郭伟
- 作品数：10 被引量：40H指数：4
- 供职机构：宁夏医科大学基础医学院更多>>
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- FoxO1经ATF6调控Hcy诱导的肝细胞凋亡被引量：4
- 2021年
- 目的探讨叉头状转录因子(FoxO1)在同型半胱氨酸(Hcy)诱导肝细胞凋亡中的作用及机制。方法随机选取10周龄雄性cbs^+/-与cbs+/+小鼠各8只饲以2%高蛋氨酸饮食12周,qRT-RCR和Western blot检测肝脏中FoxO1和ATF6的表达;100μmol·L^-1 Hcy处理肝细胞(HL-7702)48 h后,qRT-PCR和Western blot检测FoxO1和ATF6的表达改变;转染FoxO1和ATF6 siRNA后,Western blot检测ATF6、Bax和Bcl2蛋白表达,流式细胞术观察肝细胞凋亡情况;FoxO1过表达腺病毒与ATF6 siRNA共转至肝细胞,Western blot检测Bax和Bcl2蛋白表达。结果与cbs+/+组相比,cbs^+/-组肝脏中FoxO1和ATF6的表达水平显著增加(P<0.01);与Control组相比较,Hcy组FoxO1和ATF6的表达显著上调(P<0.01);与Hcy+siNC组相比,Hcy+siFoxO1组的ATF6和Bax表达水平明显降低,Bcl2的表达显著增加,肝细胞凋亡率显著降低(P<0.01);与Ad-FoxO1组相比,Ad-FoxO1+siATF6组Bax的表达显著降低,Bcl2的表达显著增加(P<0.01)。结论FoxO1介导的ATF6表达上调是Hcy致肝细胞凋亡进而引起肝损伤的重要机制之一。
- 王青青焦运吴欣妍海秀玲徐龙张辉郭伟郝银菊姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸FOXO1内质网应激肝细胞凋亡肝损伤
- MST1启动子区DNA低甲基化在ApoE^(-/-)小鼠肾损伤中的作用被引量：1
- 2016年
- 目的探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及其DNA甲基化在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠肾损伤中的作用及意义。方法实验动物分为2组:(1)Apo E-/-组(n=10):雄性Apo E-/-鼠饲以高蛋氨酸饮食;(2)对照组(n=10):雄性C57BL/6J鼠饲以高蛋氨酸饮食。喂养14周后,全自动生物化学分析仪测定小鼠血清肌酐和尿素氮水平;PAS染色及透射电子显微镜观察小鼠肾脏组织损伤情况;实时定量PCR及Western blot分别检测小鼠肾脏中MST1 mRNA和蛋白表达水平。巢式甲基化特异性PCR(n MS-PCR)检测小鼠肾脏MST1 DNA甲基化水平。结果与对照组比较,Apo E-/-组血清肌酐和尿素氮分别升高了1.1倍和1.6倍(P<0.01);PAS染色和透射电镜结果显示,Apo E-/-组较对照组肾脏明显损伤;Apo E-/-小鼠肾脏MST1表达分别与血清肌酐和尿素氮水平呈正相关(R2=0.7571,P=0.0012;R2=0.7342,P=0.0015);n MS-PCR结果显示,Apo E-/-组肾脏中MST1 DNA甲基化水平较对照组显著降低(P<0.01)。结论 MST1表达上调可能在Apo E-/-小鼠肾损伤中发挥重要作用,而MST1启动子区DNA低甲基化改变可能是MST1表达上调的重要机制。
- 卢冠军马胜超和杨杨徐灵博毛彩艳郭伟张辉王艳华田珏杨晓玲姜怡邓
- 关键词：肾损伤载脂蛋白EAPOE-/-小鼠
- EC-SOD在同型半胱氨酸致单核细胞源性巨噬细胞氧化应激中的作用研究被引量：2
- 2017年
- 目的探讨细胞外超氧化物岐化酶(EC-SOD)在同型半胱氨酸(Hcy)致巨噬细胞氧化应激中的作用及机制。方法将THP-1单核细胞用佛波酯刺激48 h后演变成巨噬细胞,用0、50、100、200、500μmol/L Hcy作用细胞72 h,并加设叶酸+维生素B12(Vit B12)干预组(100μmol/L Hcy+30μmol/L叶酸+30μmol/L Vit B12)。微板法检测氧化应激指标(H_2O_2、O_2^-、OH-)的变化;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞中EC-SOD的mRNA表达水平;Western blot检测巨噬细胞中EC-SOD的蛋白表达水平;EC-SOD测定试剂盒检测EC-SOD活性。