王小军
- 作品数:6 被引量:9H指数:2
- 供职机构:四川大学华西第二医院更多>>
- 发文基金:中央高校基本科研业务费专项资金四川省应用基础研究计划项目四川省杰出青年学科带头人基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 非小细胞肺癌细胞A549对紫杉醇耐药机理研究被引量:1
- 2016年
- 目的利用非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药株A549/taxol,研究其对紫杉醇耐药性的分子机理.方法通过长时间低浓度的紫杉醇处理A549细胞的方法获得其耐药细胞株A549/taxol,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR观察其凋亡基因的表达情况,并通过不同siRNA处理细胞进行基因沉默,研究其在不同遗传背景下对紫杉醇的耐受情况.结果发现非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药株A549/taxol的基因表达紊乱,表现为ING5的高表达抑制了凋亡基因Bcl-2的表达水平,而Bcl-2是紫杉醇诱导细胞凋亡所必需的.结论以上结果初探了A549对紫杉醇耐药性的机制,为探寻紫杉醇化疗新策略提供了新的思路.
- 郭莲娣王丹李佳川王鑫王小军
- 关键词:非小细胞肺癌紫杉醇BCL-2
- DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能及其在人卵巢癌中的突变研究被引量:2
- 2016年
- 目的在细胞水平上分析新发现的DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能,确定WDR70基因在人卵巢癌中的突变发生情况,以验证该基因的功能丢失是否与卵巢癌关联。方法在人细胞中用siRNA干扰WDR70基因表达,或用慢病毒和质粒过表达WDR70的野生型和突变体,通过免疫印迹和免疫荧光等方法研究该基因在DNA损伤后的亚细胞定位和DNA损伤信号通路中的作用;此外,抽提1例正常卵巢组织和16例卵巢癌标本的mRNA进行半定量RT-PCR扩增,对这些标本中的WDR70基因进行测序分析。结果 WDR70基因沉默和过表达其突变体导致同源重组功能蛋白——DNA复制蛋白A(RPA32)磷酸化修饰水平降低和重组酶——重组蛋白A(RAD51)向DNA损伤位点招募的能力减低;WDR70的功能障碍还导致染色体的断裂增多;同时,卵巢癌样本中发现多例WDR70突变型别。结论在体外系统中,WDR70参与DNA损伤修复过程,沉默或过表达其突变体将导致同源重组修复缺陷和染色体结构的不稳定;在卵巢癌基因组中,WDR70基因频繁出现突变,可能导致相应的DNA修复缺陷和基因组不稳定性的发生。因此,WDR70是一个潜在的卵巢癌抗癌基因。
- 郭莲娣王丹杨帆梁语珈杨雪琴覃意扬任来峰曾鸣唐子执王小军王思刘聪楼江燕陈杰
- 关键词:卵巢癌
- 乙型肝炎病毒抑制肝细胞免疫检查点PD-1配体基因表达的研究被引量:1
- 2017年
- 目的在细胞水平上分析乙型肝炎病毒(HBV)复制及其编码的X基因(HBx)表达对细胞基因表达谱的影响,特别是免疫相关基因表达水平的变化。方法通过慢病毒和pcDNA瞬时转染过表达HBx基因,利用RNA-Seq和RT-qPCR等方法检测免疫相关基因的表达水平,并在HBV复制细胞系中进行验证。结果 HBV复制和HBx表达可以剂量依赖性抑制免疫检查点程序性死亡分子1(PD-1)配体基因(PD-L1/CD274)的表达,而HBx基因的H-box突变体的表达失去该抑制效应。结论HBV/HBx具有抑制PD-L1/CD274基因表达的能力,在病毒感染的急性期解除抗原特异性T细胞激活的检查点,活化细胞毒性T细胞,这可能导致T细胞对高度复制的细胞进行攻击和清除,帮助病毒进入较低复制状态,达到病毒-宿主的平衡状态并奠定HBV慢性感染的基础。
