叶丙雨
- 作品数：13 被引量：15H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种构建Hi-C高通量测序文库的方法
- 本发明公开了构建Hi‑C高通量测序文库的方法。本发明所提供的方法，具体可为方法一，依次包括如下步骤：(1)取解交联后的DNA，进行纯化和富集；(2)进行转座反应；(3)进行PCR扩增，获得文库。本发明所提供的方法，具体可...
- 赵志虎沈文龙叶丙雨何超
- 应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体被引量：1
- 2011年
- 目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a(+)中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a(+);构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a(+),且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a(+),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。
- 何彰华师明磊王洋叶丙雨黄芬张彦范秋声王东肖丽霞张乐之李德彬闫兴赵志虎
- 关键词：RED重组质粒红霉素
- 预防和治疗辐射损伤的蛋白CAA′及其应用
- 本发明公开了一种预防和治疗辐射损伤的蛋白CAA′及其应用。本发明提供了一种环化蛋白(命名为蛋白CAA′)，是如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：(a1)序列7自N末端第11至305位氨基酸残基组成的环化蛋白；(a...
- 赵志虎叶丙雨王洋沈文龙师明磊张彦何彰华王政
- 文献传递
- EPL和PTS在生物合成主链环肽方面的应用研究进展
- 2016年
- 内含肽作为宿主蛋白的组成成分,不仅可将自身从宿主蛋白中剪切,而且还可催化外显肽的连接。内含肽广泛分布于生物界的三大领域及病毒蛋白中。蛋白质剪接是由内含肽介导的一种翻译后自催化加工过程,整个过程不需要酶或辅因子的参与。蛋白质剪接包括四步分子内的反应及内含肽和外显肽中部分发挥关键催化功能的氨基酸残基。表达蛋白质连接(EPL)和蛋白质反式剪接(PTS)技术是借助内含肽及蛋白质剪接发展起来的。该文主要就这两项技术在生物合成主链环肽文库方面的应用领域及未来的应用前景进行了综述。
- 叶丙雨赵志虎
- 关键词：蛋白质剪接PTS
- 环式增强型绿色荧光蛋白热稳定性及Npu DnaE内含肽高反式剪接效率研究被引量：1
- 2012年
- 目的在体内借助Npu DnaE内含肽(intein)的高效反式剪接作用获得环式增强型绿色荧光蛋白(Cyc-EGFP)。方法对构建的融合表达载体pET/Npu DnaE intein/EGFP-28a(+)进行诱导、表达,之后利用亲和纯化获得高纯度的Cyc-EGFP和增强型绿色荧光蛋白(EGFP),并对二者的荧光强度和热稳定性进行比较。结果 NpuDnaE内含肽环化效率可达98%以上,明显优于Ssp DnaE内含肽,环化后的EGFP热稳定性提高了4～5℃。结论 Cyc-EGFP这一明显优势使蛋白环化在蛋白质工程等领域具有重要的应用价值。
- 叶丙雨王政李德彬张乐之肖丽霞张部昌曹诚赵志虎
- 关键词：反式剪接热稳定性
- 利用翻译偶联实现广谱抗病毒蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1
- 2015年
- 目的以具有广泛助溶活性的小泛素相关修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)为辅助蛋白,利用翻译偶联,构建一种新型非融合可溶原核表达载体,实现广谱抗病毒蛋白RA在大肠杆菌中的非融合可溶表达。方法以PCR方法从酵母基因组中克隆SUMO蛋白基因smt3并进行定点突变,去除其中的EcoRⅠ酶切位点,获得同义突变体m SUMO。通过翻译偶联Linker序列的设计、合成,构建以m SUMO蛋白为辅助蛋白的翻译偶联表达载体p TIG-m SUMO。PCR扩增获得带有相应酶切位点的广谱抗病毒蛋白RA的基因,将其克隆至p TIG-m SUMO中,获得表达载体p TIG-m SUMO/RA,实现RA在大肠杆菌中的非融合可溶性表达。结果 IPTG诱导蛋白表达以后,SDSPAGE和Western印迹检测证实,目的蛋白RA的表达量明显增加,且可溶比例约占50%。结论以优化后的SUMO为辅助蛋白,成功构建了一种非融合的可溶原核表达载体p TIG-m SUMO,实现了RA蛋白在大肠杆菌中的高效非融合可溶表达,既提高了表达水平,也提高了可溶性。p TIG-m SUMO作为一种可溶的非融合表达载体,在实现外源蛋白的高效可溶表达方面,很可能具有一定的普遍性。
