练国达
- 作品数：13 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bmi-1基因过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨原癌基因B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(Bmi-1)过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法:采用逆转录病毒介导转染方法将携带原癌基因Bmi-1的质粒或空质粒稳定转染GES-1细胞,通过real-time PCR及Western blotting在mRNA及蛋白水平鉴定转染效果。流式细胞术检测过表达Bmi-1对GES-1细胞周期的影响。应用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒检测稳定转染Bmi-1对GES-1细胞增殖的影响。结果:Real-time PCR及Western blotting结果均表明成功建立稳定转染Bmi-1基因的GES-1细胞株。流式细胞术结果表明,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞G0/G1期减少,G2/M期和S期细胞增多。生长曲线显示,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞增殖速度明显提高。结论:过表达Bmi-1基因能调控GES-1细胞的细胞周期,促进GES-1细胞的增殖。
- 练国达邓辉陈茵婷曾林涓张秋波钱辰琛黄开红
- 关键词：GES-1细胞
- 免疫纳米微粒靶向胰腺癌细胞输送siRNA的方法研究被引量：1
- 2014年
- 目的:构建一种向胰腺癌细胞安全、高效输送siRNA的免疫纳米载体。方法:检测纳米载体IONP-PEI(非靶向组)及其与siRNA复合物的表征;通过琼脂糖凝胶电泳检测siRNA结合力、MTS法检测细胞活力和流式细胞术检测转染率以确定其复合siRNA的最佳N/P比值;细胞免疫荧光和普鲁士蓝染色观察scFvCD44v6偶联IONP-PEI的靶向纳米载体(靶向组)在细胞内分布;流式细胞术、荧光显微镜观察、real-time PCR和Western blotting检测靶向组和非靶向组的转染率和转染siKRAS后的干扰效果。结果:IONP和PEI的最适质量比为0.75;纳米载体复合siRNA的最佳N/P比值为20;IONP-PEI/siRNA复合物的电位为(21.73±8.07)mV,粒径为(51.3±2.2)nm。荧光显微镜显示,非靶向组和靶向组转染后均在细胞内,靶向组的转染率为(89.75±1.81)%,高于非靶向组的(59.87±4.52)%,且靶向组的荧光强度高于非靶向组。靶向组的KRAS mRNA的相对表达量为(34.02±6.15)%,低于非靶向组的(51.09±6.70)%;Western blotting显示靶向组的KRAS蛋白表达量低于非靶向组。结论:非靶向组和靶向组均能够将siRNA转染进细胞内,且靶向组具有更高的转染效率和更好的干扰基因表达效果。本课题构建的scFvCD44v6-IONP-PEI是一种高效、安全和靶向识别胰腺癌细胞的免疫纳米载体。
- 李佳佳陈茵婷曾林涓练国达陈少杰李雅晴黄开红
- 关键词：胰腺肿瘤纳米微粒基因治疗靶向
- 肿瘤分期及不同治疗方式对胰腺癌患者生存期的影响被引量：10
- 2018年
