李红霞
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
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- 稳定表达小鼠白介素12的间充质干细胞株的筛选与鉴定
- 2009年
- 目的筛选获得慢病毒介导的分泌表达小鼠白介素12(mIL-12)的间充质干细胞株。方法采用PCR反应从pORF-mIL-12中扩增得到mIL-12基因的完整序列,克隆入pENTRTM11质粒,构建含小鼠IL-12基因的重组质粒pENTR-mIL-12,与pLenti6/V5-Dest质粒进行细胞外重组,得到pLenti6/V5-mIL-12质粒,经PCR、多酶切鉴定正确后送Invitrogen公司上海分公司测序;用293FT细胞进行病毒包装,得到具有感染性的病毒;分离小鼠间充质干细胞,用杀稻瘟素筛选Lenti-mIL-12-MSC的稳定表达株,并鉴定。结果构建了重组质粒pENTR-mIL-12和pLenti6/V5-mIL-12,测序结果与GenBank收录序列一致,未发生突变;包装得到Lenti6/V5-mIL-12病毒;筛选得到稳定表达的Lenti-mIL-12-MSC细胞株,并用RT-PCR方法及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测验证了mIL-12体外表达。结论筛选得到稳定表达mIL-12的间充质干细胞株。
- 徐健蓉李红霞王国庆杜小波魏于全赵菊梅
- 关键词：白细胞介素12间充质干细胞慢病毒载体
- 携带小鼠beta防御素2的间充质干细胞对小鼠恶性腹水的抑制作用被引量：2
- 2006年
- 背景与目的:防御素是天然免疫的重要分子,小鼠beta防御素2(murinebetadefensin2,MBD2)是防御素家族的重要成员,在天然免疫和获得性免疫中具有桥梁作用。本研究观察携带MBD2的间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSC)对小鼠恶性腹水的抑制作用。方法:从BALB/c小鼠肾脏中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)得到小鼠MBD2片段。构建、包装表达MBD2的慢病毒Lentivirus系统。用所得病毒感染MSC,经筛选得到稳定表达MBD2的MSC,RT-PCR验证MBD2的表达。取稳定表达MBD2的MSC培养上清用于趋化树突细胞实验。BALB/c小鼠腹腔接种MethA细胞,于接种后第2、4、6、8天腹腔注射筛选所得表达MBD2的MSC或生理盐水、未感染病毒的MSC、感染Null-Lentivirus病毒的MSC,观察恶性腹水产生情况、腹水性状及荷瘤小鼠存活情况。对于长期存活小鼠,再次腹腔注射MethA肿瘤细胞,观察存活情况。结果:在MBD2-Lentivirus感染后的MSC中顺利扩增出MBD2片段。MBD2组细胞培养上清对树突细胞有较强的趋化作用[(43±8)个],明显高于生理盐水(NS)组[(8±1)个]、MSC组[(14±2)个]和Null组[(12±3)个],差异有显著性(P<0.01)。经表达MBD2的MSC处理的荷瘤小鼠腹水血性程度不明显,腹水总量[(3.0±1.0)ml]明显少于NS组[(10.8±1.0)ml]、MSC组[(10.2±1.3)ml]和Null组[(9.8±1.6)ml],差异有显著性(P<0.05)。MBD2组在肿瘤接种后第40天仍有小鼠存活,而各对照组至肿瘤接种后第20天已全部死亡,MBD2组存活时间显著长于对照组(P<0.05)。长期存活的MBD2组小鼠经MethA肿瘤细胞再次腹腔接种,其存活时间仍长于未作任何处理的对照组小鼠。结论:成功构建了以MSC为载体的MBD2基因治疗系统,经腹腔注射可以抑制恶性腹水的生长。
- 王国庆徐建容王瑞李红霞徐宁杜小波魏于全
- 关键词：防御素慢病毒干细胞腹水
- CCL20重组慢病毒对小鼠肿瘤生长的影响被引量：1
- 2006年
- 目的通过CCL20重组慢病毒整合的间充质干细胞,观察肿瘤原位高表达CCL20能否激发机体的抗肿瘤免疫。方法构建小鼠CCL20重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导BALB/c小鼠间充质干细胞(mMSCs),杀稻瘟素(blasticidin)筛选出稳定表达mCCL20的混合克隆,命名为lenti-mCCL20-mMSCs,与CT26混合后皮下接种至同系BALB/c小鼠,设lenti-null-mMSCs与CT26混合接种、mMSCs与CT26混合接种、CT26单独接种为对照,观察肿瘤生长情况。结果构建了重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导BALB/c小鼠MSCs,获得lenti-mCCL20-mMSCs,动物实验发现CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,但促进肿瘤生长。结论CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,促进肿瘤生长,机制有待进一步研究。
- 李红霞陈平王炼徐健蓉王国庆贾永前杨莉
- 关键词：重组慢病毒
