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一种miRNA转基因小鼠模型的构建方法: 本发明提供了一种miRNA转基因小鼠模型的构建方法，其是利用转基因技术建立了在心肌细胞内过表达miR-27b的转基因小鼠，对转基因小鼠进行系统的表型分析发现该小鼠可出现心肌肥厚和心脏功能受损，基本的病理变化与人类心脏疾病...; 杨晓王剑侯宁孙强张彦

单染色体靶向富集方法的建立: 2016年; 靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍体细胞CCC-HEL-1建立了一种单染色体靶向富集方法。具体步骤如下:(1)首先将人正常核型二倍体细胞同步化到G2/M期,制备染色体悬液;然后流式分选出21号单染色体。(2)采用多重退火环形扩增技术(MALBAC)对21号染色体DNA进行扩增;用扩增的DNA产物构建文库。(3)利用体外转录合成、生物素标记的RNA探针与文库进行液相杂交,捕获并验证捕获效率。荧光定量PCR检测结果证明,特定的21号染色体呈上百倍的富集,而靶标文库则富集了近60倍。结果提示,特异单染色体靶向富集方法成功建立。该法不仅可实现任一单染色体的靶向富集,用于单条染色体功能组学研究,而且还可能用于查找特定疾病相关的染色体异常(如DNA突变、异位、重复及倒置等),具有一定的实用意义。; 谢德健张田甜师明磊张彦沈文龙叶丙雨李平何超张香媛赵志虎; 关键词：高通量测序单染色体

人Fkbp19的多克隆抗体的制备: 2010年; 目的:制备针对人Fkbp19的多克隆抗体,为进一步研究Fkbp19基因的功能奠定基础。方法:利用鉴定正确的重组原核表达载体pET21a-Fkbp19,在大肠杆菌BL21-DE3中诱导表达,应用Ni-NTA亲和层析法获得纯度较高的原核表达蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot及免疫荧光的方法检测抗体对乳腺癌细胞中内源性Fkbp19蛋白的识别能力。结果:成功地在大肠杆菌中实现了His-Fkbp19融合蛋白的表达,经纯化后免疫家兔得到了高滴度的多克隆抗体,该抗体可以用Western blot的方法检测内源性Fkbp19蛋白。结论:所制备的多克隆抗体可以用于Fkbp19的Western blot检测。; 范开吉张彦刘迺发孙强杨晓; 关键词：原核表达多克隆抗体

肽核酸钳制PCR技术在结肠癌K-Ras基因突变检测中的优化被引量：2: 2012年; 目的优化建立一种敏感、简便、稳定地检测结肠癌患者K-Ras基因突变的方法。方法构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型及突变型质粒,通过优化PCR及肽核酸与特异性引物的浓度关系,达到有效模板浓度低的样品K-Ras基因突变的检测。结果成功构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型和突变型质粒。肽核酸钳制PCR条件优化包括:(1)最佳复性温度为58℃和60℃;(2)有效模板浓度为10-6pg/μl;(3)引物浓度与肽核酸浓度的最佳比例为20∶1。在K-Ras突变型质粒与野生型质粒浓度比为1∶100时即可检测到突变。结论肽核酸钳制PCR技术较传统的测序方法更为敏感,可以应用于有效模板浓度低的样品,为结肠癌个体化治疗前相关基因检测的有效方法。; 刘晓静徐建明宋三泰师明磊张彦王洋; 关键词：肽核酸结肠癌 K-RAS基因西妥昔单抗

抑制miR-27b表达的化合物、含有该化合物的药物及应用: 本发明涉及特异性抑制miR-27b表达的化合物及含有该化合物的药物，所述化合物在体内生成的功能性分子的核苷酸序列为：5’-GCAGAACUUAGCCACUGUGAA-3’。在体内抑制miR-27b的表达能缓解由压力性负荷...; 杨晓王剑侯宁孙强张彦; 文献传递

受TGF-β调节的mir-X促进成肌分化: miRNA 是一类内源性长度22nt 左右的小 RNA 分子,其通过特异性识别 mRNA 的3’UTR 抑制靶基因的翻译或促进靶基因 mRNA 的降解,从而在转录后水平调节基因表达。近年越来越多的 miRNA 被发现,同...; 张彦孙强杨光陈晓萍张应爱曹国军王剑孙彦洵张鹏范明邵宁生杨晓; 文献传递

CLIP相关技术的研究进展被引量：1: 2013年; 在真核生物基因表达的转录后调节中,RNA结合蛋白(RBP)起着关键作用,很多RBP的异常与人类疾病的发生密切相关。自2000年的RNA免疫沉淀和芯片分析方法(RNA immunoprecipitation with differential display or microarray analysis,RIP-ChIP)出现以来,人们开始就RBP与RNA相互作用进行了系统而广泛的研究。经过改良和发展,基于体内实时紫外交联免疫沉淀法(ultraviolet crosslinking and immunoprecipitation,CLIP)、交联免疫沉淀cDNA文库高通量测序法(high-throughput sequencing of CLIP cDNA library,HITS-CLIP)、光催化核糖核苷增强交联和免疫沉淀法(photoactivatable-ribonucleoside-enhanced crosslinking and immunprecipitation,PAR-CLIP)以及提高个别核苷酸分辨率交联和免疫共沉淀法(individual nucleotide resolution CLIP,iCLIP)等RIP-ChIP衍生方法相继产生,使用这些方法,可以解析RBP的RNA识别特异性,而且通过与高通量测序技术结合,可以实现转录组尺度的RBP的靶序列的鉴定,分辨率也得到极大提高。该文就RNA与蛋白的相互作用的基本原理及其研究进展、相关技术存在的问题以及发展趋势进行简要综述。; 邢伶越张彦黄静李平王洋师明磊赵志虎; 关键词：CLIP 免疫沉淀法

靶向Smad4的miRNA在皮肤创伤愈合中的作用: TGF-beta信号通路在皮肤创伤愈合过程中发挥重要作用,但其具体作用机制尚不清楚。SMAD4是TGF-beta信号通路的重要介导分子,miRNA通过与靶基因的3’UTR结合抑制翻译或者将其降解来调控靶基因的表达,本实验...; 孙耀兰王友亮王丽娟郭水龙张彦杨晓; 关键词：SMAD4 MIRNA 皮肤创伤愈合; 文献传递

靶向Smad4的miRNA筛选及miR-199a功能研究: 转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)/Smad信号通路在多种组织器官发育和稳态维持过程中发挥重要的生物学功能,研究表明这个信号通路的细胞内中心介导者Smad4的异常表...; 张彦; 关键词：生物遗传学转化生长因子-Β 信号通路靶向基因; 文献传递

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张彦