- 邢伶越谢德健叶丙雨张章李平沈文龙师明磊张彦赵志虎
- 关键词：可溶性非融合
- 单染色体靶向富集方法的建立
- 2016年
- 靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍体细胞CCC-HEL-1建立了一种单染色体靶向富集方法。具体步骤如下:(1)首先将人正常核型二倍体细胞同步化到G2/M期,制备染色体悬液;然后流式分选出21号单染色体。(2)采用多重退火环形扩增技术(MALBAC)对21号染色体DNA进行扩增;用扩增的DNA产物构建文库。(3)利用体外转录合成、生物素标记的RNA探针与文库进行液相杂交,捕获并验证捕获效率。荧光定量PCR检测结果证明,特定的21号染色体呈上百倍的富集,而靶标文库则富集了近60倍。结果提示,特异单染色体靶向富集方法成功建立。该法不仅可实现任一单染色体的靶向富集,用于单条染色体功能组学研究,而且还可能用于查找特定疾病相关的染色体异常(如DNA突变、异位、重复及倒置等),具有一定的实用意义。
- 谢德健张田甜师明磊张彦沈文龙叶丙雨李平何超张香媛赵志虎
- 关键词：高通量测序单染色体
- 基于荧光强度快速判断蛋白可溶性方法的建立
- 2012年
- 目的:建立一种通过观察荧光强度,快速、直观地判断蛋白可溶性的方法。方法:选择抗辐射蛋白CBL502-AA及其突变体CBL502-ΔAA′作为目的蛋白,增强型绿色荧光蛋白作为报告分子,分别构建融合蛋白表达载体;通过SDS-PAGE和荧光观察两种手段检测和比较融合蛋白的可溶性。结果:荧光观察融合蛋白的可溶性与SDS-PAGE检测结果一致。结论:建立了一种基于荧光强度,快速、简单、直观的比较蛋白可溶性的方法。
- 肖丽霞叶丙雨王洋师明磊何彰华张乐之赵玉军赵志虎
- 关键词：荧光绿色荧光蛋白
- 人miR-139高效真核表达载体的构建及其功能初探
- 2012年
- 目的构建人miR-139高效真核表达载体,初步探究miR-139在乳腺癌ZR75-1细胞中的功能。方法设计成熟miR-139的PCR引物,扩增包含miR-139成熟序列的基因组序列。将扩增产物亚克隆到真核表达载体PIRES2-EGFP(IE)上,构建miR-139真核表达载体IE-139。将IE-139转染至乳腺癌ZR75-1细胞中,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139的表达情况,同时检测过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc、EIF4G2和ZBTB34的mRNA水平。结果酶切、测序结果表明,人miR-139真核表达载体构建成功;qRT-PCR表明,miR-139能在乳腺癌ZR75-1细胞中高效表达(P<0.01),过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),但ZBTB34的下降水平不明显。结论成功构建了人miR-139真核表达载体IE-139,通过qRT-PCR检测,证明该载体能成功实现miR-139的高效过表达,并且miR-139能明显抑制乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平,这为进一步研究miR-139的功能及调控靶基因的分子机制奠定了基础。
- 张乐之张彦李德彬叶丙雨肖丽霞赵玉军赵志虎
- 关键词：真核表达载体QRT-PCR癌基因
- 一种构建Hi‑C高通量测序文库的方法
- 本发明公开了构建Hi‑C高通量测序文库的方法。本发明所提供的方法，具体可为方法一，依次包括如下步骤：(1)取解交联后的DNA，进行纯化和富集；(2)进行转座反应；(3)进行PCR扩增，获得文库。本发明所提供的方法，具体可...
- 叶丙雨何超赵志虎沈文龙
- 文献传递