- 目的探讨影响胰腺癌患者生存期的相关因素。方法回顾性分析广州中山大学孙逸仙纪念医院、中山大学附属肿瘤防治中心、广东省人民医院共3家医院2004年至2016年间1620例确诊为胰腺癌患者的病例资料,采用寿命表法及Log-rank检验分析TNM分期、手术治疗、姑息化疗、术后辅助化疗对胰腺癌患者生存时间的影响。结果所有胰腺癌患者的中位生存期为7.15个月。TNMⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者的中位生存期分别为12.50、10.12、9.56、5.43个月,差异有统计学意义(P=0.001)。非手术治疗患者中位生存期为6.10个月,行根治性手术患者为13.67个月,差异有统计学意义(P=0.001)。未化疗患者中位生存期为5.55个月,行姑息化疗患者为7.58个月,差异有统计学意义(P=0.001)。行单纯根治性手术患者中位生存期为12.38个月,术后行辅助化疗患者为14.50个月,差异无统计学意义(P=0.561)。结论早期诊断胰腺癌从而进行根治性手术治疗是延长患者生存期的重要举措,失去手术机会的患者行姑息性化疗可在一定程度上改善临床预后。
- 谢锐杰曾林涓练国达陈少杰李佳佳陈茵婷陈燕珠陈燕珠张力吴莉莉刘建化
- 关键词：胰腺肿瘤肿瘤分期化学疗法
- 人结肠癌细胞系 SP 细胞 microRNA 表达谱的初步分析被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨结肠癌侧群(SP)细胞在结肠癌多药耐药性中的作用及其microRNA生物标志。方法:结肠癌SP细胞的分选采用流式细胞术,细胞活力的测定采用MTT法,microRNA表达谱的检测采用microRNA芯片,microRNA表达的验证采用实时荧光定量PCR。结果:(1)HCT-15、HT-29及LoVo结肠癌细胞系中SP细胞的比例分别为16.75%、13.02%及9.52%。(2)化疗药(5-氟尿嘧啶、草酸铂及阿霉素)对3种结肠癌细胞系SP细胞的IC_(50)均明显高于对非SP细胞的IC_(50)(P<0.05)。(3)microRNA芯片检测表明miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在3种结肠癌细胞系的SP细胞中表达均上调,实时荧光定量PCR亦证实此结果。结论:miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在结肠癌细胞系的SP细胞中表达上调,有可能成为结肠癌SP细胞的潜在microRNA生物标志。
- 夏忠胜钟娃于涛练国达周慧敏陈广成
- 关键词：结肠肿瘤侧群细胞微小RNA
- 胰腺癌预后相关铁死亡基因筛选及预后预测模型构建
- 2022年
- 目的探讨铁死亡相关基因对胰腺癌患者预后预测的价值,并进一步探索其分子机制。方法从公共数据库中下载胰腺癌患者的基因表达及相应的临床病理数据,采用R软件"limma"包筛选胰腺癌组织中差异表达基因,使用单因素COX回归分析筛选预后相关的铁死亡相关基因,利用LASSO COX回归分析构建预后模型。通过Kaplan-Meier生存分析检验该模型在预测胰腺癌预后中的意义,用ROC曲线评估模型预测胰腺癌预后的准确性。在ICGC验证队列中通过Kaplan-Meier生存分析、ROC曲线评估该模型在外部队列中的预测价值。依照风险值中位数,将TCGA训练队列分为两组,比较其基因表达差异、差异基因富集通路差异,评估免疫细胞浸润丰度。结果通过单因素COX回归分析,37个铁死亡相关基因被鉴定为预后基因(P<0.05)。利用LASSO COX回归分析,构建了一个基于15个铁死亡相关基因的预后预测模型。根据模型计算将队列中所有患者分为高风险组和低风险组,Kaplan-Meier生存分析表明高风险组的胰腺癌患者较低风险组生存时间短(HR=2.16,P<0.05)。ROC曲线分析证明了预测模型在胰腺癌预后预测中的准确性:ROC曲线下面积值分别为0.74(1年)、0.82(3年)、0.88(5年)。对高低风险组差异表达基因进行功能富集分析,发现两组胰腺癌患者免疫微环境之间存在差异,高风险组中幼稚B细胞、浆细胞、CD8^(+)T细胞浸润程度较低风险组低,但M0和M1巨噬细胞的浸润程度高(P<0.05)。此外,在PD-1和CTLA4在TCGA-PAAD队列低危组和高危组中的表达中,TCGA-PAAD队列低风险组患者中PD-1和CTLA4的表达水平较高风险组患者更高(P<0.05)。结论本研究构建了胰腺癌中铁死亡相关基因预后预测模型,具有预测胰腺癌患者预后的作用,并发现TCGA队列中高低风险组免疫微环境存在差异,可为免疫治疗提供参考。
