王冀姝
- 作品数：21 被引量：69H指数：6
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校骨干教师资助计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组酶Cre的逆转录病毒载体的构建及鉴定
- 2002年
- 目的 构建表达重组酶 Cre的逆转录病毒载体并进行初步的体外感染研究 .方法 将 Cre基因片段插入到逆转录病毒载体 p Mx- IRES- GFP中 ,转染包装细胞系获得表达Cre的病毒颗粒 ,体外感染 NIH- 3T3细胞 ,通过绿色荧光蛋白GFP测定病毒滴度 .结果 构建了表达 Cre的逆转录病毒载体 p Mx- IRES- GFP- Cre.通过包装细胞系得到的含有病毒颗粒的培养上清 ,这种培养上清具有体外感染细胞的能力 ,病毒滴度为 10 5cfu·m L- 1 .结论 用逆转录病毒体系表达重组酶Cre并能有效地进行体外感染 .
- 陆群吴补领张洪伟王冀姝韩骅余擎苏凌云
- 关键词：基因剔除逆转录病毒体外感染
- 蛋白转导结构域-bcr/abl融合基因的构建和表达被引量：11
- 2002年
- 目的 构建含蛋白转导结构域 (PTD)与慢性粒细胞白血病 (CML)bcr/abl融合基因片段的质粒 ,并在大肠杆菌中表达。方法 PCR扩增的CMLbcr/abl基因片段 ,经DNA测序后 ,与合成编码PTD的DNA片段一起插入质粒pET 16b ,构建表达载体pEPb ,转化大肠杆菌并进行了PTD bcr/abl蛋白的诱导表达和纯化。结果 跨越bcr/abl断裂点的 5 2 3bp的目的片段被有效地扩增。DNA序列分析表明所构建的含PTD bcr/abl融合基因的质粒与设计相同。PTD bcr/abl融合蛋白在转化大肠杆菌获得了高效表达并纯化。结论 成功地获得了PTD bcr/abl融合蛋白片段的基因表达产物 。
- 梁英民孙强蒋姗姗王冀姝吴绒丽陈萍刘利韩骅
- 关键词：BCR/ABL融合基因白血病慢性基因表达大肠杆菌
- suc2基因的克隆及在酵母基因组中的定位突变被引量：2
- 2000年
- 目的 克隆酿酒酵母的蔗糖转换酶基因 (suc2 ) ,并定位突变酵母基因组中的 suc2基因以获得无蔗糖转换酶表达的酵母品系 .方法 用 PCR法从酵母 Y190基因组中扩增出suc2的成熟肽基因片段 ,克隆后测序 .将色氨酸合成酶 (TRP)基因片段插入 suc2基因中 ,构建成用于同源重组的 suc2基因定位突变载体 .导入酵母 Y190 ,用营养缺陷筛选出 suc2基因突变的克隆 .用 PCR扩增并克隆突变后的 suc2基因 ,用序列分析确定同源重组的发生 .结果 用 PCR从酵母基因组DNA中扩增出大小约 1.5 kb的 suc2基因片段 ,序列测定表明除 5 85位有一点突变 (AAC变为 AAT)外 ,所得 suc2基因与文献报道相同 ;构建的定位突变载体导入酵母细胞后 ,得到4株营养型符合的突变体 ;PCR表明这些突变体中均有 suc2基因的同源重组 ;取其中 1株的 PCR产物进行序列测定证实了同源重组的发生 .结论 克隆了正确的编码蔗糖转换酶成熟肽的 suc2基因片段 ;用同源重组方法在酵母 Y190的基因组中定位突变了
- 孙强王冀姝陈萍柳天平牛利国韩骅苏成芝
- 关键词：同源重组克隆定位突变
- 核糖体蛋白RpL6/Taxreb107核定位信号的确定及启动子分析
- 利用核定位信号捕捉系统确定核糖体蛋白L6(RpL6)的核定位信号(NLS)的位置，并在体外培养的细胞中加以证实.氨基端的30-41和68-84氨基酸残基具有核定位及核仁定位功能.RpL6又称Taxreb107，是HTLV...
