王国庆
- 作品数：16 被引量：31H指数：3
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 异亮氨酸拉链修饰的可溶性CD40L在巴斯德毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2006年
- 为了获得异亮氨酸拉链修饰的可溶性CD 40L(IZ-sCD 40L)在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达,首先用PCR和重叠PCR的方法得到了IZ-sCD 40L基因片段,然后构建了巴斯德毕赤酵母表达质粒pP ICZαA-IZ-sCD 40L,核酸测序分析表明IZ-sCD 40L的基因片段正确克隆到pP ICZαA质粒中,将其线性化后,电转化到巴斯德毕赤酵母G S115中,PCR筛选阳性重组菌株,经表型鉴定后,用甲醇进行诱导表达,经SDS-PAGE和W estern b lot印迹杂交结果证实了表达产物为重组IZ-sCD 40L的融合蛋白。
- 杜小波田聆王永生刁鹏王国庆魏于全
- 关键词：可溶性CD40L巴斯德毕赤酵母
- 血管靶向及抗血管生成联合放射治疗的研究进展被引量：1
- 2005年
- 李平王国庆
- 关键词：血管靶向抗血管生成放射疗法VEGF受体内皮细胞
- CCL20重组慢病毒对小鼠肿瘤生长的影响被引量：1
- 2006年
- 目的通过CCL20重组慢病毒整合的间充质干细胞,观察肿瘤原位高表达CCL20能否激发机体的抗肿瘤免疫。方法构建小鼠CCL20重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导BALB/c小鼠间充质干细胞(mMSCs),杀稻瘟素(blasticidin)筛选出稳定表达mCCL20的混合克隆,命名为lenti-mCCL20-mMSCs,与CT26混合后皮下接种至同系BALB/c小鼠,设lenti-null-mMSCs与CT26混合接种、mMSCs与CT26混合接种、CT26单独接种为对照,观察肿瘤生长情况。结果构建了重组慢病毒lenti-mCCL20,体外转导BALB/c小鼠MSCs,获得lenti-mCCL20-mMSCs,动物实验发现CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,但促进肿瘤生长。结论CCL20瘤内表达增加肿瘤内淋巴细胞的浸润,促进肿瘤生长,机制有待进一步研究。
- 李红霞陈平王炼徐健蓉王国庆贾永前杨莉
- 关键词：重组慢病毒
- 携带小鼠beta防御素2的间充质干细胞对小鼠恶性腹水的抑制作用被引量：2
- 2006年
- 背景与目的:防御素是天然免疫的重要分子,小鼠beta防御素2(murinebetadefensin2,MBD2)是防御素家族的重要成员,在天然免疫和获得性免疫中具有桥梁作用。本研究观察携带MBD2的间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSC)对小鼠恶性腹水的抑制作用。方法:从BALB/c小鼠肾脏中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)得到小鼠MBD2片段。构建、包装表达MBD2的慢病毒Lentivirus系统。用所得病毒感染MSC,经筛选得到稳定表达MBD2的MSC,RT-PCR验证MBD2的表达。取稳定表达MBD2的MSC培养上清用于趋化树突细胞实验。BALB/c小鼠腹腔接种MethA细胞,于接种后第2、4、6、8天腹腔注射筛选所得表达MBD2的MSC或生理盐水、未感染病毒的MSC、感染Null-Lentivirus病毒的MSC,观察恶性腹水产生情况、腹水性状及荷瘤小鼠存活情况。对于长期存活小鼠,再次腹腔注射MethA肿瘤细胞,观察存活情况。结果:在MBD2-Lentivirus感染后的MSC中顺利扩增出MBD2片段。MBD2组细胞培养上清对树突细胞有较强的趋化作用[(43±8)个],明显高于生理盐水(NS)组[(8±1)个]、MSC组[(14±2)个]和Null组[(12±3)个],差异有显著性(P<0.01)。经表达MBD2的MSC处理的荷瘤小鼠腹水血性程度不明显,腹水总量[(3.0±1.0)ml]明显少于NS组[(10.8±1.0)ml]、MSC组[(10.2±1.3)ml]和Null组[(9.8±1.6)ml],差异有显著性(P<0.05)。MBD2组在肿瘤接种后第40天仍有小鼠存活,而各对照组至肿瘤接种后第20天已全部死亡,MBD2组存活时间显著长于对照组(P<0.05)。长期存活的MBD2组小鼠经MethA肿瘤细胞再次腹腔接种,其存活时间仍长于未作任何处理的对照组小鼠。结论:成功构建了以MSC为载体的MBD2基因治疗系统,经腹腔注射可以抑制恶性腹水的生长。
- 王国庆徐建容王瑞李红霞徐宁杜小波魏于全
- 关键词：防御素慢病毒干细胞腹水
- 血管靶向及抗血管生成联合放射治疗的研究进展
- ＜正＞ 肿瘤的生长必须依赖足够的血供,切断肿瘤的血供则可抑制肿瘤生长,甚至造成肿瘤细胞坏死。以肿瘤血管内皮细胞为靶点,从而影响肿瘤血供的治疗方法是近几十年来肿瘤学研究中一个相当热门的领域。其治疗作用具有:①高效性,一根血...
