师明磊
- 作品数：39 被引量：61H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- CD20生物学功能的研究进展被引量：8
- 2009年
- B细胞抗原受体(BCR)信号传导起始于持续的钙离子向细胞内流动,这种钙离子的内流对于B细胞的生长、分化、活化是必需的。CD20是B细胞膜上特有的4次跨膜蛋白,参与了BCR活化的钙离子流入。最近的研究提供了直接的证据,证明CD20形成的同源寡聚体是四聚体。CD20单抗诱导的钙信号也得到研究,研究表明只有Ⅰ型CD20单抗能引起钙离子内流。CD20还通过钙池调控钙离子进入(SOCE)参与了细胞信号传导。我们就CD20形成同源寡聚体、与BCR的相互作用、参与调节B淋巴细胞钙离子的流动等进行简要综述。
- 张久丁张冠一师明磊胡显文
- 关键词：CD20钙信号
- 利用翻译偶联实现广谱抗病毒蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1
- 2015年
- 目的以具有广泛助溶活性的小泛素相关修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)为辅助蛋白,利用翻译偶联,构建一种新型非融合可溶原核表达载体,实现广谱抗病毒蛋白RA在大肠杆菌中的非融合可溶表达。方法以PCR方法从酵母基因组中克隆SUMO蛋白基因smt3并进行定点突变,去除其中的EcoRⅠ酶切位点,获得同义突变体m SUMO。通过翻译偶联Linker序列的设计、合成,构建以m SUMO蛋白为辅助蛋白的翻译偶联表达载体p TIG-m SUMO。PCR扩增获得带有相应酶切位点的广谱抗病毒蛋白RA的基因,将其克隆至p TIG-m SUMO中,获得表达载体p TIG-m SUMO/RA,实现RA在大肠杆菌中的非融合可溶性表达。结果 IPTG诱导蛋白表达以后,SDSPAGE和Western印迹检测证实,目的蛋白RA的表达量明显增加,且可溶比例约占50%。结论以优化后的SUMO为辅助蛋白,成功构建了一种非融合的可溶原核表达载体p TIG-m SUMO,实现了RA蛋白在大肠杆菌中的高效非融合可溶表达,既提高了表达水平,也提高了可溶性。p TIG-m SUMO作为一种可溶的非融合表达载体,在实现外源蛋白的高效可溶表达方面,很可能具有一定的普遍性。
- 邢伶越谢德健叶丙雨张章李平沈文龙师明磊张彦赵志虎
- 关键词：可溶性非融合
- 一种HCV蛋白酶抑制剂筛选模型
- 本发明公开了一种HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。本发明提供了融合蛋白(a)或(b)：(a)自N端至C端依次含E173N片段、特异多肽片段和E173C片段；(b)自N端至C端依次含E173N片段、特异多肽片段、E173C片段、...
- 赵志虎师明磊陈娜闫兴王洋张彦
- 文献传递
- HCV NS3/4A蛋白酶胞内荧光检测方法的建立
- 2012年
- 目的:建立丙型肝炎病毒NS3/4A丝氨酸蛋白酶胞内荧光检测方法。方法:利用EGFP分子内合适位点可以插入一定长度外源片段而不影响荧光性能的特性,构建EGFP分子内插入NS3/4A蛋白酶识别序列NS5AB的EGFP-5AB重组分子。将EGFP-5AB与NS3/4A蛋白酶共表达,若短肽链被切断,则EGFP的两个部分解离,荧光消失,从而可以监测HCV NS3/4A蛋白酶的存在。通过将NS5AB插入三种不同位点,寻找最合适的插入位点;将EGFP-5AB转染进入不同宿主细胞,验证其在不同细胞的表达情况并选择最佳宿主细胞。结果:确定EGFP 173-174氨基酸位点是合适的插入位点;确定CHO-K1为理想的荧光检测系统宿主细胞;在构建的细胞模型中,能够检测到EGFP被切割后的条带,但检测不到荧光信号,说明EGFP-5AB蛋白被有效切割,该方法可以检测到NS3/4A丝氨酸蛋白酶的存在。结论:成功构建了一种在哺乳动物细胞中检测NS3/4A蛋白酶切割活性的荧光检测方法。
- 闫兴师明磊陈娜王洋张彦王政李晓晨赵志虎
- 关键词：HCVEGFP荧光检测
- 在鸡胚绒毛尿囊膜上评价血管生成技术的应用与优化被引量：5
- 2008年
- 目的:用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)评价血管生成并进行优化,为抗血管生成药物筛选提供良好的体内实验模型。方法:对CAM技术的各个环节,包括合适日龄胚蛋选择、蛋壳开窗及暴露CAM的方法、载体选择、结果分析等进行了实验对比。结果:采取气室开窗,以甲基纤维素为药物载体,促进血管生成的药物在孵化11d以后、抑制血管生成的药物在孵化7～9d给药,鸡胚存活率为85.8%,生长状况良好,被检测药物有明显的抑制或促进血管生成的效应。结论:通过优化建立了操作简便、鸡胚存活率高的在CAM上评价血管生成的技术;应用CAM技术评价了若干影响血管生成的因子。
- 师明磊段海峰胥照平胡显文陈惠鹏
- 关键词：鸡胚绒毛尿囊膜血管生成抗血管生成
- 一种多基因串联共表达载体的构建被引量：11