- 郭莲娣王丹唐子执曾鸣王小军刘聪李友伟
- 关键词:HBX
- DNA损伤应答靶向抑制剂对卵巢癌细胞的化疗增敏作用被引量:3
- 2016年
- 目的观察DNA损伤应答抑制剂及其联合常规化疗药物(顺铂等)在卵巢癌耐药细胞株OVCAR-8中的作用,研究其化疗致敏效应。方法利用针对DNA损伤应答关键信号蛋白质的抑制剂,与顺铂等连用处理卵巢癌细胞,分析这些药物处理方式对卵巢癌细胞的杀伤能力。MTT法检测不同药物作用后OVCAR-8的增殖抑制情况;免疫荧光法检测OVCAR-8中磷酸化组蛋白2A变体(γH2AX)和p53结合蛋白1(53BP1)的表达,观察二者在DNA损伤位点的募集和形成灶点的能力。结果毛细血管扩张共济失调突变蛋白(ATM)/ATM和Rad 3相关蛋白(ATR)抑制剂与顺铂联用能抑制损伤修复机制的活化,明显减弱OVCAR-8细胞的增殖活力(P<0.01),促进其凋亡;在羟基脲和Wortmannin联合处理时,OVCAR-8细胞的ATR转导信号(如γH2AX)减弱,细胞生存率明显降低(P<0.05);多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂与顺铂联合处理OVCAR-8细胞未发现明显的增敏作用(P>0.05)。结论适当的DNA损伤应答抑制剂有潜力提高常规化疗药物的抗肿瘤效果,以达到快速清除肿瘤细胞和防止产生耐药性的效果。
- 蔡思源唐子执曾鸣王小军楼江燕刘聪陈杰
- 关键词:卵巢肿瘤顺铂耐药抑制剂
- 泛素结合酶RAD6多克隆抗体的制备及初步鉴定
- 2016年
- 目的为了给RAD6参与的泛素化修饰相关领域的研究提供参考,在大肠杆菌中原核细胞表达GST-RAD6重组蛋白并通过免疫家兔制备其多克隆抗体。方法以c DNA文库作为模板,构建重组载体p ET41a-GST-RAD6,转化至大肠杆菌表达菌株BL21中,诱导表达并纯化GSTRAD6融合蛋白,免疫家兔后制备其多克隆抗体,通过Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定其特异性及效价。结果成功构建了p ET41aGST-RAD6重组载体,得到了高纯度的重组蛋白,Western-Blot检测及染色质免疫共沉淀鉴定显示获得的血清抗体效价高,特异性强。结论成功制备的高效价兔抗人RAD6血清抗体可为RAD6调控的泛素化修饰相关领域的研究奠定基础。
- 郭莲娣王鑫王小军
- 关键词:重组蛋白多克隆抗体
- HPV E7与子宫颈上皮内瘤样病变细胞DNA损伤应答的相关性研究被引量:2
- 2016年
- 目的 通过原代培养HPV阳性的宫颈上皮内瘤变Ⅲ度(CINⅢ)的成纤维细胞与HPV阴性的小儿包皮成纤维细胞,探索HPV E7在DNA损伤应答过程中的作用。方法 选取临床病理确认为HPV16阳性的CINⅢ新鲜宫颈组织和HPV16阴性的小儿包皮组织,组织块经胶原酶A消化后培养,用慢病毒E7或pLV感染HPV16-成纤维细胞,用离子射线(X光,2Gy或5Gy)分别照射HPV16阴性与HPV16阳性细胞以及经pLV或E7慢病毒感染的细胞0-8h,诱导细胞DNA双链断裂,采用间接免疫荧光法检测DNA双链断裂应答相关蛋白53BP1、BRCA1、NBS1、RPA32的应答特征。结果成功从宫颈上皮内瘤变组织及小儿包皮组织原代培养出HPV16阳性及HPV16阴性的成纤维细胞。间接免疫荧光染色发现X光照射后,HPV16阳性细胞中53BP1、BRCA1、NBS1、RPA32灶点多于HPV16阴性细胞(P〈0.05),E7感染细胞中53BP1、RPA32、NBS1灶点少于pLV感染细胞(P〈0.05),均为6h(2Gy)或4h(5Gy)达峰。结论 利用原代培养CIN成纤维细胞成功建立了研究DNA损伤中E7作用的模型,在宫颈癌前病变发展过程中,HPV E7能够抑制DNA双链断裂修复应答反应。
- 曹寒雨王小军唐子执楼江燕
- 关键词:E7原代细胞培养DNA损伤