分别构建EC-SOD重组质粒和干扰质粒转染细胞,检测EC-SOD的mRNA及蛋白的表达水平以及超氧阴离子的表达。结果与对照组相比,100、200、500μmol/L Hcy组H_2O_2、OH-活性显著增高(P<0.01),EC-SOD mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01)。与对照组相比,100、200、500μmol/L Hcy组EC-SOD活性分别下降了13.92%、8.62%、10.32%(P<0.05,P<0.01)。与100μmol/L Hcy组相比,叶酸+Vit B12干预组EC-SOD mRNA的表达升高了47%。分别转染EC-SOD重组质粒和干扰质粒后,与100μmol/L Hcy组相比,EC-SOD重组组O_2^-含量降低了63.89%,干扰片段-596组O_2^-含量则增加了33.59%(P<0.05,P<0.01)。结论 EC-SOD参与了Hcy导致的单核细胞源性巨噬细胞的氧化应激。在抑制Hcy诱导动脉粥样硬化的过程中,EC-SOD可能发挥着重要的作用。
- 和杨杨马胜超刘现梅孔繁琪郭伟王楠贾月霞杨晓明金少举姜怡邓曹军
- 关键词：同型半胱氨酸巨噬细胞氧化应激
- 血清SAM/SAH在Hcy引起动脉粥样硬化基因组DNA甲基化中的作用被引量：8
- 2017年
- 目的探讨血清S-腺苷甲硫氨酸(SAM)/S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)比值在同型半胱氨酸(Hcy)致载脂蛋白E基因敲除(Apo E―/―)小鼠血管动脉粥样硬化(As)B1重复序列DNA甲基化改变中的作用。方法 36只饲养4周龄Apo E―/―小鼠,随机分为三组:模型对照组、高蛋氨酸组、叶酸+Vit B12干预组,每组12只,分别给予不同饮食;另取健康4周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)12只作为正常对照组,饲以普通饮食。饲养15周后,HE染色观察血管内动脉斑块的形成,高效液相色谱检测血清中Hcy、SAM、SAH的水平改变,n MS-PCR检测各组小鼠动脉粥样硬化斑块中Bl重复序列DNA甲基化改变。结果高蛋氨酸组血清Hcy与正常对照组相比升高约2.39倍(P<0.01),HE染色可见高蛋氨酸组中有动脉斑块形成;与正常对照组相比,模型对照组、高蛋氨酸组SAM/SAH增加了1.68倍和2.75倍(P<0.01);高蛋氨酸组B1重复序列DNA甲基化水平降低11.8%(P<0.05),且与SAM/SAH比值呈明显负相关(r=-0.3638,P=0.0210)。结论 ApoE―/―小鼠中B1重复序列发生DNA低甲基化改变,且与SAM/SAH呈负相关,提示血清SAM/SAH可作为一个判断血管As的生物学指标。
- 张辉郭伟高婷婷马燕琼惠淑宁马胜超杨晓玲蒋袁絮田珏姜怡邓
- 关键词：动脉粥样硬化DNA甲基化
- 脂肪酸结合蛋白4在同型半胱氨酸致肝细胞脂质沉积中的作用被引量：1
- 2020年
- 目的探讨脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致肝细胞脂质沉积的促进作用。方法胱硫醚β-合成酶(cystathionineβ-synthase,CBS)基因缺陷杂合体(CBS+/-)小鼠CBS基因正常(CBS+/+)小鼠给予高蛋氨酸饮食12周,设CBS+/+Met组(CBS+/+小鼠高蛋氨酸饮食)和CBS+/-Met组(CBS+/-小鼠高蛋氨酸饮食);体外培养人正常肝细胞HL-7702并给予100μmol·L^-1Hcy干预,FABP4过表达腺病毒转染肝细胞。免疫荧光双染观察小鼠肝脏组织中脂质分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein,ADFP)表达;实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot分别检测小鼠肝脏和人肝细胞HL-7702中FABP4的表达;肝细胞HL-7702油红O染色观察肝细胞内脂质状况。结果 CBS+/+Met和CBS+/-Met组小鼠的肝脏组织中肝细胞表面标记物Cytokeratin18呈现绿色荧光,与CBS+/+Met组相比,CBS+/-Met组小鼠肝脏中ADFP表达明显增多(P<0.01);肝脏中FABP4的mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.05)表达均升高。Hcy干预肝细胞HL-7702后胞质中红色脂质颗粒明显增多(P<0.05),FABP4的表达趋势与动物水平一致,均明显升高(P<0.01);在有或无Hcy干预肝细胞的情况下转染FABP4过表达腺病毒后肝细胞胞质内红色脂质颗粒均明显增多(P均<0.01)。结论 FABP4的上调可能促进Hcy诱导的肝细胞脂质沉积。
