ＥＧＹ４８基因组中的ｓｕｃ ２基因（编码酵母蔗糖转换酶）进行了定位突变，获得了无蔗糖转换酶表达的酵母株ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ。将无信号肽的ｓｕｃ ２成熟肽基因克隆于酵母乙醇脱氢酶（ＡＤＨ１）基因启动子下游，得到用于文库筛选的酵母真核表达载体。启动子与成熟肽基因之间为多克隆位点，用于插入待筛选的ｃＤＮＡ文库。用此载体转化酵母ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ，所得克隆可在以葡萄糖为碳源的培养基上生长，但不能在以棉子糖为碳源的培养基上生长；在ｓｕｃ ２成熟肽基因前分别插入ｓｕｃ ２信号肽基因片段或人ＩＬ－２受体α 链信号肽基因片段，然后转染ＥＧＹ４８－△ ｓｕｃ，所得克隆既能在以葡萄糖为碳源的培养基上生长，也能在以棉子糖为碳源的培养基上生长。表明构建的系统可用于筛选插入多克隆位点的ｃＤＮＡ片段是否具有编码信号肽的功能。
- 孙强王冀姝李荣周鹏黄红艳韩骅
- 关键词：同源重组信号肽基因克隆
- 用suc2信号肽捕获系统筛选小鼠胚胎cDNA文库基因被引量：2
- 2004年
- PCR扩增 1 1d小鼠胚胎cDNA文库插入片段 ,将 0 .5～ 2 0kb的扩增产物插入筛选载体的多克隆位点 ,转化suc2基因缺陷酵母宿主菌 .然后将约 1 0 5个酵母菌落接种于选择性平板上进行筛选 ,得到了 1 82个可在选择性培养基上生长的菌落 .PCR扩增显示 ,插入片段大小分布于 0 1～ 1 5kb之间 .对其中 1 4个阳性菌落的重组子进行序列测定 ,分别代表 6种不同的基因序列 ,与报告基因都有正确的读框内融合 .其中两种基因序列反复被筛到 ,分别命名为spt1、spt2 .spt1 [gi:2 772 876 6 ],可能以非编码RNA的身份参与蛋白质向细胞外分泌的过程 ,而spt2编码多个连续的赖氨酸 。
- 孙强黄红艳周鹏冯蕾秦红韩骅
- 关键词：非编码RNA蛋白质分泌