- 2011年
- 为了构建一种可用于串联共表达多个基因的原核表达载体,通过PCR引入点突变,对商业载体pET-22b的酶切位点进行定向改造,设计独特的XbaⅠ/SpeⅠ模块。获得改造成功的载体pET-m22b,测序结果显示启动子、核糖体结合位点、多克隆位点及终止子均位于XbaⅠ和SpeⅠ两酶切位点间。选取不同来源的基因进行串联组合及表达鉴定,四个基因成功组合于同一载体中,表达效果良好,各基因表达效率不受明显影响。研究构建的载体pET-m22b,使多基因的共表达更加便捷,为蛋白复合物的表达与纯化、代谢通路的异源重建及其优化等研究奠定了良好的基础。
- 何彰华王洋赵珺刘晓杰张丽华王东师明磊黄芬尤平赵志虎
- 关键词：共表达串联组合
- 超声处理导致交联DNA序列特异性断裂被引量：1
- 2011年
- 目的:研究在交联状态下超声方法处理DNA是否导致DNA随机断裂。方法:通过建立一种新的Clone-Sequencing筛选技术,利用NCBI等相关网站,结合Vector-NTI等软件分析得到不同断裂位点的核苷酸序列,利用SPSS 18.0软件,对不同断裂位点核苷酸序列的分布进行统计学分析。结果:利用Clone-Sequencing技术得到216个来源于不同染色体位置的克隆片段,通过对其正义链和反义链的5'-DNA断裂末端的分析,得到432个超声断裂位点的核苷酸序列信息。对断裂位点核苷酸序列进行统计分析发现,超声处理后,交联DNA的断裂位点并不像过去认为的完全随机分布,而是存在明显的偏性,即对于所有16种不同的二核苷酸组合,超声处理导致交联DNA更易在5'-ApN-3'寡核苷酸中间的磷酸二酯键处断裂,且其相对断裂频率呈现d(ApN)>>d(GpN)>d(CpN)>d(TpN)的趋势。结论:传统的超声方法处理,交联DNA断裂位点并不是完全随机分布,而是存在着明显的序列偏好性,这一新发现提示,对于目前广泛使用的、涉及交联DNA超声处理的ChIP-Chip或ChIP-Seq等高通量及其衍生技术结果的统计分析,需要引入更加合理有效的分析策略。
- 王东师明磊王洋赵志虎
- 关键词：超声
- 单染色体靶向富集方法的建立
- 2016年
- 靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍体细胞CCC-HEL-1建立了一种单染色体靶向富集方法。具体步骤如下:(1)首先将人正常核型二倍体细胞同步化到G2/M期,制备染色体悬液;然后流式分选出21号单染色体。(2)采用多重退火环形扩增技术(MALBAC)对21号染色体DNA进行扩增;用扩增的DNA产物构建文库。(3)利用体外转录合成、生物素标记的RNA探针与文库进行液相杂交,捕获并验证捕获效率。荧光定量PCR检测结果证明,特定的21号染色体呈上百倍的富集,而靶标文库则富集了近60倍。结果提示,特异单染色体靶向富集方法成功建立。该法不仅可实现任一单染色体的靶向富集,用于单条染色体功能组学研究,而且还可能用于查找特定疾病相关的染色体异常(如DNA突变、异位、重复及倒置等),具有一定的实用意义。
- 谢德健张田甜师明磊张彦沈文龙叶丙雨李平何超张香媛赵志虎
- 关键词：高通量测序单染色体
- 基于荧光强度快速判断蛋白可溶性方法的建立
- 2012年
- 目的:建立一种通过观察荧光强度,快速、直观地判断蛋白可溶性的方法。方法:选择抗辐射蛋白CBL502-AA及其突变体CBL502-ΔAA′作为目的蛋白,增强型绿色荧光蛋白作为报告分子,分别构建融合蛋白表达载体;通过SDS-PAGE和荧光观察两种手段检测和比较融合蛋白的可溶性。结果:荧光观察融合蛋白的可溶性与SDS-PAGE检测结果一致。结论:建立了一种基于荧光强度,快速、简单、直观的比较蛋白可溶性的方法。
- 肖丽霞叶丙雨王洋师明磊何彰华张乐之赵玉军赵志虎
- 关键词：荧光绿色荧光蛋白
- 含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒设计、合成及高效表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的:建立一种简便、快捷的基因从头设计、优化与合成策略,进行含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒全合成并构建高效表达载体。方法:以免费软件GeneDesign 3.0为主要平台,同时结合Tandem Repeats Finder、UNAFold等不同生物信息学软件,对含有DnaE基因、合适酶切位点的表达盒进行设计与分段合成;合成寡核苷酸片段通过重叠PCR进行组装与克隆。结果:利用建立的设计流程,合成了大小为44～64 nt的14段寡核苷酸片段,通过重叠PCR,实现了14段寡核苷酸片段的一次性组装,经过克隆、酶切鉴定、序列分析得到了序列完全正确的表达载体。结论:建立了一套有效的、基于免费软件的基因从头设计与合成的策略,构建了可以用于环肽小分子文库表达与筛选的表达载体。
- 赵珺王洋师明磊王东田靖耿排力赵志虎
- 关键词：生物信息学
