戴素明
- 作品数：62 被引量：212H指数：7
- 供职机构：湖南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学轻工技术与工程更多>>
- 一种柑橘的绿色组织特异启动子
- 一种柑橘的绿色组织特异启动子，其具有SEQIDNO.1所示的序列。使用本发明之柑橘绿色组织特异启动子驱动外源基因只在绿色组织表达，而不是在全株表达，能避免过度消耗养分和能量，将其运用于以种子、果实为主要收获产物的作物中，...
- 邓子牛陶坚龙桂友李荣华戴素明
- 抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的制备及单链抗体基因的构建被引量：4
- 2009年
- 【目的】制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体并构建其单链抗体(single chain variable fragment,ScFv)基因,为从PthA角度进一步研究柑橘溃疡病致病机理创造条件,并为构建单链抗体基因植物表达载体,尝试利用转基因和植物抗体技术创制抗溃疡病柑橘新种质奠定基础。【方法】利用PthA-NLS重组多肽免疫Balb/c小鼠,制备抗PthA-NLS多肽单克隆抗体,从分泌抗PthA-NLS多肽单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR和重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)法构建其单链抗体基因,并克隆到pGEM-T载体和原核表达载体pET32a(+)中,重组原核表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白的表达。【结果】获得了3株能稳定分泌抗PthA-NLS多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞株1C8H1、2D12B6、3D8A10。成功构建了单链抗体基因ScFv,获得的ScFv基因大小约750bp,其中重链可变区(VH)基因有360bp,轻链可变区(VL)基因有342bp,中间连接肽基因45bp,经过IPTG诱导ScFv原核表达,获得了大小为44.5kD的ScFv重组蛋白。【结论】试验获得了3株能稳定分泌抗PthA-NLS多肽的单克隆抗体杂交瘤细胞株,成功构建了ScFv基因,并实现了原核表达,为进一步探索PthA的致病机理和下一步利用抗体技术获得抗溃疡病柑橘种质[0]的研究打下了基础。
- 胡春华龙桂友戴素明马先锋谢玉明李娜邓子牛
- 关键词：柑橘溃疡病单克隆抗体单链抗体
- 柑橘黄龙病菌亚洲种重复序列分析及其检测引物筛选
- 2024年
- 由柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)引起的黄龙病(Huanglongbing,HLB)对柑橘产业危害严重,通过加强病原检测有利于减少病害传播。利用高拷贝重复序列位点设计引物,虽能提高黄龙病检测的灵敏度,但重复序列的多态性很难保障引物检测特征稳定。通过比较11个CLas全基因组的重复序列,以期获得保守的重复序列,利于开发通用型CLas检测引物。结果显示,CLas全基因组有4段长度>50 bp的高拷贝重复序列,其重复数量和序列在11个菌株中均具有保守性。基于4段重复序列开发了CLas特异的6对引物,均能稳定检测田间柑橘黄龙病样品,熔解曲线吸收峰单一,熔解温度稳定。比较6对引物的灵敏度,发现基于5个拷贝重复序列开发的IR16-fr灵敏度最高。使用IR16-fr和常规引物CQULas-FR对50份田间柑橘叶片样品进行检测,结果显示,CQULas-FR对CLas的检出率为20%,而IR16-fr的检出率为26%。新引物IR16-fr可为田间CLas高效率检测提供技术支撑。
- 蒋青岚孙太安李大志李娜王冰邓子牛戴素明
- 关键词：柑橘黄龙病引物
- 不同营养土及容器对枳苗生长的影响被引量：2
- 2022年
- 以柑橘的砧木枳苗为试材,育苗土壤选择B1营养土(河沙、锯木屑、草炭)和B2营养土(椰糠、棕纤维、草炭、稻壳、红壤),育苗容器选择聚乙烯塑料容器和多孔可拆卸容器,设置不同营养土和不同容器处理的培养试验,分别研究营养土、容器对枳苗生长的影响。结果表明:在育苗土壤方面,枳苗嫁接期,B2营养土培育的枳苗质量较优,相比常用的B1营养土,B2营养土培育的枳苗各项生长指标均极显著增加;在育苗容器方面,相比常用的聚乙烯塑料容器,多孔可拆卸容器培育的枳苗株高、茎粗、主根粗、根干重极显著增加,适合枳苗生长。因此,选用B2营养土及多孔可拆卸容器能显著提高枳苗生长质量,这为容器育苗材料的选择提供了新的途径。
- 谭振华谭鑫黄佳慧何淙成璐伶罗宇戴素明李大志
- 关键词：营养土
- 细胞色素P450表达在植物防御反应中的作用
- 本文从植物P450的多样性,及在寄主-病原物不亲和和互作中的特异表达,证明了P450参与植物的抗病反应,分析P450在植物抗病反应的作用途径.
