姚霜
- 作品数：11 被引量：16H指数：2
- 供职机构：苏州大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金常州市卫生局重大科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 载脂蛋白M在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的表达差异及其作用被引量：1
- 2022年
- 目的:探讨载脂蛋白M(apolipoprotein M,ApoM)在大鼠H9C2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的表达差异及作用。方法:利用安宁包缺氧体系构建大鼠H9C2心肌细胞H/R损伤模型,采用CCK-8、细胞凋亡检测试剂盒、caspase-3活性检测试剂盒检测H9C2细胞H/R后细胞增殖、凋亡的差异,同时检测ApoM和1-磷酸鞘氨醇受体1(sphingosine-1-phosphate receptor1,S1PR1)在H/R条件下的表达情况。建立体外过表达ApoM(apoM overexpression,ApoM-OE)的H9C2细胞,采用CCK-8检测心肌细胞存活率,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,蛋白质印迹法检测心肌细胞cleaved caspase-3、caspase-3表达情况,分析ApoM在H/R诱导的心肌细胞损伤中的可能作用。结果:在H/R处理后,H9C2心肌细胞活力逐渐降低,细胞凋亡率、caspase-3活性升高,证实大鼠H9C2心肌细胞H/R损伤模型构建成功;在H/R处理后,心肌细胞中ApoM和S1PR1mRNA表达水平显著上调(均P<0.01)。与对照组相比,ApoM-OE组心肌细胞存活率、LDH活性、SOD活性、及cleaved caspase-3表达水平均无明显变化(P>0.05)。结论:ApoM和S1PR1在H9C2细胞H/R损伤中表达水平升高,但ApoM对H/R诱导的H9C2细胞损伤无明显的保护作用。
- 程港丽姚霜施媛萍张俊罗光华郑璐
- 关键词：载脂蛋白M1-磷酸鞘氨醇
- 基于二维PCR技术的高危型人乳头瘤病毒及相关肿瘤抑制基因 p53和 RB1的分型检测方法
- 2024年
- 目的应用高通量二维PCR技术(2D-PCR), 建立一种单管一步法检测和鉴定宫颈细胞中16种高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)亚型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73、82)、p53(rs1042522)和RB1(rs3092905)基因型的方法。方法根据16种不同亚型HR-HPV、p53及RB1基因DNA序列设计特异性引物, 同时将待测靶基因p53及RB1基因作为评判标本取样及PCR扩增成功与否的内参基因。在3个荧光检测通道中, 采用相应标签标记不同亚型HR-HPV、p53及RB1的上游引物, 并构建完善的2D-PCR检测体系。应用该方法检测804份来源于常州市第一人民医院2022年12月至2023年8月妇科门诊的宫颈刷样本, 将检测结果与PCR-反向点杂交法、流式荧光杂交法、单重实时荧光定量PCR法分别进行一致性比较;同时采用Sanger测序法检测p53和RB1的基因型。采用Kappa检验评价2D-PCR法和其他方法间的一致性。结果 2D-PCR可通过FAM、HEX和Alexa Fluor568通道的特征性熔解谷对16种HR-HPV型别和p53、RB1的基因型进行准确区分和鉴定。2D-PCR法与PCR-反向点杂交法具有较高的一致性(Kappa=0.699), 与流式荧光杂交法具有更高的一致性(Kappa=0.793), 和单重荧光定量PCR法的一致性Kappa=0.880(95%CI 0.862~0.907)。以Sanger测序法为金标准, 2D-PCR法检测p53、RB1基因型的准确度为100%。p53 rs1042522 位点3种基因型(G/G型、G/C型和C/C型)的分布频率为32.09%(258/804)、49.88%(401/804)和18.03%(145/804), RB1 rs3092905位点检出基因型均为A/A型。结论成功开发了一种2D-PCR方法, 用于高危型HR-HPV型别鉴定与宫颈癌相关肿瘤抑制基因p53和RB1的基因分型。
- 张俊姚霜于洋喻妙梅罗光华
- 关键词：人乳头瘤病毒基因P53
- 载脂蛋白M调节Ana-1细胞胆固醇的摄取和外流被引量：2
- 2017年
- 目的探讨载脂蛋白M（apoM）在胆固醇的摄取和外流中的作用。方法以不同浓度NBD-胆固醇孵育Ana-1细胞。观察胆固醇浓度和孵育时间对Ana-1细胞摄取胆固醇的影响。利用腹腔巨噬细胞富集方法，采集不同基因型小鼠的腹腔巨噬细胞，观察胆固醇摄取的差异。10μmol／LNBD．胆固醇孵育Ana-1细胞4h后，分别用含或不含apoM的诱导外流液干预细胞。用荧光酶标仪检测荧光信号强度以反映胆固醇的摄取和外流。结果在体外，Ana-1细胞对NBD-胆固醇的摄取在2．5～10μmoL／L的浓度范围内具有浓度依赖性。巨噬细胞对胆固醇的摄取在6h达峰值，且达峰时间不受胆固醇孵育液浓度和巨噬细胞基因型的影响。6h达平台期后，apoM／SR—BI基因双敲除小鼠的腹腔巨噬细胞对胆固醇的摄取率明显低于SR—BI基因敲除小鼠和apoM基因敲除小鼠（t=6．8、13．66，P〈0．05）。在体外，apoM^＋HDL诱导组的胆固醇外流率明显大于apoM—HDL组（24．65％±0．93％对10．85％±0．64％，P=0．0003）。与单独apoM—HDL组相比，加入apoM重组蛋白可抑制apoM—HDL组的胆固醇外流。结论在体外，apoM参与了腹腔巨噬细胞对胆固醇的摄取。apoM能调节HDL介导的胆固醇外流。