- 何冲周姝睿李雅晴陈少杰练国达陈尚祥黄开红
- 关键词：胰腺癌预后
- 胎盘生长因子基因沉默对胰腺癌 PANC1细胞迁移和侵袭的影响
- 2016年
- 目的：探讨胎盘生长因子（ PIGF）基因沉默对人胰腺癌PANC1细胞迁移、侵袭能力及化疗药物耐药性的影响。方法设计并合成3个靶向PIGF的siRNA（ siRNA-PIGF），以非特异性的siRNA （ siRNA-NC）作为转染的阴性对照，以未转染细胞作为空白对照。采用脂质体法将siRNA转染PANC1细胞，分别采用实时RT-PCR和ELISA法检测各组细胞PIGF mRNA及蛋白表达抑制率；MTT法检测化疗药物处理对各组细胞的生长抑制率；Transwell 小室检测细胞的侵袭和迁移能力。结果转染3个siRNA-PIGF的 PANC1细胞 PIGF mRNA 表达抑制率分别为（64．38±8．92）％、（70．48±7．72）％、（81．25±6．02）％，以转染siRNA-PIGF-3的基因沉默效应最佳。转染24 h后，siRNA-PIGF组细胞PIGF mRNA表达量较siRNA-NC组下降（63．72±8．20）％，较未转染组下降（75．07±8．25）％，差异均有统计学意义（P 值均＜0．05）；转染48 h 后，培养上清液 PIGF 蛋白含量较 siRNA-NC 组下降（42．92±1．34）％，较未转染组下降（46．25±3．64）％，差异均有统计学意义（P 值均＜0．01），而未转染组和siRNA-NC组间的差异无统计学意义。3 ng／L吉西他滨处理后，siRNA-PIGF组细胞的生长抑制率显著高于siRNA-NC组及未转染组[（44．35±5．05）％比（34．29±3．60）％、（31．01±1．08）％]，差异均有统计学意义（P值均＜0．05），而5-氟尿嘧啶或阿霉素处理后3组的生长抑制率差异无统计学意义。在细胞迁移和侵袭实验中，siRNA-PIGF组穿膜细胞数分别为siRNA-NC组的38．1％、28．2％，为未转染组的40．8％、36．2％，差异均有统计学意义（ P 值均＜0．05）。结论 PIGF 基因沉默能显著抑制胰腺癌PANC1细胞的迁移与侵袭能力，能增强对化疗药物吉西他滨的敏感性。
- 刘建化马冬陈少杰练国达李佳佳黄开红
- 关键词：胰腺肿瘤胎盘生长因子肿瘤浸润
- 240例胰腺癌肝转移临床特征及预后分析被引量：2
- 2020年
- 目的研究胰腺导管腺癌(PDAC)肝转移患者临床与病理特征,并分析影响患者预后危险因素。方法回顾性分析2007年1月至2014年10月中山大学孙逸仙纪念医院具有完整临床病理资料PDAC肝转移病例共240例,并随访本组患者。采用Kaplan-Meier统计学方法评估患者生存情况,并用Cox单因素分析、多因素回归模型筛选影响患者预后的独立危险因素。结果在纳入本研究患者中,截至随访终点,共有227名患者死亡(94.58%),中位生存时间为5.34月。6个月,1年,3年生存率分别为36.50%、16.36%和5.39%。单因素生存分析提示年龄、CA19-9、肿瘤分化程度、T分期、化疗为预后危险因素。多因素分析显示T4分期、肿瘤低分化、未接受化疗为胰腺癌肝转移患者预后独立危险因素。结论T4分期、肿瘤低分化程度、未接受化疗为胰腺癌肝转移患者预后独立危险因素。
- 李宣娜陈尚祥练国达陈少杰黄开红
- 关键词：胰腺癌预后
- TIMP1与EFEMP1在直肠癌中的表达水平及预后意义被引量：3
- 2020年