- 王冀姝杨曦李荣孙强周鹏韩骅
- 关键词：核糖体蛋白核定位信号启动子转录因子
- 文献传递
- 重组酶Cre在体外对LoxP标记的基因组进行重组的初步研究
- 2002年
- 目的 :研究逆转录病毒体系转导的重组酶Cre在体外对LoxP标记的基因组进行重组的能力。方法 :用逆转录病毒表达Cre ,体外感染条件性基因剔除 (即LoxP标记的基因 )小鼠来源的原代培养的牙乳头间充质细胞。从被感染的牙乳头间充质细胞中提取基因组DNA ,用PCR的方法显示LoxP标记的基因组长度的变化 ,从而反映Cre在体外的重组能力。结果 :被表达Cre的逆转录病毒感染的牙乳头间充质细胞 ,其标记的基因组长度发生了预期的变化 ,被标记的部分发生缺失。结论 :用逆转录病毒体系转导重组酶Cre能够有效地对LoxP标记的基因组进行重组。为用这一方法在体外研究特异基因对细胞生物学行为的影响奠定基础。
- 陆群吴补领张洪伟王冀姝韩骅余擎苏凌云
- 关键词：CRE逆转录病毒基因组
- Notch信号分子于小鼠牙髓干细胞样细胞表达的研究被引量：8
- 2004年
- 目的 研究Notch基因在小鼠牙髓干细胞样细胞表达。方法 采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,调整细胞密度为 1× 10 4 个 孔细胞 ,干细胞培养液培养 14d,挑选细胞克隆扩增 ,提取细胞的总RNA ,反转录聚合酶联反应 (RT_PCR)检测Notch基因的表达。结果 小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率约为 1 6～ 2 5个 10 4 细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞胞体小、胞核大 ,RT_PCR结果显示Notch的mRNA在牙髓干细胞样细胞中有表达。结论 培养的集落状生长的小鼠牙髓细胞具有干细胞增殖快的特性 ,Notch基因于牙髓干细胞中表达 。
- 陆群吴补领王冀姝韩骅周学东
- 关键词：小鼠牙髓干细胞细胞表达牙齿发育
- 核定位信号筛选系统的构建被引量：9
- 2000年
- 建立了一酵母克隆系统用于克隆含核定位信号 (NLS)的蛋白质的基因 .用表达转录因子GAL4 DNA结合域 - p53(GAL4- DBD- p53)融合蛋白的质粒转化酵母 HF7c,使 GAL4- DBD- p53可结合于报告基因的启动子但因无转录激活域而不能激活转录 .构建一酵母穿梭载体 ,可表达无NLS的 GAL4转录激活域 -大 T抗原 (GAL4- AD- LT)融合蛋白 .融合蛋白基因的下游插入一多克隆位点 .将 c DNA文库插入多克隆位点后 ,如果 c DNA片段可编码 NLS,则 GAL4- AD- LT分子可进入细胞核 ,并通过 LT与 p53的相互作用而使 GAL4- AD结合于启动子和激活报告基因的转录 .构建了这一克隆系统的各质粒 ,并用绿色荧光蛋白 (GFP)验证了其对核内蛋白和胞浆蛋白的甄别能力 .这一系统将有助于从 c DNA文库中筛选编码带有
- 王冀姝陈萍孙强牛立国周鹏张浩韩骅苏成芝
- 关键词：核定位信号基因克隆酵母表达系统融合蛋白
- 带有蛋白转导结构域的Bcr/Abl癌蛋白片段的表达及其跨膜转运被引量：10
- 2001年
- HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .在大肠杆菌中表达纯化了融合蛋白 ,将纯化的融合蛋白加入培养的HL60细胞和C2C12细胞后 ,发现PTD基序可以介导Bcr Abl蛋白自由从细胞外跨膜转导进入细胞内 .研究结果可能为用外源蛋白负载 (loading)免疫活性细胞如抗原提呈细胞提供新的途径 .
- 梁英民孙强蒋姗姗陈萍王冀姝李荣周鹏王键黄红艳韩骅
- 关键词：蛋白转导结构域BCR/ABL慢性粒细胞白血病癌蛋白
- LIM结构域蛋白KyoT基因剔除小鼠的建立和表型分析被引量：2
- 2001年
- KyoT为一LIM结构域蛋白,可与转录因子RBP-Jk相互作用而调节其转录活性.构建了KyoT基因剔除载体,转染小鼠胚胎干细胞(ES细胞)后得到同源重组的ES细胞克隆.将此ES细胞注射入小鼠的囊胚泡得到嵌合小鼠,再经小鼠培育得到KyoT基因被剔除的小鼠.纯合子KyoT基因剔除小鼠不能表达有功能的KyoT蛋白.表型分析表明纯合子KyoT基因剔除小鼠腹腔B1B细胞数增加,提示KyoT可能参与B淋巴细胞的发育.
- 韩骅王冀姝李荣牛利国孙强周鹏
- 关键词：基因剔除B淋巴细胞转录因子DNA结合蛋白
- 核糖体蛋白L6/Taxreb107的核定位信号的分析被引量：2
- 2002年
- 核糖体蛋白L6 (RpL6 ,Taxreb10 7)含有三个具有核定位信号特征的基序 .用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能 .将RpL6 /Taxreb10 7分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵母 ,发现其前两个核定位信号可以介导融合蛋白进入细胞核 ,而第三个核定位信号无此作用 .将RpL6 /Taxreb10 7分段与绿色荧光蛋白融合后转染培养的哺乳类细胞 ,证实了以上在酵母中所得的结果 .进一步发现RpL6 /Taxreb10 7的前两个核定位信号同时具有核仁定位的功能 .当在细胞中表达的早期 ,进入核内的融合蛋白优先定位于核仁 .这些结果一方面有助于理解RpL6 /Taxreb10 7核转位的机理 ,同时说明作者构建的核定位信号捕获系统也可用在蛋白质中寻找核定位信号 .
- 王冀姝杨曦李荣周鹏张淼丽韩骅
- 关键词：核定位信号核转位绿色荧光蛋白