- 邓梅李桂忠李桂忠张辉谢琳丁宁张辉孙卓成郭伟张鸣号杨晓玲姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸肝细胞脂质沉积
- PSMD10在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制研究被引量：3
- 2021年
- 目的探讨26S蛋白酶体非ATP酶调节亚基10(PSMD10)在同型半胱氨酸激活肝细胞自噬促进肝脏损伤中的作用机制。方法选取cbs^(+/+)和cbs^(+/-)小鼠各8只,2%高蛋氨酸饮食饲养8周。全自动生化仪检测血清中AST和ALT水平;Western blot检测肝脏LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA表达;100μmol Hcy干预肝细胞(HL-7702);ELISA检测培养液上清中AST和ALT水平;Western blot检测LC3B、p62和PSMD10蛋白表达;qRT-PCR检测PSMD10 mRNA的表达;转染PSMD10 siRNA或过表达腺病毒,Western blot检测LC3B和p62的表达;ELISA检测AST和ALT水平。结果与cbs^(+/+)组比较,cbs^(+/-)组血清AST和ALT的水平增加(P<0.01),自噬水平增加(P<0.01),PSMD10表达水平增加(P<0.05);细胞水平与动物水平结果一致;与Hcy+siNC组相比,LC3Ⅱ/Ⅰ的比值降低(P<0.01),p62的蛋白表达增加(P<0.01),AST和ALT的浓度降低(P<0.01);与ad-GFP组相比,ad-PSMD10组LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.01),p62的蛋白表达降低(P<0.01),AST和ALT的浓度增加(P<0.01)。结论Hcy通过上调PSMD10的表达导致肝细胞过度自噬,造成肝脏损伤。
- 吴欣妍焦运王青青徐龙张辉郭伟杨安宁杨安宁郝银菊
- 关键词：同型半胱氨酸肝细胞自噬ASTALT
- miR-30a-5p启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致肝损伤中的作用被引量：9
- 2020年
- 目的:探讨微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)启动子区DNA甲基化在肝损伤中的作用。方法:随机选取4周龄胱硫醚β-合成酶(CBS)基因正常(CBS+/+)小鼠(n=12)及单基因敲除(CBS+/-)小鼠(n=12),均给予高蛋氨酸饮食8周。HL-7702细胞体外常规培养,分为对照(control)组、同型半胱氨酸(Hcy)组和Hcy+5-氮杂胞苷(AZC)组。全自动生化分析仪检测小鼠血清Hcy、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;微板法测定肝细胞ALT和AST水平;小鼠肝脏石蜡切片行HE染色观察肝脏损伤情况;细胞活力染色检测肝细胞活力;RT-qPCR法检测小鼠肝脏组织和肝细胞中miR-30a-5p的表达;Pearson相关性分析肝脏miR-30a-5p表达与血清ALT和AST水平的相关性;巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测小鼠肝脏组织以及肝细胞中miR-30a-5p启动子区DNA甲基化水平的变化。结果:与CBS+/+对照组相比,CBS+/-组小鼠血清的Hcy、ALT和AST水平显著升高(P<0.05);HE染色显示肝细胞肿胀,可见核碎裂、溶解;肝脏miR-30a-5p表达明显降低(P<0.01);小鼠肝脏组织中miR-30a-5p的表达与血清ALT和AST的水平呈负相关(r2=0.4557,P=0.0003;r2=0.4626,P=0.0003);miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01)。在细胞水平,与control组相比,Hcy组的ALT和AST水平升高(P<0.05,P<0.01),细胞活力显著降低,肝细胞miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平升高(P<0.01),而使用AZC后miR-30a-5p启动子区DNA的甲基化水平降低(P<0.05),miR-30a-5p的表达上调(P<0.05)。结论:miR-30a-5p启动子区DNA高甲基化可能在肝损伤中发挥重要作用。