- 目的运用TCGA数据库,分析组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)在直肠癌中的表达情况,及与直肠癌预后的关系。分析与TIMP1高表达组与低表达组差异基因的分子功能及生物学功能。分析TIMP1与EFEMP1的关系,EFEMP1与直肠癌预后的关系。方法下载TCGA数据库中直肠癌相关数据,分析TIMP1在癌旁组织与直肠癌组织中的表达差异。分析不同临床分期患者的TIMP1表达水平。Kaplan-Meier生存曲线分析TIMP1表达量与直肠癌患者总体生存时间(OS)和无瘤生存时间(PFS)的关系。根据TIMP1表达水平,将直肠癌病人分为TIMP1高表达与低表达组,分析两组差异基因。对差异基因进行富集分析及通路分析,从而探索TIMP1相关基因的功能。寻找与TIMP1密切相关的基因,分析其与TIMP1的相关性,分析其与直肠癌预后的关系。结果与癌旁组织比较,TIMP1在直肠癌组织中呈高表达,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者的TIMP1水平比对照组高。TIMP1表达水平越高,患者总体生存时间与无瘤生存时间越短,预后越差。基因富集结果显示,TIMP1高表达组与低表达组的差异基因,大多参与细胞黏附,维持细胞外基质稳定性等生物学过程。通路分析结果显示,差异基因在功能上与参与上皮-间质转化(EMT)的基因存在密切关联。其中含表皮生长因子的纤维蛋白样细胞外基质蛋白1(EFEMP1)基因与TIMP1呈正相关,EFEMP1表达越高,直肠癌患者总体生存时间和无瘤生存时间越短,预后越差。结论TIMP1在直肠癌中高表达,与预后呈负相关。TIMP1与EFEMP1呈正相关;EFEMP1基因在直肠癌中与预后呈负相关。
- 谭莹练国达陈少杰李佳佳陈尚祥黄开红陈茵婷
- 关键词：TIMP1EMT直肠癌预后
- SDF-1α/CXCR4轴通过诱导胰腺癌上皮-间充质转化促进肿瘤迁移和侵袭被引量：3
- 2019年
- 目的:探讨SDF-1α/CXCR4轴对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:应用RT-qPCR检测4种胰腺癌细胞株CXCR4 mRNA的表达。Transwell实验检测外源性SDF-1α及其受体CXCR4靶向抑制剂AMD3100对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。MTS法检测外源性SDF-1α及AMD3100对胰腺癌细胞活力的影响。Western blot法检测外源性SDF-1α及AMD3100对胰腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)相关标志物表达的影响。结果:(1) 4种胰腺癌细胞株均不同程度地表达CXCR4 mRNA,其中PANC-1细胞株表达量最高。(2)外源性SDF-1α可增强PANC-1细胞的迁移和侵袭能力,该作用可被AMD3100所阻断。(3)外源性SDF-1α处理PANC-1细胞72 h可增强细胞活力,该作用可被AMD3100阻断。(4)外源性SDF-1α通过上调SNAIL和TWIST促使PANC-1细胞发生EMT,该作用可被AMD3100所阻断。结论:SDF-1/CXCR4轴通过促进胰腺癌细胞发生EMT而促进肿瘤迁移和侵袭。
- 李若梦邹金茂李雅晴陈少杰练国达陈茵婷苏红黄开红
- 关键词：胰腺癌上皮-间充质转化
- 聚乙烯亚胺-聚乙二醇-siRNA纳米复合物的制备和理化性质的研究被引量：1
- 2010年
- 目的探索聚乙烯亚胺．聚乙二醇（PEI—PEG）-siRNA纳米复合物的制备方法及其理化性质，以提高siRNA的细胞转染率。方法设计合成了PEI-PEG共聚物基因载体，使其与针对细胞表面受体CD44v6的siRNA形成纳米复合物。通过粒径与电位测定、凝胶阻滞电泳、扫描电镜、流式细胞仪测定等方法，观察不同N／P比的纳米复合物的复合效果、表面形态和大小、基因转染率等。结果电镜下纳米复合物呈近球形、大小较一致、分散良好的纳米颗粒。N／P=5、10时复合物粒径分别为（174．6±1．2）nm，（267．7±1．8）nm。当N／P超过10时纳米复合物粒径减小，zeta电位为正值且增大。此时，siRNA被PEI—PEG完全复合，产生一种荧光淬灭作用。流式细胞仪结果表明纳米复合物的基因转染率随着N／P的增加而增大。当N／P比为30时，其转染率为（75．6±9.2）％。结论PEI—PEG是一种有潜力的阳离子基因载体，它的制备为下一步体外实验及动物实验提供了条件。
- 黄开红吴颖陈茵婷邓辉练国达帅心涛
- 关键词：RNA干扰药物载体胃肿瘤