- 郑凡罗光华姚霜于洋张俊张晓膺徐宁郑璐
- 关键词：载脂蛋白类高密度脂蛋白胆固醇B族I型清道夫受体
- 载脂蛋白M对肾癌细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用被引量：2
- 2021年
- 目的:研究人载脂蛋白M(apolipoprotein M,Apo M)对肾透明细胞癌细胞株(ACHN、769-P和786-O)增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用装载人Apo M基因的慢病毒和阴性对照组慢病毒分别感染肾癌细胞株,建立Apo M过表达组(Apo M-OE组)和阴性对照组(NC组)细胞模型。应用CCK-8增殖实验和克隆形成实验观察细胞增殖能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:Apo M过表达后,ACHN和769-P过表达组细胞在72h增殖能力显著降低(分别P<0.01,P<0.05);786-O细胞在48 h表现出明显差异(P<0.001)。克隆形成实验表明Apo M过表达后,3株细胞克隆形成能力明显减弱(分别P<0.001,P<0.01,P<0.01)。细胞划痕实验证实ACHN和769-P过表达组细胞在12 h时出现明显差异(分别P<0.05,P<0.001);786-O细胞在24h时迁移能力明显受抑(P<0.01)。细胞侵袭实验发现3株细胞过表达A po M后侵袭能力下降(分别P<0.001,P<0.001,P<0.01)。结论:Apo M过表达后,肾癌细胞增殖、迁移和侵袭能力显著减弱。
- 张艺博姚霜程港丽喻妙梅魏江罗光华郑璐
- 关键词：载脂蛋白M肾透明细胞癌增殖迁移
- ApoM^+ HDL和ApoM^- HDL的分离纯化及其与SR-BI的结合被引量：1
- 2016年
- 目的分离纯化载脂蛋白M阳性和阴性高密度脂蛋白(ApoM^+ HDL和poM^- HDL),检测其与清道夫受体B类Ⅰ型(SR-BI)的结合能力。方法采用腹水诱生的方法以重组人ApoM免疫小鼠制备小鼠抗人ApoM单克隆抗体。利用该抗体通过亲和层析的方法分离ApoM^+ HDL和poM^- HDL,采用二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量方法对其定量分析。通过免疫共沉淀方法检测ApoM^+ HDL和poM^- HDL与巨噬细胞株THP-1细胞表面表达的SR-BI的相互作用。结果经免疫、融合、筛选,获得4株特异性分泌ApoM单抗的杂交瘤细胞株,采用腹水诱生方案进行ApoM抗体的大量表达,获得浓度为1mg/ml的ApoM单抗,在1∶4000稀释后仍能在25kD处检测出目的蛋白。利用ApoM单抗进行亲和层析,分别收集流出液(poM^- HDL)、洗脱液(ApoM^+ HDL),洗脱液中能检测到ApoM,流出液中未检测到ApoM。经BCA蛋白定量poM^- HDL浓度为3.23mg/ml,ApoM^+ HDL浓度为0.34mg/ml。佛波酯处理THP-1细胞后表面SR-BI表达升高10%左右。免疫共沉淀结果显示,poM^- HDL、ApoM^+ HDL孵育组的总蛋白经SR-BI抗体沉淀的复合物中均能检测到SR-BI和HDL,重组人ApoM孵育组也能检测到SR-BI和ApoM。结论小鼠抗人ApoM单抗具有良好的灵敏度和特异度,poM^- HDL和ApoM^+ HDL两种蛋白成分和重组人ApoM均能与THP-1细胞表面SR-BI结合。
- 姚霜罗光华张晓膺张俊徐宁郑璐
- 关键词：载脂蛋白M
- 乳腺癌中ApoM差异表达及其对HER2阳性且HR阳性乳腺癌细胞株的生物学影响被引量：2
- 2021年
- 目的探讨载脂蛋白M(ApoM)在乳腺癌中差异表达及其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性且激素受体(HR)阳性的乳腺癌细胞株BT-474和ZR-75-1的生物学影响。方法检测55例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中ApoM表达水平。应用慢病毒载体构建ApoM过表达体系并转染HER2阳性且HR阳性的乳腺癌细胞株BT-474和ZR-75-1,并分为ApoM过表达(ApoM-OE)组和空病毒对照组。采用CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell小室实验分析ApoM对HER2阳性且HR阳性BT-474和ZR-75-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果癌组织中ApoM的mRNA水平较癌旁组织降低(P<0.05)。BT-474和ZR-75-1细胞中ApoM mRNA表达水平低(P<0.05或P<0.01)。转染后,BT-474和ZR-75-1细胞ApoM-OE组ApoM mRNA表达水平升高(P<0.01)。ZR-75-1细胞中ApoM-OE组在24、48、72 h细胞增殖率下降(P<0.05或P<0.01)。BT-474细胞中ApoM-OE组在24、48 h的划痕面积百分比升高(P<0.05或P<0.01)。BT-474和ZR-75-1细胞中ApoM-OE组侵袭细胞数下降(P<0.05)。结论 ApoM在乳腺癌组织中表达降低,过表达ApoM可以抑制HER2阳性且HR阳性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。
