赵亚
- 作品数：6 被引量：7H指数：1
- 供职机构：湖南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省研究生科研创新项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 一种植物叶片切片的制作方法
- 一种植物叶片切片的制作方法，在制片过程中，添加非离子表面活性剂吐温‑20的水溶液。制片所使用的非离子表面活性剂吐温‑20的水溶液，吐温‑20的体积浓度＜0.1%，用量为50μl～100μl。本发明通过添加非离子表面活性剂...
- 邓子牛赵亚马先锋戴素明符红艳李芳
- 文献传递
- 柑橘衰退病毒基因p23 RNAi载体的构建及转化被引量：1
- 2016年
- 【目的】构建柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)含p23的RNAi载体,以获得具有抗性的柑橘转基因植株。【方法】基于转化病毒基因介导抗性,根据NCBI公布的CTV基因组序列,查找p23保守序列,设计并克隆两条不同长度的片段。对两条片段和植物表达载体p BI 121进行双酶切和连接来构建RNAi载体。初步预测所构建的载体发生RNAi抗病毒的可行性。利用农杆菌介导的瞬时表达技术将含RNAi载体的农杆菌注射入CTV指示植物墨西哥莱蒙的叶片,利用GUS组织化学染色法观察叶片中载体发生瞬时表达的情况。发生瞬时表达的叶片接种CTV T36基因型,利用酶联免疫反应(ELISA)检测病毒含量。同时,提取叶片的RNA并反转录为c DNA,利用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测CTV p20,通过该基因的表达量反映叶片中的病毒含量。通过农杆菌介导的遗传转化将RNAi载体转入大红甜橙实生苗上胚轴节间茎段,抗生素筛选得到的芽嫁接至枳橙实生试管苗。提取大红甜橙叶片的DNA,通过PCR扩增确定其是否为转基因阳性;目的基因检测为阳性的植株二次嫁接至温室保存的酸橙实生苗;根据插入的p23基因序列设计q-PCR引物,检测转基因植株中p23的表达情况。取CTV T36基因型寄主的带皮芽,用腹接法接种大红甜橙转基因植株。取接种后新萌发枝梢上的叶片,用检测瞬时表达叶片同样的方法分析植株的抗病性。对于第1次接种后未检测出病毒感染的植株,进行第2次接种并检测分析。【结果】克隆得到CTV p23 513 bp的长片段和291 bp的短片段,与载体p BI121连接后成功构建含发夹结构的来自病原且能靶向目的基因的RNAi载体,命名为p23-RNAi。注射p23-RNAi的墨西哥莱蒙叶片经GUS染色后能够产生蓝色斑点,表明农杆菌p23-RNAi可以在叶片中发生瞬时表达;接种CTV后第15和30天,瞬时表达p23-RNAi的墨西哥莱蒙叶片ELISA检测结果均为阴性,同时q-PCR检测
- 李芳邓子牛赵亚李大志戴素明
- 关键词：柑橘衰退病毒RNAI
- 利用激光共聚焦扫描显微镜对溃疡病菌侵染柑橘叶片的实时观察被引量：5
- 2017年
- 柑橘溃疡病对柑橘产业造成了巨大损失,而研究柑橘与溃疡病菌的互作关系以及柑橘的感病和抗病性均需要观察溃疡病菌在柑橘寄主中的侵染和定殖过程。激光共聚焦扫描显微镜不仅可以观察活细胞,活组织的动态代谢过程,而且可以获得三维图像,对于病原菌在柑橘植物组织内的繁殖和致病机制研究具有重要意义。但是,选择适宜的植物材料和制片方法对激光共聚焦扫描显微镜的观察效果影响很大。本文对激光共聚焦扫描显微镜所观察的材料在其处理和观察方法上加以改进,获得了质量更好的图片和实验结果,也使得实验更为方便快捷。激光共聚焦扫描显微观察还在瞬时表达分析中得到应用,提高了柑橘瞬时表达分析的效果。通过将切片和压片相结合观察到溃疡病菌在不同时间点对柑橘叶片的侵染情况,而通过3D建模能观察到柑橘叶片不同组织层面中的病菌数量和病菌位置,为研究溃疡病菌在叶片中的定殖方式和入侵数量提供了前期基础。
- 赵亚马先锋肖翠刘利平李娜邓子牛
- 关键词：激光共聚焦显微镜柑橘溃疡病菌
- 一种植物叶片切片的制作方法
- 一种植物叶片切片的制作方法，在制片过程中，添加非离子表面活性剂吐温‑20的水溶液。制片所使用的非离子表面活性剂吐温‑20的水溶液，吐温‑20的体积浓度＜0.1%，用量为50μl～100μl。本发明通过添加非离子表面活性剂...
- 邓子牛赵亚马先锋戴素明符红艳李芳
- 溃疡病菌入侵柑橘叶片的解剖观察及抗性相关基因FLS2的克隆与分析
- 柑橘溃疡病是由柑橘溃疡病菌引起的一种世界性检疫病害,危害严重,防治困难,对柑橘产业造成了巨大损失。加强对柑橘溃疡病菌的检测,只能暂缓病情形势的发展,找到抗病柑橘资源、培育抗病品种是最根本的解决途径。本研究拟利用激光共聚焦...
- 赵亚
- 关键词：柑橘柑橘溃疡病菌激光共聚焦扫描显微镜
- 文献传递
- 柑橘衰退病毒基因RNAi载体的构建被引量：1
- 2017年
- 基于转化病毒基因介导抗性,通过在植物表达载体p CAMBIA 2301上插入启动子–内含子–终止子的方式,构建一种含有发夹结构的、通用型强的RNAi载体骨架结构;以柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)的p25、p20和p23基因保守序列为模板设计正向片段和反向片段,先后与骨架载体连接,成功构建了3个RNAi载体(分别命名为ds2301–p25、ds2301–p20和ds2301–p23),并将载体ds2301–p23注射入墨西哥莱蒙叶片。制作p23基因的地高辛标记探针,用Northern杂交检测是否有si RNA产生。结果表明:用Northern杂交可以检测到p23特异的si RNA,在墨西哥莱蒙叶片中瞬时表达的农杆菌ds2301–p23可以发生RNAi,表达有效的si RNA。本研究中构建的骨架载体可以广泛用于RNAi载体的构建,含有柑橘衰退病毒基因片段的3个载体可以用于基因功能分析及具有CTV抗性的柑橘种质资源获得。
- 李芳邓子牛赵亚李大志戴素明
- 关键词：柑橘柑橘衰退病毒RNAI载体