- 孙磊郭伟马鹏俊马胜超马胜超张鸣号郝银菊张鸣号
- 关键词：DNA甲基化胱硫醚Β-合成酶肝脏损伤同型半胱氨酸
- 丝/苏氨酸蛋白激酶DNA甲基化在同型半胱氨酸致血管内皮细胞凋亡中的作用被引量：6
- 2019年
- 目的探讨丝/苏氨酸蛋白激酶(MST1)DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致血管内皮细胞凋亡中的作用。方法培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),用100μmol/L Hcy干预48 h。MTT法检测HUVECs的存活率;Hoechst染色观察HUVECs的凋亡情况;Western blot检测MST1、Bcl-2、BAX和DNMT1的蛋白表达;巢式降落式PCR(nMS-PCR)法检测MST1启动子区DNA甲基化改变。结果与正常对照组相比,Hcy处理后HUVECs的存活率明显降低(P <0.01);Hoechst 33258染色后Hcy组可见核固缩、凋亡小体等典型的凋亡形态学特征;Western blot检测BAX的蛋白表达增加了1.23倍,而Bcl-2的蛋白表达及Bcl-2/BAX明显下调(P <0.05);MST1的蛋白表达升高(P <0.01),与Bcl-2/BAX呈负相关(r^2=0.844 6,P <0.001);同时,MST1 DNA甲基化水平及DNMT1蛋白表达下降(P <0.01)。结论 MST1表达增高可能在Hcy致HUVECs凋亡中发挥重要作用,而DNMT1表达下调引起的MST1启动子区DNA低甲基化可能是其表达增高的重要机制。
- 车双双徐华郭伟郭伟张鸣号杨晓玲张鸣号刘志宏
- 关键词：同型半胱氨酸DNA甲基化凋亡
- 脂肪酸结合蛋白4在Hcy致泡沫细胞胆固醇聚积中的作用被引量：10
- 2016年
- 目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)致泡沫细胞胆固醇聚积中的作用和意义。方法体外复制THP-1单核细胞/泡沫细胞模型,油红O染色验证模型复制是否成功,给予100μmol/L Hcy处理细胞24 h后,实时定量PCR和Western blot检测泡沫细胞中FABP4 mRNA和蛋白的表达;体外构建FABP4过表达载体,双酶切法鉴定;转染FABP4至泡沫细胞,荧光倒置显微镜观察转染效率;胆固醇检测试剂盒检测细胞内胆固醇聚积情况。结果油红O染色显示泡沫细胞质内充满了大量红染脂质颗粒,胞核呈蓝色,且100μmol/L Hcy处理后细胞内胆固醇含量升高了2.4倍(P<0.01);实时定量PCR结果显示100μmol/L Hcy处理后泡沫细胞中FABP4 mRNA表达上调(P<0.01);Western blot检测结果显示FABP4的蛋白表达与其mRNA表达变化一致(P<0.01)。FABP4过表达载体转染细胞后,可见大量绿色荧光蛋白表达;重组质粒组泡沫细胞中FABP4的表达水平明显升高(P<0.01),细胞内胆固醇含量升高1.9倍,差异具有显著性(P<0.01)。结论 FABP4表达上调可能是Hcy致泡沫细胞胆固醇聚积的重要机制之一。
- 郭伟马胜超张辉李淑强高婷婷和杨杨杨晓玲徐华杨晓明卢冠军贾月霞曹军姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸泡沫细胞
- ASPP2DNA甲基化在老年大鼠肾脏基底膜增厚中的作用被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)DNA甲基化在老年大鼠肾基脏底膜增厚中的作用和机制。方法:以6月龄大鼠为成年组,18月龄大鼠为老年组,应用过碘酸希夫(PAS)染色,光镜下观察各组大鼠肾脏基底膜改变,qRT-PCR、Western-blot分别检测各组大鼠ASPP2 mRNA及蛋白表达,n MS-PCR法检测ASPP2甲基化水平,qRT-PCR检测DNMT1 mRNA表达改变。结果 :老年大鼠较成年大鼠肾脏基底膜明显增厚,ASPP2 mRNA及蛋白的表达在老年组大鼠中显著增高(P<0.01);与成年组相比,老年组ASPP2 DNA甲基化水平显著下降(P<0.01),且DNMT1 mRNA及蛋白表达也呈下降改变(P<0.01)。结论:ASPP2 DNA甲基化是促进老年大鼠肾脏基底膜增厚的重要机制,DNMT1参与了其调控。
- 张辉高婷婷马燕琼郭伟杨晓玲金少举杨晓明张鸣号姜怡邓
- 关键词：DNA甲基化老年大鼠肾脏