- 周影姚霜喻妙梅魏江方琦徐宁罗光华
- 关键词：载脂蛋白M乳腺癌
- 双重荧光实时PCR法鉴定SRBⅠ基因敲除小鼠
- 2015年
- 目的建立一种双重荧光实时PCR鉴定B族Ⅰ型清道夫受体(SRBⅠ)基因敲除小鼠的方法。方法提取小鼠尾尖DNA,应用自行设计的鉴定野生型和敲除型SRBⅠ基因的引物和探针,经PCR扩增后,在FAM通道及CY5通道判断小鼠基因型。同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果仅在FAM通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因野生型小鼠,仅在CY5通道出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因敲除型小鼠,在两个通道都出现典型S型扩增曲线的为SRBⅠ基因杂合型小鼠。结果与DNA测序法吻合,检测野生型和突变型的灵敏度均达4×101拷贝/μL。结论新方法简单、快速、准确,适用于分型SRBⅠ基因敲除小鼠。
- 潘丽莉郑璐张俊于洋姚霜喻妙梅冯悦华罗光华
- 关键词：CD36基因敲除
- 双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α mRNA表达水平被引量：2
- 2015年
- 目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参GAPDH mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法。方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成c DNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和GAPDH引物探针,经PCR扩增后,在FAM通道和CY5通道分别读取Ct值,同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果:双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α的灵敏度达4×101拷贝/μL,检测线性范围可达6个数量级,批内和批间重复性好。结论:新方法消除了目的基因与内参的加样误差,节约成本,快速准确,适用于TNF-αmRNA的定量检测。
- 姚霜郑璐于洋喻妙梅潘丽莉张俊冯悦华罗光华
- 关键词：肿瘤坏死因子-ΑGAPDH
- 双重实时荧光定量PCR检测人维生素D受体的方法学构建被引量：1
- 2016年
- 目的 建立单管检测人维生素D受体（VDR）及甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因的双重实时荧光定量聚合酶链反应（dual real-time PCR）的方法。方法 以GAPDH基因为内参,采用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物及Taq Man探针,进行PCR扩增检测VDR基因。将VDR及GAPDH扩增产物片段纯化后克隆构建成重组质粒,作为定量检测基因表达的标准品,并用于分析该方法的灵敏度和重复性。结果 PCR扩增产物经测序分析证实为VDR及GAPDH特异性片段;该方法检测VDR与GAPDH灵敏度达40拷贝/μL;线性范围为4.00×10~1~4.00×10~5拷贝/μL;决定系数R2分别为0.998、0.999;扩增效率E分别为96.10%、85.15%;批内变异系数（CV）分别为0.09%~1.21%、0.35%~0.88%;批间CV分别为0.17%~0.51%、0.51%~2.46%。结论 成功建立了单管检测人VDR及GAPDH的双重实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好、灵敏度高、可快速高通量检测VDR的相对表达量,有效缩短时间,减小实验误差。
- 喻妙梅于洋张俊姚霜潘丽莉罗光华
- 关键词：聚合酶链反应维生素D受体
- 脑卒中高危病人血清褪黑素水平测定的临床意义被引量：5
- 2016年
- 目的探讨脑卒中高危病人血清褪黑素水平测定的临床意义,分析其与血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP)、同型半胱氨酸(HCY)及颈动脉粥样硬化斑块的相关性。方法脑卒中高危病人33例及健康自愿者30名,测定其血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、LDL-C、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、CRP、HCY及褪黑素水平,脑卒中高危病人行颈动脉超声检查。结果与健康志愿者比较,脑卒中高危病人血清LDL-C、CRP、HCY水平升高,血清褪黑素水平降低,差异有统计学意义;脑卒中高危病人血清褪黑素水平与LDL-C、CRP、HCY水平呈负相关;33例脑卒中高危病人中无颈动脉斑块病人血清褪黑素水平高于存在颈动脉斑块者,两组比较差异有统计学意义。结论脑卒中高危病人血清褪黑素水平与LDL-C、CRP、HCY等动脉粥样硬化的危险因素及颈动脉粥样硬化斑块形成存在相关性。
- 杨玲姚霜姚玉华郑璐周瑞珏
- 关键词：脑卒中褪黑素总胆固醇三酰甘油高密度脂蛋白胆固醇