- 戴素明周程爱谢丙炎冯东昕肖启明
- 关键词：细胞色素植物抗病性植保素
- 文献传递
- 一种柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法
- 一种柑橘溃疡病快速接种及鉴定方法，包括以下步骤：（1）样品叶片采集；（2）柑橘溃疡病病原菌培养；（3）样品叶片接种溃疡病鉴定；（4）样品叶片生根培养；（5）样品叶片培养管理。本发明针对目前柑橘溃疡病抗性鉴定的缺点和不足，...
- 马先锋朱志媚邓子牛戴素明盛玲
- 文献传递
- 柑橘衰退病毒基因RNAi载体的构建被引量：1
- 2017年
- 基于转化病毒基因介导抗性,通过在植物表达载体p CAMBIA 2301上插入启动子–内含子–终止子的方式,构建一种含有发夹结构的、通用型强的RNAi载体骨架结构;以柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)的p25、p20和p23基因保守序列为模板设计正向片段和反向片段,先后与骨架载体连接,成功构建了3个RNAi载体(分别命名为ds2301–p25、ds2301–p20和ds2301–p23),并将载体ds2301–p23注射入墨西哥莱蒙叶片。制作p23基因的地高辛标记探针,用Northern杂交检测是否有si RNA产生。结果表明:用Northern杂交可以检测到p23特异的si RNA,在墨西哥莱蒙叶片中瞬时表达的农杆菌ds2301–p23可以发生RNAi,表达有效的si RNA。本研究中构建的骨架载体可以广泛用于RNAi载体的构建,含有柑橘衰退病毒基因片段的3个载体可以用于基因功能分析及具有CTV抗性的柑橘种质资源获得。
- 李芳邓子牛赵亚李大志戴素明
- 关键词：柑橘柑橘衰退病毒RNAI载体
- 冰糖橙与枸橼C-05对溃疡病菌生长特性的影响被引量：5
- 2015年
- 【目的】采用新的接种方式,比较冰糖橙与枸橼C-05叶片对溃疡病菌生长特性的的影响,探讨冰糖橙与枸橼C-05对溃疡病菌敏感度的差异性。【方法】将完全展开、颜色淡绿的冰糖橙与枸橼C-05叶片进行75%酒精和1%Na Cl O消毒并切割后,分别与溃疡病菌在离体条件下共培养,观察叶片在MT培养基(对照)、MT中间嵌入NYGA培养基(MA)中对溃疡病菌生长的影响;分别提取冰糖橙和枸橼C-05叶片的粗提液,并以25%、50%和75%的比例添加至MT培养基中,观察冰糖橙和枸橼C-05叶片提取液分别对溃疡病菌生长的影响;同时以不同比例的叶片粗提液添加至NYGB培养基中,观察冰糖橙与枸橼C-05叶片提取液分别对溃疡病菌胞外多糖含量的影响。【结果】Xac在培养冰糖橙叶片的MT培养基中生长迅速,接种1周后即出现Xac的增殖现象,菌斑直径均值比对照大0.5 mm;接种2周后菌斑直径均值为5.27 mm,几乎是对照的3倍;而2—3周为Xac的急速生长期,菌斑直径由5.27 mm快速增长至13.41 mm,是对照菌斑直径的5倍多;3周后菌斑生长缓慢趋于平稳;各个时间点的菌斑直径与对照相比均达到极显著差异水平。在培养冰糖橙叶片的MA培养基中,Xac生长1 d后菌斑直径均值为4.58 mm,小于对照的6.19 mm;接种3 d后Xac继续生长,菌斑直径几乎与对照组相同,差异不显著;但是在接种5 d后,菌斑直径快速增长至21.31 mm,大于对照组的16.33 mm,3个菌斑长势连在一起,两者差异达到极显著水平。冰糖橙的叶片提取液对溃疡病菌的生长及胞外多糖含量均有促进作用,随着其添加浓度的增加,促进效果越明显,与对照相比均可达到极显著水平。Xac在培养枸橼C-05叶片的MT培养基中生长较为缓慢,在接种1周后菌斑直径与对照相比差异不显著;2周后菌斑直径约为对照的一半;3周时,菌斑直径均值为2.06 mm,小于对照的2.62mm;2周和3周时的菌斑直径与对照相比均达到显著�
- 葛红娟龙桂友戴素明李大志李娜邓子牛
- 关键词：冰糖橙溃疡病菌胞外多糖
- 利用qPCR技术检测柑橘溃疡病菌的灵敏度分析
- 2015年
- 以常规PCR为对照,分析了实时荧光定量PCR（q PCR）检测柑橘溃疡病菌DNA和柑橘溃疡病菌菌量的灵敏度,并对接种柑橘溃疡病菌后的冰糖橙样品进行了动态监测。结果显示,q PCR检测柑橘溃疡病菌DNA和柑橘溃疡病菌菌量的灵敏度比常规PCR高1～3个数量级,且常规PCR对柑橘溃疡病菌DNA的检测会受到寄主植物DNA的干扰,q PCR不受寄主植物DNA影响;对接种后冰糖橙样品的分析,q PCR即时就能检测到柑橘溃疡病菌,并能实时观察到柑橘溃疡病菌在寄主叶片的增殖情况,而常规PCR要接种后2 d才能检测到柑橘溃疡病菌。
- 李文娟肖翠戴素明李大志邓子牛
- 关键词：实时荧光定量PCR柑橘溃疡病菌
- 柑橘衰退病毒基因p23 RNAi载体的构建及转化被引量：1
- 2016年
- 【目的】构建柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)含p23的RNAi载体,以获得具有抗性的柑橘转基因植株。【方法】基于转化病毒基因介导抗性,根据NCBI公布的CTV基因组序列,查找p23保守序列,设计并克隆两条不同长度的片段。对两条片段和植物表达载体p BI 121进行双酶切和连接来构建RNAi载体。初步预测所构建的载体发生RNAi抗病毒的可行性。利用农杆菌介导的瞬时表达技术将含RNAi载体的农杆菌注射入CTV指示植物墨西哥莱蒙的叶片,利用GUS组织化学染色法观察叶片中载体发生瞬时表达的情况。发生瞬时表达的叶片接种CTV T36基因型,利用酶联免疫反应(ELISA)检测病毒含量。同时,提取叶片的RNA并反转录为c DNA,利用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测CTV p20,通过该基因的表达量反映叶片中的病毒含量。通过农杆菌介导的遗传转化将RNAi载体转入大红甜橙实生苗上胚轴节间茎段,抗生素筛选得到的芽嫁接至枳橙实生试管苗。提取大红甜橙叶片的DNA,通过PCR扩增确定其是否为转基因阳性;目的基因检测为阳性的植株二次嫁接至温室保存的酸橙实生苗;根据插入的p23基因序列设计q-PCR引物,检测转基因植株中p23的表达情况。取CTV T36基因型寄主的带皮芽,用腹接法接种大红甜橙转基因植株。取接种后新萌发枝梢上的叶片,用检测瞬时表达叶片同样的方法分析植株的抗病性。对于第1次接种后未检测出病毒感染的植株,进行第2次接种并检测分析。【结果】克隆得到CTV p23 513 bp的长片段和291 bp的短片段,与载体p BI121连接后成功构建含发夹结构的来自病原且能靶向目的基因的RNAi载体,命名为p23-RNAi。注射p23-RNAi的墨西哥莱蒙叶片经GUS染色后能够产生蓝色斑点,表明农杆菌p23-RNAi可以在叶片中发生瞬时表达;接种CTV后第15和30天,瞬时表达p23-RNAi的墨西哥莱蒙叶片ELISA检测结果均为阴性,同时q-PCR检测
- 李芳邓子牛赵亚李大志戴素明
- 关键词：柑橘衰退病毒RNAI