- 李平王国庆
- 文献传递
- 新基因PCIA1真核表达载体的构建及HeLa细胞稳定转染株的建立与鉴定*被引量：1
- 2006年
- 目的构建人的新基因(PCIA1)的真核表达载体,并将其载体稳定转染到HeLa细胞株中。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增PCIA1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组质粒pcDNA-PCIA1,重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将该表达载体导入到HeLa细胞中,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,用RT-PCR和Westernblot检测PCIA1基因在HeLa细胞中的表达。结果经RT-PCR及Westernblot检测,证实真核表达重组质粒pcDNA-PCIA1构建成功,PCIA1基因已经稳定转染到了HeLa细胞中并表达PCIA1蛋白。结论成功建立了人新基因PCIA1的稳定转染细胞株,为进一步研究PCIA1的功能奠定了基础。
- 王瑞邓洪新王国庆严飞彭枫
- 关键词：转染HELA细胞
- 因特网上的血管生成研究资源
- 2004年
- 王国庆易成周宏远
- 关键词：因特网血管生成多媒体资料网上资源
- 防御素2融合VE-Cadherin重组质粒的抗血管生成免疫作用被引量：3
- 2006年
- 目的构建β防御素2(BD2)融合血管内皮钙粘附素(VE-Cadherin)胞外段重组质粒,以期探讨其免疫后抗肿瘤血管生成作用。方法PCR扩增成熟BD2片段和VE-Cadherin胞外段。以连接肽连接成熟BD2片段和VE-Cadherin胞外段,通过重叠PCR构建融合分子。将所得三种片段插入到pSecTag2B真核表达质粒。转染CT26肿瘤细胞,RT-PCR检测其表达。取转染COS细胞后的上清液做趋化实验,检测融合分子对树突状细胞(DC)的趋化作用。所得质粒经肌肉注射免疫小鼠后,皮下植入包裹CT26肿瘤细胞的藻酸盐微球,检测血管生成情况。结果测序证实三种质粒构建正确,能在真核细胞中顺利表达。BD2融合重组质粒和未融合的BD2质粒转染细胞后的上清液趋化DC的能力相近(P>0.05)。与其余各组质粒免疫相比,融合重组质粒免疫后能够显著抑制藻酸盐微球中肿瘤细胞诱导的血管生成(P<0.01)。结论BD2融合血管生成相关分子后的重组质粒免疫动物后能在体内有效地打破机体对肿瘤新生血管的免疫耐受。
- 王国庆王永生王瑞吴杨杜小波徐建容刁鹏
- 关键词：防御素血管生成免疫作用
- 一种可用于肿瘤微循环研究的鸡胚无壳培养技术被引量：2
- 2002年
- 目的 :鸡胚用于脉管研究已有多年的历史 ,是研究肿瘤诱导的血管生成 ,淋巴管生成的较好体内模型之一。鸡胚培养分为无壳培养与普通培养。本文介绍了一种简单、有效的鸡胚无壳培养方法。方法 :以食品保鲜膜、一次性饮水杯构建无壳培养容器 ,鸡蛋常规孵育几天后以“双窗法”或“直接破壳法”转入容器中无壳培养。分析不同移植方法对移植成功率的影响。描绘鸡胚移植后的生存曲线。结果 :双窗法只适合于气室较大的鸡蛋。鸡胚无壳移植 4天后大约能平稳地生存 9天。结论 :不同的种蛋宜选用不同的移植方法 。
- 王国庆易成周宏远
- 关键词：肿瘤微循环鸡胚
- 稳定表达小鼠白介素12的间充质干细胞株的筛选与鉴定
- 2009年
- 目的筛选获得慢病毒介导的分泌表达小鼠白介素12(mIL-12)的间充质干细胞株。方法采用PCR反应从pORF-mIL-12中扩增得到mIL-12基因的完整序列,克隆入pENTRTM11质粒,构建含小鼠IL-12基因的重组质粒pENTR-mIL-12,与pLenti6/V5-Dest质粒进行细胞外重组,得到pLenti6/V5-mIL-12质粒,经PCR、多酶切鉴定正确后送Invitrogen公司上海分公司测序;用293FT细胞进行病毒包装,得到具有感染性的病毒;分离小鼠间充质干细胞,用杀稻瘟素筛选Lenti-mIL-12-MSC的稳定表达株,并鉴定。结果构建了重组质粒pENTR-mIL-12和pLenti6/V5-mIL-12,测序结果与GenBank收录序列一致,未发生突变;包装得到Lenti6/V5-mIL-12病毒;筛选得到稳定表达的Lenti-mIL-12-MSC细胞株,并用RT-PCR方法及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测验证了mIL-12体外表达。结论筛选得到稳定表达mIL-12的间充质干细胞株。
- 徐健蓉李红霞王国庆杜小波魏于全赵菊梅
- 关键词：白细胞介素12间充质干细胞慢病毒载体
